CHD5及K－ras蛋白在大肠癌组织中的表达①

周　昱，廉奇鑫，王　新

(佳木斯大学附属第一医院肿瘤科，黑龙江佳木斯154003)



CHD5及K－ras蛋白在大肠癌组织中的表达①

周昱，廉奇鑫，王新

(佳木斯大学附属第一医院肿瘤科，黑龙江佳木斯154003)

摘要:目的:通过研究CHD5和K－ras在结直肠癌组织中的各自临床病理学指标的检测、分析各自不同表达程度探索性讨论二者是否具有相关性。方法:采用免疫组探索CHD5和K－ras在大肠癌组织中的表达。结果:①所选结直肠癌组织及其相应的癌旁正常组织中，CHD5表达阳性率分别为32.50% (13/40)与72.50% (29/40)，所以在结直肠癌旁正常组织中CHD5蛋白多为明显阳性表达。经统计学系统运算明确发现: CHD5蛋白的表达与所选患者组织分化程度、肿瘤临床Dukes分期、淋巴结转移情况以及预后好坏程度有关(均P＜0.05)，与直肠肿瘤浸润的深度、患者的年龄、性别、肿瘤大小范围无关(P＞0.05)。②所选结直肠癌组织及其相应的癌旁正常组织中，K－ras蛋白表达的阳性率分别为67.5% (27/40)与37.50% (15/40)，并且所选结直肠癌组织中K－ras蛋白多为阳性表达。经系统的统计学分析发现，K－ras蛋白的表达与患者肿瘤的组织分化程度、肿瘤临床Dukes分期、淋巴结转移情况以及预后的好坏程度关系非常密切(P＜0.05)，相反与、结直肠肿瘤浸润深度、肿瘤大小范围及结直肠癌患者年龄、性别无相关性(P＞0.05)。结论:①在结直肠癌组织中CHD5表达下降与浸润深度、组织分化程度、患者是否出现淋巴结转移以及TNM分期有关，②K－ras在胃正常组织中表达不明显，在胃癌中高表达。且与浸润深度、组织分化程度、是否出现淋巴结转移以及TNM分期密切相关。③CHD5与K－ras表达具有负相关性，提示二者有彼此制约、相互拮抗的作用。

关键词:结直肠癌; CHD5; K－ras

结直肠癌是人类最常见的肠道系统恶性肿瘤之一［1］，位居第三位并且逐年显著增加的也是本课题所深入研究组织标本—结直肠癌(colorectal cancer，CRC)，因结直肠癌导致死亡占据全部癌症致死比例大约有10%［2］，其发病比例更是长期占据发展中国家成人非良性肿瘤发生比例的第五席位。结直肠癌作为成年人消化道常见的恶性肿瘤，令临床工作者感到困惑的便是其居高不下的发病率和死亡率，在这方面略低于胃癌及食道癌［3］，本实验研究在结肠癌中CHD5和K－ra是否有的表达及两者之间有无意义，为结肠癌早期诊断及预后提供科学依据。

1　资料与方法

1.1标本来源

选取2012－09～2015－07佳木斯大学附属第一医院病理科取外科部分第一次结直肠癌手术切除后，均能保证术后病理学诊断明确、术中切除组织边缘证实阴性、临床资料信息完整。本实验反复对比选择并且都经临床病理准确诊断的40例标本蜡块，术后均由经验丰富的病理科医师进行病理学确认，患者实施手术前都未曾进行肿瘤放射治疗、抗肿瘤化学药物应用及全身抗癌生物学免疫治疗。所选结直肠癌标本中男21例，女19例，标本年龄39～74 岁(中位年龄51岁)。采用2010年国际抗癌联盟/美国癌症联合委员会Dukes分期标准各期所占比例为: A + B期24(60%)，C + D期16(40%)，结合术后病理资料学及多项影像检查能够充分证实高、中分化22例(55%)，低分化18例(45%)存在淋巴结转移20例(50%)，不存在淋巴结转移20例(50%)。详细采集病史、家族史、肠镜检查报告、系统查体情况、肿瘤标志物系列检查结果，资料比较差异均无统计学意义(P＜0.05)。

