乙型肝炎病毒检测方法的研究现状

黎燕琼

【摘要】 目前乙型肝炎病毒（HBV）感染仍是一个较严重的公共卫生问题之一。全球有近3亿HBV携带者，我国占45%，准确、及时地检测HBV，对控制HBV传播、提高诊疗效果非常重要。随着HBV检测方法的不断发展，临床已广泛开展与其相关的检测技术，对防治HBV感染发挥了重要作用。目前HBV的检测方法主要有电子显微镜法、免疫学法、分子生物学法。本文对HBV几种检测方法进行综述。

【关键词】 乙型肝炎病毒； 检测方法

中图分类号 R512.6 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2016）8-0159-02

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.8.091

乙型病毒性肝炎是一种广泛传播、危害严重的传染性疾病，其病原体是HBV，HBV主要经血液和血制品等传播、母婴传播及接触传播。HBV感染是一个世界性的公共卫生问题，全球有近3亿HBV携带者，我国占45%[1]。急性乙肝有20%会转化为慢性乙肝，进而可能发展为肝硬化和肝癌[2]。HBV属嗜肝DNA病毒科，基因组长为3.2 kb。HBV基因组是不完全闭合环状双链DNA，是目前已知感染人类最小的DNA病毒[3]。HBV具有严格种属及器官特异性，感染人体后侵袭的主要是肝细胞，并在肝细胞内定居复制。目前认为机体免疫调节紊乱和免疫功能低下是HBV持续存在并形成慢性肝细胞损伤的主要原因[4]。

1 电子显微镜法

电子显微镜法主要包括常规电镜法和免疫电镜法。英国学者Dane于1970年使用电镜发现了完整的感染性病毒颗粒，即Dane颗粒。常规电镜法具有观察比较直观、标本用量小、制样速度快的特点，但由于其观察灵敏度较低而要求病毒在标本中大量存在，该法在日常应用中受到一定限制。免疫电镜术是将免疫化学技术与电镜术结合，是在超微结构水平下观察和研究抗原、抗体结合定位的一种方法，该方法的敏感性较常规电镜法高，能提高HBV的检出率，但该方法对操作者的技术要求较高，样本制备过程较复杂[5]。由于电子显微镜检查难以在临床常规开展，故检查HBV感染一般不用该类方法。

2 免疫学法

HBV感染的病原学诊断方法临床上最常用的是检测HBV标志物。传统的两对半即HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb是HBV免疫标志物的血清学检查的常规项目，近年来有文献[6-8]报道前S1抗原与HBV、DNA及HBeAg三者间有显著的相关性，可作为补充性免疫指标。目前常用的免疫学检测有酶免疫法（EIA）、微粒子酶免分析法（MEIA）或化学发光法（CIA）等，临床应用最广泛的方法是ELISA和CIA。

早期的放射免疫法（RIA）有较高的检测灵敏度，缺点是操作复杂、标记物不稳定、对人体及环境造成放射性污染。逐步发展起来的有酶联免疫吸附技术（ELISA）、胶体金免疫层析技术（CICA）、时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）、微粒子酶免疫分析（MEIA）及电化学发光免疫法（ECLIA）[3]。其基本原理是将酶与抗体或抗原结合成酶标记抗体或抗原，在酶标抗体（抗原）与抗原（抗体）的特异性反应完成后，加入酶的相应底物，通过酶对底物的显色反应，对抗原（抗体）进行定位、定性或定量的测定分析，上述各种方法只是标记物和吸附表面的不同。固相放射免疫法（SPRIA）灵敏度高，比ELISA法的灵敏度高20倍，检测生物活性物质可达pg水平，但因对环境造成污染，同位素稳定性差等原因，已很少用于HBV标志物的检测。ELISA法特异性高，灵敏度一般认为在0.05 ng/ml水平，目前应用最广，其优点为标记的试剂无放射性危害且比较稳定，但ELISA法易受酶纯度和外界环境影响[4-5]。CICA标志物为胶体金，利用层析技术来检测抗原或抗体，优点是不需仪器，操作快速、简便，有助于减少医源性HBV感染，主要用于急诊患者创伤性操作前快速过筛检测[9]。

近年来发展起来的TRFIA是稀土离子标记抗原或抗体、核酸探针和细胞等为特征的灵敏度远超过放射性同位素的检测技术，且具有标记物制备简便、无放射性污染、存储时间长、操作流程短、不受样品自然荧光干扰、标准曲线范围宽、检测重复性好等优点，是一种理想的乙肝两对半定量检测方法，特点是能检测低水平的HBV标志物，在临床中值得推广[10]。富宏然[11]报道TRFIA法检测的特异性、敏感性均比ELISA法高。