新型吲唑类PARP-1抑制剂的合成及其生物活性评价

龙 伟, 邱文革*, 胡云雁, 宋丽云, 李海军, 何 洪*

(1. 北京工业大学 环境与能源工程学院 绿色催化与分离北京市重点实验室，北京 100124；

2. 贝达药业股份有限公司，北京 100176)

·研究论文·

新型吲唑类PARP-1抑制剂的合成及其生物活性评价

龙 伟1, 邱文革1*, 胡云雁2, 宋丽云1, 李海军2, 何 洪1*

(1. 北京工业大学 环境与能源工程学院 绿色催化与分离北京市重点实验室，北京 100124；

2. 贝达药业股份有限公司，北京 100176)

以3-甲基-2-硝基苯甲酸甲酯为起始原料，经两步反应制得中间体1H-吲唑-7-甲酸甲酯(3)； 3分别与三氯氧磷、液溴和碘单质反应制得3的3-位卤代产物(4b～4d)； 4d与氟试剂或氰化锌反应制得3-氟(氰基)-3(4a和4e)； 4d与苯硼酸或甲基硼酸在四三苯基磷钯催化下反应制得3-甲基(苯基)-3(5a和5b)；以氢化钠为碱，3, 4a～4c, 4e, 5分别与4-甲烷磺酰氧基哌啶或3-甲烷磺酰氧基四氢吡咯经缩合反应制得3的2，3-位取代产物(6a～6n)； 6a～6n在甲醇中氨解，随后采用氯化氢气体脱去Boc保护基合成了14个新型吲唑类PARP-1抑制剂(7a～7n)，其结构经1H NMR和ESI-MS表征。生物活性评价结果显示，有7个目标化合物对PARP-1酶活性抑制IC50低于30 nmol·L-1,其中2-(四氢吡咯-4-基)-2H-吲唑-7-甲酰胺(7e)和3-氟-2-(四氢吡咯-4-基)-2H-吲唑-7-甲酰胺(7f)的IC50分别为4.2 nmol·L-1和4.6 nmol·L-1。

3-甲基-2-硝基苯甲酸甲酯； 吲唑； PARP-1抑制剂； 合成； 生物活性

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARPs)是存在于真核细胞中催化聚ADP核糖化的细胞核酶[1]。PARPs不仅在基因完整性监视，DNA损伤修复和细胞凋亡中发挥至关重要的作用，同时也是肿瘤发展和炎症发生过程中的主要转录因子[2]。PARPs的亚型至少有18种，其中PARP-1是最先被发现的，用于对肿瘤、炎症、中风、糖尿病、神经退行性疾病和心肌缺血等疾病的治疗[3]。近年来，小分子PARP-1抑制剂成为抗肿瘤药物开发的重要靶点。已有研究表明，PARP-1抑制剂可以增加肿瘤细胞对细胞毒类化疗药物的敏感性，可以作为增敏剂与之联合用药[4]。此外，其单一制剂对BRCA基因突变细胞株的生长抑制作用也非常明显[5]。2014年，FDA批准了全球第一个PARP-1抑制剂——奥拉帕尼(Olaparib)用于治疗BRCA基因突变的卵巢癌患者[6]，目前还有多个PARP-1抑制剂正处于临床II/III期研究阶段[7]。PARP-1通过催化NAD+的水解，引发多聚(ADP-核糖)(PAR)向各自质膜以及核蛋白上聚合[8-9]。该行为提高了DNA修复蛋白向单链断裂DNA聚集度，通过随后的碱基切除修复了受损的DNA[10]。目前已有的PARP-1抑制剂大多具有类似NAD+中烟酰胺片段的结构，其作用于PARP-1 的催化活性位点从而发挥抑制作用[11]。

