滋阴通络颗粒中柚皮苷的含量测定

薛晓娜，李慧峰，荆 然，程艳刚，裴妙荣

（山西中医学院，山西太原030024）

滋阴通络颗粒中柚皮苷的含量测定

薛晓娜，李慧峰，荆 然，程艳刚，裴妙荣

（山西中医学院，山西太原030024）

目的：建立测定滋阴通络颗粒中柚皮苷含量的HPLC法。方法：采用Diamonsil C18柱（200mm×4.6mm，5μm）色谱柱；以甲醇-0.5%冰醋酸溶液为流动相，流速为1.0 mL/min，柱温为30℃，检测波长为283 nm。结果：柚皮苷在0.086～1.72μg范围内呈良好的线性关系，r=0.999 5；平均回收率为99.54%；RSD为1.60%（n=6）。结论：该方法简便、准确、灵敏度高、重复性好、稳定性高，可作为该制剂含量的测定方法。

滋阴通络颗粒；柚皮苷；HPLC；含量测定

滋阴通络颗粒由生地黄、麦冬、枳实、当归、甘草等九味中药组成，具有滋阴清热、通腑醒神的作用，用于脑血管病早期或后遗症期津亏热结、腑气不通等症的治疗。为了建立该制剂的质量标准，本文采用HPLC法对处方中枳实的有效成分柚皮苷进行了含量测定，现报道如下。

1 实验材料

1.1 实验仪器

Waters2695（美国）高效液相色谱仪，Waters2998紫外二极管阵列检测器，Empower色谱工作站（美国沃特世公司）。AB135-S电子天平（十万分之一，瑞士METTLER TOLEDO）；SB-5200DTDN型超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；DHG-9075A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）。

1.2 试剂与药材

滋阴通络颗粒（3批，批号分别为20130718、20130719、20130720）由山西中医学院中药化学教研室提供；柚皮苷对照品（批号：110722-201111，中国药品生物制品检定所）；流动相所用甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Diamonsil C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.5%冰醋酸溶液（33∶67），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为283 nm。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取柚皮苷对照品适量，精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每毫升含柚皮苷1.72mg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品内容物适量，研细，取约0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理（功率150W，频率40 KHz）30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备 取缺枳实药材的滋阴通络颗粒阴性样品适量，研细，取约0.8 g，精密称定，照供试品溶液制备方法制备，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验 分别精密吸取滋阴通络颗粒对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL，在“2.1色谱条件”下注入液相色谱仪中进行测定，测定结果显示，供试品溶液中柚皮苷色谱峰达到完全分离，阴性对照溶液中相应位置无干扰。结果见图1～图3。

图1 柚皮苷对照品色谱图

图2 供试品溶液色谱图

图3 阴性对照溶液色谱图

2.3.2 线性关系的考察 精密吸取柚皮苷对照品溶液（0.086 mg/mL）0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.6、2.0 mL至2mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得不同浓度的对照品溶液。分别进样10μL，测定峰面积积分值。以峰面积积分值y为纵坐标，进样量x为横坐标做标准曲线，得一直线回归方程：y=1 759.3x-19 667，r= 0.999 5，结果表明，柚皮苷进样量在86～1 720 ng范围内与峰面积呈良好线性。

2.3.3 精密度实验 精密吸取柚皮苷对照品溶液（0.086 mg/mL）10μL，分别进样6次，测定峰面积积分值。测得柚皮苷含量的RSD=0.31%，表明精密度良好。

2.3.4 稳定性实验 取供试品溶液（批号20130719）在0、2、4、6、8、10、12 h分别进样10μL，测得样品中柚皮苷峰面积积分值。得柚皮苷含量的RSD=1.17%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.3.5 重复性实验 按拟定的含量测定方法，对同一批样品（批号20130719）分别制备6份供试品溶液，精密吸取10μL进样，测定峰面积积分值并计算含量，得RSD=1.70%。表明该方法重复性良好。

2.3.6 回收率实验 采用加样回收法实验，精密称取已知含量的样品（批号20130719，5.55mg/g）6份，分别精密添加柚皮苷对照品适量，按样品测定项下操作，计算回收率，结果平均加样回收率为99.54%，RSD=1.60%（n=6）。结果见表1。

表1 回收率实验结果

2.3.7 样品的含量测定 按上述方法对3批样品进行柚皮苷含量测定，结果见表2。

表2 样品中柚皮苷含量测定结果

3 讨 论

本实验所用的对照品为柚皮苷，在流动相的选择时，首先参考2010版《中国药典》［1］中化橘红的测定方法选择甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）为流动相，但是此条件下色谱峰不能达到很好的分离，参考文献［2］，并通过多次实验比较最终确定以甲醇-0.5%冰醋酸溶液（33∶67）进行洗脱，结果较好。

本实验采用HPLC法，建立了滋阴通络颗粒中柚皮苷含量测定的方法。实验方法的线性、精密度、稳定性和重复性等方法学考察结果良好，操作简便可行，可以作为该制剂含量测定的有效方法。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：80-81.

［2］盛华刚.HPLC测定枳实薤白桂枝汤颗粒中柚皮苷的含量［J］.食品与药品，2013（2）：126-128.

（编辑：翟春涛）

Determ ination of naringin in Ziyin Tongluo granules by HPLC

Xue Xiaona，Li Huifeng，Jing Ran，Cheng Yangang，PeiMiaorong
（ShanxiCollege of TCM，Taiyuan Shanxi030024）

Objective：To establish amethod for determining the content of naringin in Ziyin Tongluo granules by HPLC. Method：The separation was performed on Diamonsil C18（200mm×4.6mm，5μm），and themobile phasewas consisted of a methanol-0.5%Glacial acetic acid with a flow-rate of 1.0 mL/min.The temperature was 30℃and the detection wavelength was at 283 nm.Results：Naringin was in good linear in the range of 0.086～1.72μg，r=0.999 5，and the average recovery rate was 99.54%，RSD=1.60%（n=5）.Conclusion：The method is simple，reliable and good repeatability and could be used for determination of the Ziyin Tongluo granules.

Ziyin Tongluo granules；naringin；HPLC；content determination

R285

A

1671-0258（2016）01-0031-02

薛晓娜，在读硕士，E-mail：755268028@qq.com

裴妙荣，教授，博士研究生导师，E-mail：peimr602@163.com