AQT90 FLEX分析仪检测全血肌钙蛋白I的方法学评价

易火春，朱建辉，王思瑜，谢　芳，刘亚黎

(厦门大学附属中山医院：1.检验科；2.胸外科，福建厦门 361004)



·临床研究·

AQT90 FLEX分析仪检测全血肌钙蛋白I的方法学评价

易火春1，朱建辉1，王思瑜1，谢芳1，刘亚黎2

(厦门大学附属中山医院：1.检验科；2.胸外科，福建厦门 361004)

摘要:目的对AQT90 FLEX分析仪检测全血标本肌钙蛋白I(TnI)进行方法学评价。方法通过测定TnI的精密度、准确度、分析测量范围、携带污染率、功能灵敏度和参考区间来评价其性能。结果中、高值质控品总不精密度分别为5.27%、4.49%，均小于CLIA′88规定的允许误差范围的1/2(15%)；国家卫生和计划生育委员会临检中心5个质评物检测结果，有4个在CLIA′88规定的允许误差范围的1/2(15%)内，结果为可接受；在0.011～16.6 μg/L范围内线性良好，相关方程为Y=0.996X-0.524；携带污染率小于10%；功能灵敏度为0.011 μg/L，在参考区间(TnI<0.023 μg/L)范围内；试剂说明书建议参考区间(TnI<0.023 μg/L)验证通过。结论该系统检测全血标本TnI精密度高，正确度好，并具有良好的线性，参考区间验证合格，分析灵敏度及携带污染率能够达到实验室质量要求，能满足临床需求。

关键词:心肌梗死；肌钙蛋白I；方法学

急性心肌梗死(AMI)是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所引起的心肌坏死，起病急，病死率高。如何从胸痛患者中快速识别出AMI患者，从而及时进行治疗，是降低病死率和改善预后的关键。研究表明心肌肌钙蛋白I(TnI)对AMI诊断的特异度可达90%以上，敏感度为85%以上，可作为心肌梗死突发时的快速辅助诊断指标，被越来越多地应用[1]。目前,临床上检测TnI大都采用血浆标本，离心等前处理过程需要花10多分钟，影响了TnI的报告时间。本科室最近引进Radiometer AQT90 FLEX分析仪,能够检测全血标本TnI，减少了离心过程所需要的时间，缩短了报告时间。现就该系统检测全血TnI 的方法学进行评价,报道如下。

1材料与方法

1.1标本本院门、急诊及住院患者经乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝的静脉血标本。

1.2仪器和试剂仪器采用丹麦Radiometer AQT90 FLEX 免疫分析仪，试剂为配套TnI测试卡(批号10397)。

1.3方法

1.3.1精密度试验根据EP-5A文件[2],选择低、中两个浓度的质控品，每天上、下午分两批进行试验，每批做双份检测，连续检测20 d,共40对,80个数据。根据所得到的数据计算出批内不精密度的标准差(s批内)、批间变异估计值(A)、批间不精密度的标准差(s批间)、天间变异估计值(B)、天间不精密度的标准差(s天间),最后按照方差和的方式将批内、批间和天间标准差结合起来求出总不精密度。

1.3.2准确度验证根据EP15-A文件[3]，选择国家卫生和计划生育委员会(简称卫计委)临检中心2015年发放的心肌标志物第1次室间质评物作为参考物质。每个质评物分别测定2次，取平均值，5个质评物结果，若有4个或4个以上在允许范围内，结果为可接受。

1.3.3分析测量范围(AMR)评价根据EP-6A文件[4]，选择TnI 浓度靠近厂家提供线性范围上限的患者全血标本作为高值浓度(H)，TnI 浓度低的患者全血标本作为低值浓度(L)，按4H+0L、3H+1L、2H+2L、1H+3L、0H+4L的关系各自配制，形成系列检测标本，用AQT90 对系列浓度标本进行TnI检测，每个浓度测定2 次。对试验数据进行可靠性分析后,利用SPSS13.0软件进行多项式回归分析。

1.3.4携带污染率的评价取高浓度TnI全血标本连续测定3 次，测定值分别为H1、H2、H3；再取低浓度TnI全血标本连续测定3次，测定值分别为L1、L2、L3，按公式计算携带污染率：携带污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%

1.3.6参考区间验证参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)C28-A2文件《医学实验室参考区间的定义和确认》[6]，从本院体检人群中选取 20 份临床诊断基本正常，心电图、B超以及血液常规、生化、免疫检验结果均正常的健康人标本(男女各 10 例，年龄20～70 岁)，进行TnI检测，对结果进行统计，参照参考区间进行验证，检测结果落在参考区间内的数量达到(或超过)90%，表示可以接受，验证通过，否则进行参考区间确认试验。