本文通过分析Niraparib(MK-4827， Chart 1)的分子结构，采用电子等排原理[12-14]，设计并合成了结构新颖的PARP-1小分子抑制剂并评价其生物活性:(1)保留吲唑7-位的氨甲酰基，作为氢键接受体和供给体;(2)吲唑的3-位引入不同基团，调节药物代谢稳定性;(3)吲唑的2-位引入哌啶基或四氢吡咯基改进分子溶解性等理化性质。

Chart 1

以3-甲基-2-硝基苯甲酸甲酯(1)为起始原料，经Pd/C催化还原制得中间体3-甲基-2-氨基苯甲酸甲酯(2)； 2与亚硝酸异戊酯在乙酸酐催化下反应制得1H-吲唑-7-甲酸甲酯(3)； 3分别与三氯氧磷、液溴和碘单质反应制得3的3-位氯，溴或碘取代产物(4b～4d)； 4d与1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸)盐(氟试剂)或氰化锌反应制得3-氟(氰基)-3(4a和4e)； 4d与苯硼酸或甲基硼酸在四三苯基磷钯催化下反应制得3-甲基(苯基)-3(5a和5b)；以氢化钠为碱，3, 4a～4c, 4e, 5分别与4-甲烷磺酰氧基哌啶或-3-甲烷磺酰氧基四氢吡咯经缩合制得3的2，3-位取代产物(6a～6n)； 6a～6n在甲醇中通入氨气进行氨解，随后在二氯甲烷中通入氯化氢气体，脱去Boc保护基合成了14个新型吲唑类PARP-1抑制剂(7a～7n， Scheme 1)，收率57%～79%，其结构经1H NMR和ESI-MS表征。并对其生物活性进行了评价。

Scheme 1

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

YRT-3型药物熔点仪；Varian 300 MHz型核磁共振仪(DMSO-d6为溶剂,TMS为内标)；LCMS-2010A型液相色谱质谱联用仪；Victor X5型多功能酶标仪。

PARP-1试剂盒，货号4677-096-K，美国Trevigen公司；薄层层析硅胶和柱层析用硅胶，青岛海洋化工厂；其余所用试剂均为分析纯，上海国药集团和阿拉丁试剂公司。

1.2 合成

(1) 2的合成

在反应瓶中加入1 5.0 g(25.6 mmol)和甲醇60 mL,搅拌使其溶解；加入Pd/C 0.5 g，通氢气，于室温反应3 h(TLC监测)。过滤，滤液减压蒸干得黄色油状物2 4.0 g,收率95%。

(2) 3的合成

在反应瓶中加入2 4.0 g(24.2 mmol)，乙酸酐7.5 g(73.5 mmol)和三氯甲烷50 mL，搅拌下于室温反应1 h；依次加入亚硝酸异戊酯8.5 g(72.6 mmol)，乙酸钠0.7 g(8.5 mmol)和乙酸酐7.5 g(73.5 mmol)，回流反应18 h(TLC监测)。减压蒸除溶剂，加水150 mL，用乙酸乙酯(3×60 mL)萃取，合并萃取液，依次用饱和NaCl溶液(2×50 mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干得粗品。用甲醇(50 mL)溶解，加入Na2CO35.0 g(47.2 mmol)，搅拌下反应1 h。过滤，滤液蒸干，加水100 mL(析出固体)，过滤，滤饼经硅胶柱层析[洗脱剂：A=V(甲醇) ∶V(二氯甲烷)=1 ∶20，Rf=0.65]纯化得白色固体3 3.2 g，收率75%。

(3) 4b～4d的合成(以4d为例)

在反应瓶中依次加入3 3.0 g(17.0 mmol)，甲醇50 mL和NaOH 0.8 g(20.0 mmol)，搅拌使其溶解;于室温分批加入碘单质5.2 g(20.0 mmol)，加毕(0.5 h)，反应1 h(TLC监测)。过滤，滤液蒸干，加入饱和亚硫酸钠溶液45 mL，搅拌0.5 h(析出固体)，过滤，滤饼干燥得淡黄色固体3-碘-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(4d)4.5 g，收率86%。

