乌丹降脂胶囊对SD大鼠非酒精性脂肪肝体内FGF-21和TNF-α的调节作用

阎纳新　郭云　刘洪德　戴二黑　张巍　杨莉

050021　河北省石家庄市第五医院



·论著·

乌丹降脂胶囊对SD大鼠非酒精性脂肪肝体内FGF-21和TNF-α的调节作用

阎纳新郭云刘洪德戴二黑张巍杨莉

050021河北省石家庄市第五医院

【摘要】目的探讨乌丹降脂胶囊对大鼠非酒精性脂肪肝(NASH)模型外周血中成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的调节作用。方法40只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、易善复组、乌丹降脂胶囊组，正常对照组以基础饲料喂饲，其他3组连续16周通过高脂饲料喂饲，建立非酒精性脂肪肝病模型，同时正常对照组、模型组，以0.9%氯化钠溶液10 ml·kg(-1)·d(-1)灌胃；易善复组以易善复溶液灌胃10 ml·kg(-1)·d(-1)；乌丹降脂胶囊组以乌丹降脂胶囊灌胃10 ml·kg(-1)·d(-1)；连续灌胃14周后，检测血清生化指标[谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(CHOL)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、超敏C-反应蛋白(CRP)]及FGF-21、胰岛素、TNF-α的含量。结果与模型组相比，乌丹降脂胶囊组及易复善组FGF-21、胰岛素、TNF-α的含量均明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)，血液生化ALT、AST、CHOL、TG、LDL-C、CRP各指标水平明显下降，HDL-C水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论乌丹降脂胶囊可能通过抑制FGF-21和TNF-α的生成，抑制脂肪合成及减轻肝脏的炎症，这可能是乌丹降脂胶囊治疗非酒精性脂肪肝的机制之一。

【关键词】乌丹降脂胶囊；非酒精性脂肪肝；成纤维细胞生长因子-21；肿瘤坏死因子-α

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liverdisease NAFLD)是一组无过量饮酒史，肝组织学改变与酒精性肝病相类似，以肝实质细胞脂肪变性和脂肪贮积为特征的临床病理综合征[1]。目前随经济的发展，NAFLD的患病率迅猛增高，现已成为危害人类健康的三大肝病之一，乌丹降脂胶囊(冀药制字Z20051051)是石家庄市第五医院自行研制的用于脂肪肝的治疗药物，经多年临床观察疗效显著。肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alph，TNF-α)和成纤维细胞生长因子21(fibmblast growth factor 21，FGF-21)是近年发现与脂肪肝密切相关的脂肪细胞因子，本研究通过大鼠非酒精性脂肪肝模型研究乌丹降脂胶囊在非酒精性脂肪肝形成中对FGF-21及TNF-α的调节作用，探讨其治疗脂肪肝的作用机制。

1材料与方法

1.1实验动物SD大鼠40只，雄性，无特定病原体级(SPF)，体重(200±20)g，由河北医科大学实验动物中心提供。

1.2饲料与药物基础饲料：由河北医科大学实验动物中心加工生产；高脂饲料配方：胆固醇2%,猪油10%,基础饲料88%；乌丹降脂胶囊：石家庄市第五医院临床治疗脂肪肝的经验方，由石家庄市第五医院制剂室提供，冀药制字：Z20051051；易善复由赛诺菲安万特公司生产，国药准字：HZ20109010。

1.3实验试剂及主要仪器检测血清胰岛素(Insulin)、TNF-α和FGF-21的ELISA试剂盒由R&D公司生产，主要检测仪器为芬兰Thermo公司产MK3型全自动酶标仪，检测生化指标所采用仪器为美国雅培C8000全自动生化分析仪，测定谷氨酸氨基转移酶(ALT)，天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂购自日本积水株式会社，总胆固醇(CHOL)，三酰甘油(TG)，高密度脂蛋白(HDL-C)，低密度脂蛋白(LDL-C)，超敏C-反应蛋白(CRP)试剂购于日本协和医药。

