调味料中罂粟壳的主要生物碱LC-MS检验

2016-05-06中国刑事警察学院辽宁沈阳110035

中国刑警学院学报 2016年1期

张婷（中国刑事警察学院辽宁沈阳 110035）

张婷
（中国刑事警察学院辽宁沈阳 110035）

罂粟作为一类麻醉类物质被非法添加在调味料及食品中会危害人体的健康。建立罂粟壳中5种生物碱成分的液相色谱-质谱检验（LC-MS）方法，且用于调味料的检测。结果表明该方法具有前处理操作简便，测定灵敏度高等特点，对食品安全的检验和监督有一定作用。

罂粟调味料 LC-MS

食品中使用罂粟壳(籽)将被追究为违法行为。调味料中的罂粟壳(籽)常被研磨成细粉末状而丧失外观检验的条件，因此，其化学物质检测是证明此类违法行为的重要证据。有关罂粟壳中几种生物碱的化学检测方法包括有薄层色谱法、化学显色法、电化学法、免疫分析法、以及气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱联用法(GC/MS)、高效液相色谱(HPLC)和液相色谱-质谱联用法(LC-MS)等仪器分析方法[1-4]。调味料中的罂粟壳物质检测容易受到调味料中其他组分的干扰，因此，本文选用液相色谱-串联离子阱质谱（LC-IT-MS/MS）建立了罂粟壳中生物碱的快速分析方法，同时在网络及市场上随机购买了8批次的调料进行方法的验证实验。通过本文的研究以期对调味料中罂粟类物质的检测提供参考。

1 实验部分

1.1 设备及材料

液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用仪；漩涡混合器；高速冷冻离心机。

食用调味料：麻辣火锅底料，4批次（超市购买）；调味粉料，4批次（网络购买）。

吗啡、罂粟碱、那可汀、可待因、蒂巴因标准物质均购置于公安部物证鉴定中心，纯度大于97%。

罂粟壳：现场缴获的罂粟壳，每枚重约3.5克。

1.2 检材前处理

取样品1g加入2mL水将检材稀释，加0.2%盐酸溶液3滴，加入环己烷0.5mL，涡旋混合，高速离心后，弃去有机相，取水相清液于另一个试管，加入pH8.9的缓冲溶液0.5mL，并用乙醚分2次进行提取，合并提取液，经N2气流下浓缩挥干，加0.5mL流动相溶液复溶，将溶液通过0.22μm滤膜过滤后，取10μL进LC-MS分析。

1.3 仪器分析条件

液相色谱-质谱系统由Finnigan的液相色谱仪和Thermo Fisher的LXQ离子阱质谱仪组成。色谱条件：色谱柱Thermo Gold ODS C18（150mm×2.1mm，5μm）；色谱柱温：35℃；流动相组成及配比：甲醇0.2%，冰醋酸5mmol/L，醋酸铵水溶液（pH 4.0）（60∶40，v/v），流速为0.2mL/min。

质谱条件：电喷雾离子化源，正离子方式检测（ESI+）二级质谱全离子扫描，扫描范围：50～450Da；毛细管温度：350℃，雾化气、加热辅助气和吹扫气流量分别为30.00、8.00和2.00arb；源电压、毛细管电压和套管透镜补偿电压分别为5.00kv、20.0v 和10.0v。

2 实验结果与讨论

取生物碱的标准溶液混合后进样分析，经质谱全扫描后确定5种生物碱基峰强度最高的母离子，在选定各自母离子后，进行二级质谱全扫描的检测，其中吗啡的母离子为m/z286，可待因的母离子为m/z 300，蒂巴因的母离子为m/z312，罂粟碱的母离子为m/z340，那可汀的母离子为m/z414，LC-MS分析的SRM色谱及质谱图如图1，图2所示。

图1 5种生物碱的SRM色谱图

图2 5种生物碱的SRM质谱图

3 结果及讨论

3.1 标准曲线及线性范围

罂粟壳中含有20多种生物碱，其中罂粟碱、那可汀、吗啡、可待因、蒂巴因5种具有代表性的生物碱含量较高。5种生物碱的含量不相同，在仪器中响应能力和抗干扰能力不同，结合多种因素，最终建立了4种生物碱的标准曲线和线性范围，以生物碱的浓度（μg/mL）为横坐标，以色谱的吸收峰面积为纵坐标，得到的标准曲线见表1。

表1 4种生物碱LC-MS检测的线性范围及检出

3.2 检材提取

调味品和麻辣火锅汤料中油脂和色素含量较高，样品的前处理方法以及杂质去除的程度对测定结果有影响。

近些年，食品中罂粟生物碱的提取方法中应用固相萃取法较多，所用的固相萃取材料如ChemElut、PCX、MCX、PSA和无水硫酸镁等，检材经过固相萃取材料后，收集洗脱液再浓缩或者直接过膜后分析测试。上述操作过程存在步骤较繁琐，固相萃取材料价格高，各种生物碱极性差异富集效果不理想等问题。