用类似方法合成淡黄色固体4b和4c。

(4) 4a和4e的合成(以4a为例)

在反应瓶中依次加入4d 200 mg(1.14 mmol)，乙酸2 mL和乙腈15 mL，搅拌使其溶解，于室温分批加入氟试剂600 mg(1.71 mmol),加毕(0.5 h)，回流反应12 h(TLC监测)。蒸干反应液，加水20 mL，用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取，合并萃取液，用无水硫酸钠干燥，蒸干得粗品，经硅胶柱层析[洗脱剂：V(乙酸乙酯) ∶V(石油醚)=1 ∶10，Rf=0.45]纯化得白色固体4a 120 mg，收率54%。

用类似方法合成淡黄色固体4e。

(5) 5a和5b的合成(以5b为例)

在反应瓶中依次加入4d 4.1 g(13.6 mmol)，苯硼酸1.8 g(14.8 mmol)， Pd(PPh3)41.6 g(1.4 mmol)， Na2CO35.7 g水(20 mL)溶液和DMF 60 mL，氮气保护，搅拌下于95 ℃反应20 h(TLC监测)。冷却至室温，加水150 mL，用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取，合并萃取液，用饱和NaCl溶液(2×70 mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干得粗品，经硅胶柱层析(洗脱剂：A=1 ∶30，Rf=0.55)纯化得白色固体3-苯基-1-H吲唑-7-甲酸甲酯(5b)2.8 g，收率82%。

用类似方法合成白色固体5a。

(6) 6a～6n的合成(以6d为例)

在反应瓶中加入5b 2.5 g(9.9 mmol)和DMF 30 mL，冷却至0 ℃，搅拌下分批加入氢化钠0.7 g(11.6 mmol)，加毕，于95 ℃反应1 h;加入1-叔丁氧羰基-4-甲烷磺酰氧基哌啶3.3 g(11.6 mmol)，于95 ℃反应20 h(TLC监测)。冷却至室温，倒入冰水中，用乙酸乙酯(3×40 mL)萃取，合并萃取液，依次用饱和NaCl溶液(3×50 mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，经硅胶柱层析(洗脱剂：A=1 ∶30，Rf=0.63)纯化得白色固体3-苯基-2-(1-叔丁氧羰基-哌啶-4-基)-2-H吲唑-7-甲酸甲酯(6d)3.5 g，收率81%。

用类似方法合成白色固体6a～6c和6e～6n。

(7) 7a～7n的合成(以7a为例)

在玻璃封管中加入6a 3.0 g(8.7 mmol)和甲醇30 mL，通入氨气2.0 g(117.6 mmol)，于60 ℃密闭反应20 h(TLC监测)。冷却至室温，减压蒸干溶剂，残余物加入二氯甲烷50 mL，搅拌使其溶解，冷却至0 ℃，通入氯化氢气体，搅拌下反应1 h。过滤，滤饼经硅胶柱层析(洗脱剂：A=1 ∶30，Rf=0.47)纯化得白色固体2-(哌啶-4-基)-2H-吲唑-7-甲酰胺(7a)1.38 g。

用类似方法合成白色固体7b～7n。

7a： 收率65%, m.p.166～168 ℃;1H NMRδ: 9.33(s, 1H), 9.01(s, 1H), 8.68(s, 1H), 8.52(br s, 1H), 8.01(d,J=7.2 Hz, 1H), 7.96(d,J=8.7 Hz, 1H), 7.93(br s, 1H), 7.22(dd,J=8.1 Hz, 7.2 Hz, 1H), 4.97～4.89(m, 1H), 3.47～3.43(m, 2H), 3.13～3.11(m, 2H), 2.42～2.37(m, 2H), 2.35～2.34(m, 2H); ESI-MSm/z: 245.12{[M+H]+}。