1.2主要试剂

鼠抗CHD5(染色质解旋酶DNA结合蛋白5)抗体购自上海联硕生物科技有限公司，鼠抗K－ras(突变型)抗体购自北京博奥森生物科技有限公司。

1.3免疫组化

通过免疫组化方法(Elivision法)探索CHD5和K－ra在为癌及正常癌旁组织中的表达情况。

1.4结果判定

采用经典双盲法对实验结果进行认真的观察比较和仔细记录。阳性的细胞的判定标准为细胞中有棕黄色颗粒，CHD5蛋白阳性反应为棕黄色颗粒在肿瘤细胞的细胞核及细胞质中均有分布，但其在结直肠癌组织中核表达明显强于胞质表达，而K－ras蛋白主要分布于肿瘤细胞的细胞质中。根据在同类细胞中阳性细胞数所占的比例进行划分、登记，并采用半定量积分的方式对免疫组织化学染色的结果进行分级，即根据细胞染色强度(A)和染色细胞所占的比例(B)积分之积(A + B)来判定。染色强度A分为4级:无特意染色为0分、轻度染色(淡黄色) 为1分、中度染色(棕黄色)为2分、强染色(深棕黄色)为3分;根据在同类细胞中，棕色细胞数所占的百分比，将B(染色细胞所占的比例)分为5级:＜5%的为0分、5%～25%为1分、26%～50%为2分、51%～75%为3分、＞75%的则为4分。判断表达结果的标准时阳性细胞百分比得分与强度得分之和，不同的积分代表不同的阳性强度，总积分在0～1分之间则表示阴性(－)、总积分之在2～7分则表示阳性，也就是说A + B≤1是阴性，A + B＞1是阳性。阳性强度分级则以不同积分标准校对即2～3分为弱阳性(+ )、4～7分为强阳性(+ + )［4］。CHD5以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性。在400倍视野下观察肿瘤细胞，每个视野观察100个肿瘤细胞，随机计算5个视野，以细胞不着色或小于5%的细胞着色为阴性，多大于5%的肿瘤细胞着色为阳性。

1.5统计学方法

采用SPSS17.0软件进行统计学处理，同样采用经典的计数资料χ2检验进行分析，运用Spearman等级相关分析在结直肠癌及同一标本癌旁正常组织中两种CHD5及K－ras蛋白表达之间的相关性P＜0.05表示具有统计学差异。

2　结果

2.1 IHC法检测CHD5在结直肠癌组织与癌旁正

常组织的表达

通过IHC法检测，所采集40例结直肠癌组织中，CHD5的阳性表达率为32.50% (13/40)，低于同一标本的癌旁正常组织的72.50% (29/40)，二者差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.2 IHC法检测K－ras蛋白在结直肠癌组织与癌

旁正常组织的表达

本通过IHC法检测，在所有40例结直肠癌组织中，K－ras的阳性表达率为67.5% (27/40)，高于同一标本的癌旁正常组织的37.50% (15/40)，二者差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表1　CHD5蛋白在结直肠癌组织癌以及旁正常组织细胞中的表达

表2　K－ras在正常组织和肿瘤组织中的表达

2.3结直肠癌组织中CHD5与K－ras蛋白的表达

与临床病理参数之间的关系

结合结直肠癌标本中CHD5蛋白的免疫组织化学实验结果和病例的临床病理资料，分析显示:结直肠癌组织中CHD5蛋白表达程度与结直肠癌肿瘤学行为病理学表象、临床Dukes分期的情况、肿瘤不同分化程度的高低以及是否存在淋巴结转移的均存在相关性。见表3。

表3　结直肠癌组织CHD5蛋白的表达与临床病理参数之间的关系［例(%)］

表4　结直肠癌中CHD5与K－ras蛋白的关系

2.4结直肠癌组织中CHD5与K－ras表达水平的相关性

本实验研究中，免疫组织化学结果显示: 40例结直肠癌患者中，肠癌组织胞核CHD5与K－ras均阳性表达者仅4例，胞核CHD5与K－ras蛋白均阴性表达者4例。运用Spearman等级相关分析进行研究分析，结果显示:等级相关系数r =－0.527，具有统计学意义(P＜0.01)，提示结直肠癌中胞核CHD5与K－ras蛋白表达呈负相关。见表4。