采用简便的液液提取方法是利用了生物碱具有在碱性条件下可溶于有机溶剂，在酸性条件下溶于水的反应原理。据文献报道[5-10]，液液萃取法中有机萃取溶剂多选用混合溶剂，如三氯甲烷-甲醇（3∶1）溶液、三氯甲烷-异丙醇（4∶1）溶液、三氯甲烷-乙醇（9∶1）溶液等，但文献方法中有机溶剂用量较大，提取和旋转挥发等操作次数多，较为繁琐。

因此，本文采用了冷冻去油及酸碱反提的液液提取法。在冷冻先去除部分油脂后，再在溶液中加酸性溶液和有机溶剂，离心后再次去除油脂，在剩余的水相体系中调节pH值为8.9，此时可以兼顾提取属于两性化合物的吗啡和碱性的生物碱成分。

3.3 调味料及火锅底料的检测

采用本文所建立的方法对从网络上及超市中购买的调味料进行LC-MS检测，结果如表2所示。

表2 8种调味料中生物碱的LC-MS检测结果

上述调味料的检测中，生物碱测定的含量差别较大，其中吗啡含量最高的3号和4号样品，除吗啡物质，3号样品中还检测有可待因成分，4号样品中检测出罂粟碱成分。

此次检测中火锅底料的结果好于调味料，原因一是火锅底料均为超市购得，而调味料均为有针对性的网络购得，安全保障差些。另外的原因是火锅底料的油脂含量远高于调味料，前处理净化方法的选择中，如果选用强净化方法，生物碱易在净化中损失，如果选用普通净化方法，杂质易干扰生物碱的测定。

据文献[11,13,14]报道，分析火锅底料中生物碱的检验均采用极性的色谱HILIC柱，并在讨论中提及C18色谱柱对生物碱保留较差，但通过本文及其他文献的[12,15]的实验发现，C18柱对生物碱成分的检验结果良好、重现性好。

3.4 调味料中生物碱检测的其他问题

长期以来，在欧美发达国家，罂粟籽（粉）及其制品主要作为制作面包、汉堡、馅料、沙律酱等的添加物[16，17]。

据报道[18，19]匈牙利成年人们每日食用源自食物中的吗啡含量为78.6μg/kg左右，儿童是116.9μg/kg。在食用者的尿液中均会检出生物碱成分，咖喱饭中食用的吗啡含量为200.4μg～1002μg；可待因为95.9μg～479.5μg，这些食用者的尿液中会检测到的吗啡浓度范围在0.12μg/mL～1.27μg/mL，可待因的浓度范围为0.04μg/mL～0.73μg/mL从此可见，调味料中少量罂粟壳（籽）的食用是否会产生成瘾性，其生物检材中代谢物的含量与毒理作用的研究还有很多空缺。

随着检测仪器灵敏性的显著提高，是否可以对食品中罂粟类物质的各种成分规定一定的检测阈值将既保证食品的安全，又保证法律的严肃性。

综上添加在食品中的罂粟所含有生物碱的检验方法存在标准方法制定滞后、自建检验方法存在科学性未验证，以及检验鉴定结论表述针对性和指导性差等多方面问题，这些问题制约了对食品安全违法行为的有效监督和管理。希望有关部门能尽快从标准制定、快速检验、实验室确证检验、安全性阈值设定、实验室间能力验证等几个方面深入研究和讨论，尽可能保障食品安全。

[1]冯雪顺.薄层法测定食品中罂粟壳残留方法的研究[J].中国卫生检验杂志,1992,2(4):238.

[2]郑向梅,崔泓.食品中掺入罂粟壳快速检测方法的研究[J].中国卫生检验杂志,2012,22(8):2000-2001.

[3]吴功柱,吕太平,杨红芸,等.敏感膜电极检测火锅汤中罂粟碱方法研究[J].中国卫生检验杂志,1999,9 (4):245-247.

[4]熊剑娟,王盛良.胶体金免疫试纸法快速测定调味汤料中罂粟生物碱[J].中国卫生监督杂志,2002(6): 354.

[5]李永芳,会耀华.气相色谱法测定食品中罂粟壳残留的研究与应用[J].中国卫生检验杂志志,2000 (10):38-40.

[6]张艳萍,廖华乐,肖兵,等.GC/MS测定食品中罂粟碱和吗啡含量[J].卫生研究,2011,40(4)：512-513.

[7]张靖.食品中罂粟碱、吗啡、可待因含量的液相色谱检测法研究[J].中国卫生检验杂志,2007,17(1): 72-73.

[8]皮立,胡凤祖,师治贤.高效液相色谱-荧光检测法测定罂粟籽和火锅汤料中的罂粟碱[J].色谱,2005,23(6):639-641.

[9]王力清,郦明浩,李锦清,等.超高效液相色谱-串联质谱法高通量快速测定调料中罂粟壳生物碱含量[J].食品与发酵工业,2012,8(38):168-172.

[10]刘敏敏,张朝正,李延志,等.液相色谱-串联质谱法检测火锅底料中罂粟壳[J].食品研究与开发，2012,33(12):91-94.

[11]王柯,郑荣,等.火锅调料中5种生物碱成分的液相色谱-串联质谱测定法[J].中国卫生检验杂志,2011,2(21):363-365.

[12]张林田,黄少玉,陆奕娜,等.固相萃取/HPLC-MS/MS检测食品中吗啡等五种罂粟壳生物碱残留[J].分析试验室,2014,33(6):722-725.