7b： 收率59%, m.p.171～174 ℃;1H NMRδ: 8.37(br s, 1H), 8.12(d,J=7.2 Hz, 1H), 8.05(d,J=8.7 Hz, 1H), 7.88(br s, 1H), 7.25(dd,J=7.8 Hz, 6.9 Hz, 1H), 4.99～4.85(m, 1H), 3.29～3.25(m, 2H), 3.18～3.15(m, 2H), 2.63～2.55(m, 2H), 2.25～2.17(m, 2H); ESI-MSm/z: 323.10{[M+H]+}。

7c: 收率63%, m.p.185～188 ℃;1H NMRδ: 8.22(br s, 1H), 8.11(d,J=7.5 Hz, 1H), 7.94(d,J=6.9 Hz, 1H), 7.72(br s, 1H), 7.25(dd,J=7.5 Hz, 6.3 Hz, 1H), 4.85～ 4.77(m, 1H), 2.87～2.82(m, 2H), 2.76～2.72(m, 2H), 2.48(s, 3H), 2.09～2.05(m, 2H), 1.84～1.80(m, 2H); ESI-MSm/z: 259.16{[M+H]+}。

7d： 收率66%, m.p.159～161 ℃;1H NMRδ: 8.19(br s, 1H), 8.13(d,J=7.8 Hz, 1H), 7.95(s, 1H), 7.93(s, 1H), 7.84(br s, 1H), 7.44～7.41(m, 2H), 7.24(dd,J=8.1 Hz, 7.2 Hz, 1H), 4.92～4.84(m, 1H), 3.12～3.07(m, 2H), 2.59～2.51(m,2H), 2.05～2.02 (m, 2H), 2.01～1.90(m, 2H); ESI-MSm/z: 321.20{[M+H]+}。

7e： 收率69%, m.p.145～147 ℃;1H NMRδ: 8.69(s, 1H), 8.52(br s, 1H) , 7.98(d,J=7.2 Hz 1H), 7.95(d,J=8.4 Hz, 1H), 7.79(br s, 1H), 7.19(dd,J=7.2 Hz, 4.8 Hz, 1H), 5.31～5.25(m, 1H), 3.40～3.34(m, 2H), 3.24～3.19(m, 2H), 2.33～2.25(m, 2H); ESI-MSm/z: 231.12{[M+H]+}。

7f： 收率68%, m.p.166～168 ℃;1H NMRδ: 8.47(br s, 1H), 8.05(d,J=7.5 Hz, 1H), 7.89(d,J=7.8 Hz, 1H), 7.81(br s, 1H), 7.52(dd,J=7.5 Hz, 7.2 Hz, 1H), 5.59～5.48(m, 1H), 3.51～3.38(m, 2H), 3.27～3.22(m, 2H), 2.68～2.57(m, 2H); ESI-MSm/z: 249.18{[M+H]+}。

7g： 收率58%, m.p.181～183 ℃;1H NMRδ: 8.17(br s, 1H), 8.08(d,J=5.1 Hz, 1H), 7.89(br s, 1H), 7.88(d,J=6.3 Hz, 1H), 7.33(dd,J=6.9 Hz, 5.4 Hz, 1H), 5.73～5.68(m, 1H), 3.87～3.75(m, 2H), 3.52～3.42(m, 2H), 2.51～2.33(m, 2H); ESI-MSm/z: 265.11{[M+H]+}。

7h： 收率57%, m.p.173～176 ℃;1H NMRδ: 8.16(d,J=6.9 Hz, 1H), 8.13(br s, 1H), 8.11(d,J=7.5 Hz, 1H), 7.95(br s, 1H), 7.58(dd,J=7.5 Hz, 6.9 Hz, 1H), 5.68～5.73(m, 1H), 3.80～3.77(m, 2H), 3.12～3.11(m, 2H), 2.43～2.44(m, 2H); ESI-MSm/z: 309.10{[M+H]+}。