3　讨论

CHD5作为染色质解旋酶DNA结合蛋白家族最新一员，经由p19Arf/p53路径来完成调控细胞增殖、衰亡等一系列演变，并且仍能通过自身的杂合缺失来识别并调控很多靶基因，诱导靶基因从而抑制其降解，参与靶基因调控，调节肿瘤细胞不断生长、增殖、分化、信号的转导、转录及翻译、血管的新生、蛋白质转运、细胞的凋亡以及其新陈代谢等多种生理生化过程。K－ras蛋白则是一种比较常见和熟悉原癌基因，其所调控肿瘤学行为的通路开关功能更是很早就被人们所熟知并应用于临床，属于ras基因家族的成员［5］。K－ras蛋白的突变能诱导多种靶基因发生变化，并相互作用，导致多种靶基因的增殖显著［6］。恶性肿瘤通常都具有慢性炎症性疾病的特点，CHD5及K－ras蛋白均不同程度通过调节介导炎性细胞因子的增殖，促进相关炎症基因的表达，从而在肿瘤形成极初期中起到一定的推动作用［6，7］。进一步我们可以大胆推断: CHD5及K－ras蛋白共同成为常规结直肠肿瘤标志物服务于早期肿瘤学行为的精准检测项目指日可待。综上所述，本实验经Spearman等级相关分析，具有统计学意义(r =－0.527，P＜0.01，)提示结直肠癌肿瘤学行为发生、发展的过程中CHD5及K－ras蛋白表达呈负相关。在不久的将来极有可能通过联合检测对比CHD5和K－ras蛋白在结直肠组织中的表达情况，如发现CHD5蛋白表达阴性的同时K－ras在结直肠组织中表达阳性，可以为临床提供该检测结直肠组织有可能癌变的金标准。所以我们可以大胆的设想:未来临床检测CHD5和K－ras在结直肠肠组织中的表达水平，对评价结直肠癌恶肿瘤学行为早期发现、监控结直肠癌患者疾病进展、判定恶性程度和预测预后至关重要。

参考文献:

［1］陈福军，于海涛，赵斌，等.CD44V6和RAB5a在结肠癌中的表达及相关性研究［J］.黑龙江医药科学，2012，35(3) : 7－8

［2］Markku HR，Hirvikoski VP，Ristim ki A，et al.CHD5 expression is a marker of poor prognosis in renal cell carcinoma［J］.Tumor Biol，2011，32: 481－487

［3］Claret FX，Hibi M，Dhut S，et al.A new group of conserved coactivators that increase the specificity of AP－1 transcription factors［J］.Nature，1996，383(6599) : 453－457

［4］任占平，黄键辉，石喆，等.免疫组织化学反应结果判断标准［J］.中国肿瘤学杂志，2009，6(4) : 229－231

［5］李晟，蔡琳，刘启玲，等.结直肠癌中k－ras基因突变与Fascin1蛋白表达的相关性［J］.临床与实验病理学杂志，2015，31(8) : 869－872

［6］Ikeguchi M，Sakatani T，Endo K，et al.Computerized nuclear morphometry is a useful technique for evaluating the high metastic potiential of colorectal adenocarcinoma［J］.Cancer，1999，86(10) : 1944－1951

［7］Barbacid M，Saito H，Clement JM.Ras genes［J］.Ann Rev Biochem，2003，5(6) : 779－827

(收稿日期:2015－12－07)

通讯作者:王新(1962～)男，黑龙江佳木斯人，硕士，主任医师，硕士研究生导师。E－mail: zhouyu731@126.com。

作者简介:周昱(1969～)男，黑龙江集贤人，学士，副主任医师，硕士研究生导师。

基金项目:①1.黑龙江省青年基金项目，编号: QC2013C013; 2.佳木斯大学青年基金项目，编号: sq2013－013。

中图分类号:R735.3+4

文献标识码:A

文章编号:1008－0104(2016) 02－0039－03