1.4统计学处理数据采用Microsoft Excel 2000软件和SPSS 13．0 软件进行统计分析，进行多项式回归分析。

2结果

2.1精密度验证结果中、高浓度质控品的TnI总CV均小于CLIA′88规定的允许误差范围的1/2(15%)，说明试验估计的总不精密度属于可接受范围。见表1。

表1　　TnI精密度验证结果

2.2准确度验证结果卫计委临检中心5个质评物检测结果，有4个在CLIA′88规定的允许误差范围的1/2(15%)内，结果为可接受。见表2。

表2　　TnI准确度验证结果

2.3分析测量范围评价结果根据配制关系可以计算出5例标本的TnI水平，作为这些标本的预期值，以预期值为横坐标，实测平均值为纵坐标，行直线回归分析，观察其线性范围，结果显示：该法在0.011～16.6 μg/L线性良好(r=0.996)，相关方程为Y=0.996X-0.524(图1)。

图1　　TnI线性范围散点图(μg/L)

2.4携带污染率H1、H2、H3分别为23.250、23.020、23.400 μg/L，L1、L2、L3分别为 0.034、0.032、0.038 μg/L，携带污染率为 0.017%。

2.5功能灵敏度使用 2.3 中的线性范围中下限标本连续检测20次，浓度为0.011 μg/L的CV值为16.50%，小于20%，在可接受范围内，因此，TnI 的功能灵敏度为0.011 μg/L。

2.6参考区间验证20例健康人标本TnI结果均低于0.01 μg/L，全部在参考区间(TnI<0.023 μg/L)范围内，参考区间验证通过。

3讨论

AQT90使用时间分辨荧光免疫分析法检测全血或血浆中的TnI浓度，其原理是将生物素酰化的单克隆抗TnI抗体预先固化到检测杯里的链霉素蛋白表面。在捕获抗体表面分别加上分隔层和示踪抗体。分析过程中，标本和分析液自动进入含特应试剂的试杯中。孵育期间，示踪和捕获抗体把TnI夹在中间，形成三明治样结构。孵育结束后，分析液冲洗试杯并烘干。干燥试杯表面的铕标记示踪抗体信号利用时间分辨荧光法(TRF)测定，被分析物质的浓度通过铕标记信号直接测定。测得的信号根据仪器中的定标曲线转化成浓度[6]。

与实验室的大型检验设备相比，AQT90免疫分析仪具有易用、检测速度快、全程无污染等特点。检测过程不涉及管道系统和加样针，不需标本准备，从标本采集到出报告只需要20 min，尤其适用于急诊胸痛心TnI的快速检测[7-10]。

本文详细评价了AQT90免疫分析仪检测TnI的精密度、准确度、测量范围、携带污染率、功能灵敏度。根据NCCLS EP5-A文件对批内、批间、天间及总不精密度的评估,在EP-5A文件中指出测定的总CV最为重要,它代表了整个分析系统的可重复程度。试验结果显示:TnI在0.038 μg/L和1.070 ng/L时,总不精密度分别为5.27%和4.49%,均小于CLIA′88规定的允许误差范围的1/2(15%)，说明该方法的总不精密度属于可接受范围。根据EP15-A文件，选择卫计委临检中心2015年发放的心肌标志物第1次室间质评物作为参考物质。每个质评物分别测定2次，取平均值。5个质评物结果，有4个在CLIA′88规定的允许误差范围的1/2(15%)内，结果为可接受。根据NCCLS EP6-A文件对TnI的分析测量范围进行评价,结果显示，该法在0.011～16.6 μg/L范围内线性良好，符合临床TnI检测的需要。在携带污染率检测中，该系统携带污染率小于10%，认为高浓度标本对低浓度标本携带污染程度低，在可接受范围内。本方法的功能灵敏度为0.011 μg/L，在参考区间(TnI<0.023 μg/L)范围内，在临床检测中对于低值结果的报告具有一定的参考价值。本试验通过对 20 例健康体检者进行参考区间的验证，结果显示90%以上在参考区间范围内，满足性能要求。

综上所述，本实验室新引进的Radiometer AQT90 FLEX 免疫分析仪精密度高，正确度好，并具有良好的线性，参考区间验证合格，分析灵敏度及携带污染率能够达到实验室质量要求，能满足临床需求。

参考文献

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(收稿日期：2016-01-06)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.06.030

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)06-0788-03