7i： 收率66%, m.p.160～162 ℃;1H NMRδ: 8.17(d,J=7.2 Hz, 1H), 8.14(br s, 1H), 8.11(d,J=7.5 Hz, 1H), 8.01(br s, 1H), 7.55(dd,J=7.4 Hz, 6.9 Hz, 1H), 5.80～5.78(m, 1H), 3.87～3.84(m, 2H), 2.61～2.60(m, 2H), 2.35～2.34(m, 2H); ESI-MSm/z: 256.18{[M+H]+}。

7j： 收率65%, m.p.165～166 ℃;1H NMRδ: 8.25(br s, 1H), 8.13(d,J=5.1 Hz, 1H), 7.93(br s, 1H), 7.88(d,J=6.3 Hz , 1H), 7.23(dd,J=6.9 Hz, 5.4 Hz, 1H), 5.71～5.65(m, 1H), 3.87～3.75(m, 2H), 3.52～3.42(m, 2H), 2.51～2.33(m, 2H), 2.05(s, 3H); ESI-MSm/z: 245.20{[M+H]+}。

7k： 收率62%, m.p.175～177 ℃;1H NMRδ: 8.35(br s, 1H), 8.11～8.13(m, 1H), 8.05(d,J=6.9 Hz, 1H), 7.97(d,J=7.2 Hz, 1H), 7.84(br s, 1H), 7.55～7.49(m, 2H), 7.43～7.39(m, 2H), 7.21(dd,J=7.8 Hz, 6.9 Hz, 1H), 5.51～5.43(m, 1H), 3.89～3.81(m,2H), 3.25～3.12(m, 2H), 2.45～2.26(m, 2H); ESI-MSm/z: 307.16{[M+H]+}。

7l： 收率79%, m.p.159～162 ℃;1H NMRδ: 8.56(br s, 1H), 7.97(d,J=8.7 Hz, 1H), 7.95(d,J=8.1 Hz, 1H), 7.71(br s, 1H), 7.13(dd,J=8.4 Hz, 7.2 Hz, 1H), 4.90～4.80(m, 1H), 4.15～3.97(m, 2H), 2.82～2.78(m, 2H), 2.73(s, 3H), 2.18～2.14(m, 2H), 2.02(s, 3H), 2.01～1.94(m, 2H); ESI-MSm/z: 301.17{[M+H]+}。

7m： 收率73%, m.p.189～192 ℃;1H NMRδ: 8.34(br s, 1H), 8.15～8.17(m, 1H), 8.13(d,J=8.7 Hz, 1H), 8.05(d,J=7.5 Hz, 1H), 7.75(br s, 1H), 7.54～7.49(m, 2H), 7.45～7.43(m, 2H), 7.23(dd,J=8.1 Hz, 6.9 Hz,1H), 4.93～4.85(m, 1H), 4.15～3.98(m, 2H), 3.14～3.12(m,2H), 2.68 (s, 3H), 2.05～2.02 (m, 2H), 2.01～1.90(m, 2H); ESI-MSm/z: 363.20{[M+H]+}。

7n： 收率61%, m.p.173～175 ℃;1H NMRδ: 8.22(br s, 1H), 8.13～8.11(m,1H), 7.95(s, 1H), 7.92(s, 1H), 7.84(br s, 1H), 7.57～7.51(m, 2H), 7.44～7.41(m, 2H), 7.24(dd,J=8.1 Hz, 7.8 Hz, 1H), 4.77～4.84(m, 1H), 2.93～2.97(m, 2H), 2.25(s, 3H), 2.15～2.19(m, 2H), 2.02～2.05(m, 2H), 1.95～2.01(m, 2H); ESI-MSm/z: 335.23{[M+H]+}。

