MEIA运用最新的荧光技术，被测物的乙型肝炎病毒检测方法的研究现状

2016-05-14黎燕琼

中外医学研究 2016年8期

黎燕琼

【摘要】目前乙型肝炎病毒（HBV）感染仍是一个较严重的公共卫生问题之一。全球有近3亿HBV携带者，我国占45%，准确、及时地检测HBV，对控制HBV传播、提高诊疗效果非常重要。随着HBV检测方法的不断发展，临床已广泛开展与其相关的检测技术，对防治HBV感染发挥了重要作用。目前HBV的检测方法主要有电子显微镜法、免疫学法、分子生物学法。本文对HBV几种检测方法进行综述。

【关键词】乙型肝炎病毒；检测方法

中图分类号 R512.6 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2016）8-0159-02

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.8.091

浓度通过测定荧光强度来检测，极微的荧光就能被特别的感光结构感应到，使其检测灵敏度更高。ELISA和MEIA对HBV血清标志物的检测均有较高的特异性，但ELISA的敏感性低于MEIA[12]。

化学发光微粒免疫检测法（CMIA）是目前应用较多的化学发光法。谭璐[13]报道ELISA和CMIA灵敏度差别不大，但从自动化程度和方法学角度看CMIA法优于ELISA法。

3 分子生物学法

3.1 HBV DNA检测技术

HBV DNA是HBV具有传染性和复制的标志，是判断抗HBV药物疗效的重要指标[14-15]。检测方法有PCR、支链DNA（bDNA）、核酸杂交、杂交捕获系统、基因芯片技术。荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）采用荧光技术和闭管检测，完全克服了常规PCR方法操作繁杂，不能准确定量、产物间的交叉污染、重复性差和强致癌物溴化乙啶的使用造成的环境污染[16-18]。目前的试剂盒多采用FQ-PCR进行HBV DNA的定量检测。bDNA技术的缺点是放大倍数少、检测范围窄、敏感性低，不适用于低水平检测。袁静等[19]报道FQ-PCR用于HBV DNA含量的检测灵敏度明显高于bDNA法。核酸杂交包括斑点杂交和液相杂交。基因芯片技术为近几年发展的新技术，根据HBV高度保守的特异性基因序列设计寡核苷酸探针制备基因芯片，将待测患者的样本进行PCR扩增，PCR扩增的同时进行产物荧光标记，标记产物与基因芯片进行杂交，杂交结果经扫描仪读数并输出图像，然后通过计算机分析，从而检测样本是否存在病毒感染[20]。由于基因芯片可以一次性对大量序列进行检测分析，具有快速、高通量、并行等特点，解决了传统核酸印迹杂交技术自动化程度低、检测序列少、操作繁杂、效率低的缺点[21]。

3.2 HBV耐药性检测技术

目前临床上应用的HBV耐药性检测主要是针对HBV DNA聚合酶P基因的检测，鉴别野生型（YMDD）及耐药突变型（YVDD、YIDD），检测结果可为抗病毒药物治疗中HBV耐药性的产生提供依据，以指导临床用药和监测病情。常用的检测方法有FQ-PCR、核酸杂交和基因芯片技术等。

3.3 HBV基因分型

常用FQ-PCR、PCR-反向点杂交法（PCR-RDB）、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）、DNA测序和基因芯片技术进行HBV基因分型。上述方法各有优缺点。基因测序除能准确确定病毒株基因型、亚型外，还能发现其他方法很难鉴别的重组病毒株，是检测病毒基因变异公认的金标准，但是技术要求高，价格昂贵，操作复杂，很难常规开展。实时荧光PCR、多位点基因芯片技术等只能检测单一突变位点[22]。刘蒙等[23]用PCR-RFLP技术检测维生素D受体（VDR）Fok I基因的多态性在慢性乙肝患者的分布，并进行基因型分析，认为VDR Fok I基因的多态性与慢性乙肝患者的不同临床表型存在一定的关系。王丹等[24]用PCR-RFLP技术检测高迁移率族蛋白B1（HMGB1）第4内含子1176G/C多态性，认为HMGB1基因多态性与HBV感染后原发性肝癌的发生有关联。

综上所述，由于HBV是一种变异较高的病毒，免疫学方法检测的是表型指标，而且免疫学指标的出现晚于HBV DNA的出现。随着对HBV的不断深入研究，PCR技术和分子生物学技术的应用，大大提高了HBV检测的准确度，实现了对HBV DNA的定量检测，能够准确地判断HBV在体内的复制情况。但是这些检测技术的成本相对较高，在国内的普及有一定难度。因各种检测方法的灵敏度和特异性均不同，在临床中，医生可结合患者的具体情况进行选择，为提高临床确诊率，必要时采用多种方法联合检测。

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