1.3 PARP-1酶抑制活性测试

采用Trevigen公司生产的HT通用PARP凋亡化学发光法分析试剂盒对7a～7n的PARP-1酶抑制活性进行测定[15]。IC50值采用SPASS 19.0软件计算获得。

7a～7n和阳性对照药MK-4827均用DMSO溶解，用PARP-1缓冲液稀释配制0.5, 2.5, 12.5, 62.5, 300和1 500 nmol·L-1溶液；分别配制浓度0.01 U·μL-1的PARP-1酶溶液，PBS缓冲液(7.5 mmol·L-1Na2HPO4, 2.5 mmol·L-1NaH2PO4, 145 mmol·L-1NaCl, pH 7.4)， 0.1% Triton X-100/PBS溶液，空白对照：DMSO用PARP-1缓冲液稀释1 000倍。

在96孔板酶标仪中，每孔加入PARP-1缓冲液50 μL，于23 ℃孵育20 min；弃去孔内液体，每孔加入空白对照及待测化合物10 μL，加入PARP-1酶15 μL，于23 ℃孵育10 min；加入PARP-1 Cocktail 25 μL，于23 ℃孵育60 min；弃去孔内液体，依次用0.1% Triton X-100/PBS溶液(2×100 μL)和PBS(2×100 μL)漂洗。

每孔加入亲和素试剂Strep-HRP 50 μL，于23 ℃孵育60 min，弃去孔内液体，加入0.1% Triton X-100/PBS(200 μL)漂洗2 次，加入PBS(200 μL)漂洗2 次。加入预热显色剂TACS-Sapphire(50 μL)底物，避光反应15 min。加入0.2 mol·L-1盐酸(50 μL)终止液，混匀，用酶标仪测定450 nm处吸光值A，计算抑制率[抑制率=(A对照-A实验)/(A对照-A本底)×100%]，并计算IC50。

2 结果与讨论

2.1 合成

7a～7n的合成中通过关键中间体3引入吲唑环结构。本文采用在乙酸酐的催化下，中间体2与亚硝酸异戊酯一锅法合成3。该方法反应条件温和，收率较高。其可能的机理是亚硝酸异戊酯在酸性条件下，与2的氨基反应生成重氮盐，而甲基因为受到邻位重氮盐和羧酸酯的强吸电子作用，具有一定的酸性，在脱去质子后与重氮盐发生分子内的的加成进一步形成吲唑。

2.2 PARP-1酶抑制活性和初步构效关系

评价了7a～7n对PARP-1的酶抑制活性，其IC50见表1。从表1可以看出，7a～7e, 7g和7h等7个化合物对于PARP-1酶抑制IC50达到30 nmol·L-1以下；在7a～7d中，吲唑的2-位引入哌啶基，3-位引入不同体积基团，当引入甲基和苯基时，7c和7d对PARP-1的抑制活性明显下降，尤其3-位苯基取代(7d)时相比无取代(7a)活性下降12倍，提示该位置不能引入体积较大的基团；当2-位引入四氢吡咯基，3-位引入不同基团时，无取代和F取代的7e和7f均表现出对PARP-1的高抑制活性，IC50分别为4.2 nmol·L-1和4.6 nmol·L-1，与阳性对照药Niraparib(MK4827)相当，这可能是因为F和H体积接近导致，而Cl， Br， CN，甲基和苯基取代化合物7g～7k对PARP-1的抑制活性随着取代基的体积增大而降低，这与7a～7d表现出的构效关系是一致的；与7c和7d相比， 7l， 7m和7n对PARP-1酶抑制活性均有所降低，提示哌啶基上N被酰胺化或被甲基化取代会导致活性降低。这可能是因为哌啶环N上的氢原子可以作为氢键的供给体，从而加强与靶点的结合，而酰胺化和甲基化破坏了这个作用，从而导致活性降低；7a与7e相比，2-位四氢吡咯基取代的活性略高于哌啶基取代。

表1 7a～7n对PARP-1酶抑制活性

以7a为例，考察目标化合物与底物分别反应15 min, 30 min， 60 min, 90 min后检测450 nm下吸光值并计算IC50，其值分别为17 nmol·L-1， 6.7 nmol·L-1， 7.2 nmol·L-1和7.5 nmol·L-1。表明7a与底物的结合在反应30 min后接近平衡，7a浓度为(0.5， 2.5， 12.5， 62.5， 300和1 500)nmol·L-1时抑制率分别为13.39%， 26.61%， 57.68%， 71.55 %， 93.57%和100.31%，7a浓度与抑制率之间无线性关系。说明目标化合物与底物之间的作用属于可逆的非共价结合。

以3-甲基-2-硝基-苯甲酸甲酯为原料以较高的收率合成了14个新型吲唑类化合物(7a～7n)。评价了其对PARP-1酶的抑制活性，构效关系分析表明: 7a～7n对PARP-1的抑制活性随着3-位取代基的体积增大而降低，2-位四氢吡咯基取代略高于哌啶基取代，而哌啶基或四氢吡咯基上的氮原子被酰胺化或甲基化对活性均有不利影响。在所有目标化合物中，对PARP-1酶抑制IC50低于30 nmol·L-1的化合物有7个，其中2-(四氢吡咯-4-基)-2H-吲唑-7-甲酰胺(7e)和3-氟-2-(四氢吡咯-4-基)-2H-吲唑-7-甲酰胺(7f)的IC50分别为4.2 nmol·L-1和4.6 nmol·L-1，与对照药Niraparib(MK-4827)活性类似，可作为先导化合物作进一步研究。

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Synthesis and Biological Evaluation of Novel PARP-1 Inhibitors with Indazole Skeleton

LONG Wei1, QIU Wen-ge1*, HU Yun-yan2,SONG Li-yun1, LI Hai-jun2, HE Hong1*

(1. Beijing Key Laboratory for Green Catalysis and Separation, College of Environmental and Energy Engineering,Beijing University of Technology, Beijing 100124, China; 2. Betta pharmaceuticals Co. Ltd, Beijing 100176, China)

Methyl 1H-indazole-7-carboxylate(3) was obtained by two-step reaction from methyl 2-nitro-3-methylbenzoate. 3-Halogenated-3(4b～4d) were prepared by halogenation of 3 with POCl3, Br2or I2, respectively. 3-Fluoro(cyano)-3(4a, 4e) were prepared by fluorination or cyanation of 4d with selectflor or Zn(CN)2. 3-Methyl(phenyl)-3(5a, 5b) were obtained by Suzuki coupling of 4d with methylboronic acid or phenylboronic acid catalyzed by Pd(PPh3)4. Indazole derivatives(6a～6n) were synthesized byN-alkylation of 3, 4a～4c, 4e and 5. Fourteen novel indazole derivatives(7a～7n) were synthesized by aminolysis and deprotection from 6a～6n. The structures were characterized by1H NMR and ESI-MS. The results of biological evaluation indicated that seven target molecules displayed inhibitory activities against PARP-1 with IC50less than 30 nmol·L-1. Moreover, the indazoles bearing pyrrolidinyl at 2-position and hydrogen(7e) or fluorin(7f) at 3-position displayed inhibitory activities against PARP-1 with IC50of 4.2 nmol·L-1and 4.6 nmol·L-1, respectively.

2-nitro-3-methylbenzoate; indazole; PARP-1 inhibitor; synthesis; biological activity

2016-01-08

龙伟(1983-)，男，汉族，江西宜春人，博士研究生，主要从事有机合成研究。 E-mail: longwei007@163.com

邱文革，教授， E-mail: qiuqenge@bjut.edu.cn; 何洪，教授， E-mail: hehong@bjut.edu.cn

O626; O621.3

A

10.15952/j.cnki.cjsc.1005-1511.2016.04.16016