1.4实验动物造模方法及标本留取40只SD大鼠随机分为4组，每组10只，分别为正常对照组、模型组、易善复组和乌丹降脂胶囊组。正常对照组以基础饲料喂食，而模型组、易善复组和乌丹降脂胶囊组则以高脂饲料喂饲，连续喂养2周后，正常对照组、模型组以0.9%氯化钠溶液10 ml·kg-1·d-1灌胃；易善复组以易善复溶液(将易善复用双蒸水配制成8.523 g/L的溶液)10 ml·kg-1·d-1灌胃；乌丹降脂胶囊组以乌丹降脂胶囊溶液(将乌丹降脂胶囊用双蒸水配置成41.667 g/L的溶液)10 ml·kg-1·d-1灌胃，连续灌胃14周。实验结束后，3%戊巴比妥钠(0.15 ml/100 g)腹腔注射麻醉，无菌采集外周静脉血，凝固后2 000 r/min离心10 min，分离血清备用。

1.5生化指标检测将4组大鼠的血清标本采用美国雅培C8000全自动生化分析仪测定血清中ALT、AST、CHOL、TG、HDL-C、LDL-C、CRP的含量。

1.6血清Insulin、TNF-α和FGF-21的检测采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中Insulin、TNF-α和FGF-21的含量，严格按说明书操作。

2结果

2.14组大鼠血清生化指标比较与正常对照组相比，模型组ALT、AST、CHOL、TG、LDL-C、CRP各指标水平明显升高，HDL-C水平下降，易善复组与乌丹降脂胶囊组LDL-C明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，易善复组与乌丹降脂胶囊组ALT、AST、CHOL、TG、LDL-C各指标水平明显下降，HDL-C水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与易善复组相比，乌丹降脂胶囊组LDL-C水平明显下降，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1，图1。

表14组大鼠血清生化指标比较

组别ALTASTCHOLTGHDL-CLDL-C正常对照组41.27±3.51242.80±23.421.44±0.180.352±0.100.79±0.070.24±0.09模型组95.2±56.62*361.01±172.58*2.12±0.29*0.51±0.14*0.76±0.14*0.99±0.37*易善复组43.20±10.39#243.33±31.40#1.63±0.33#0.37±0.06#0.79±0.08#0.73±0.28*#乌丹降脂胶囊组42.87±9.25#242.93±35.32#1.50±0.29#0.36±0.04#0.80±0.14#0.50±0.15*#△

注：与正常对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05；与易善复组比较，△P<0.05

图1　4组大鼠血清生化指标的结果

2.24组大鼠血清细胞因子相关指标结果与正常对照组相比，模型组FGF-21、TNF-α、Insulin、CRP各指标水平明显升高，易善复组与乌丹降脂胶囊组CRP明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，易善复组与乌丹降脂胶囊组FGF-21、FINS、CRP各指标水平明显下降，乌丹降脂胶囊组TNF-α明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；与易善复组相比，乌丹降脂胶囊组TNF-α、CRP 明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2，图2。

表2　4组大鼠血清细胞因子相关指标比较　±s

注：与正常对照组比较,*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05；与易善复组比较，△P<0.05

图2　4组大鼠血清细胞因子检测结果

3讨论

近年对NAFLD发病机制的研究中Day等[2]提出的“二次打击”学说是目前被学界广泛接受的假说，第一次打击主要是指各种原因导致的肝细胞内TG沉积，其中最主要的原因是胰岛素抵抗(Insulin resistance，IR)，第二次打击是指各种原因导致的炎症和纤维化的形成，其中最主要的原因是氧化应激与脂质过氧化。近年研究显示脂肪细胞因子FGF-21，主要表达在肝脏、胰腺、肌肉及脂肪细胞等高代谢状态的组织中[3-6]，它是一种类胰岛素的细胞因子，主要功能是可以增加胰岛素的敏感性、降低胰岛素抵抗、减轻脂肪变性、增加能量消耗。周婷婷等[7]通过在临床上实验研究表明非酒精性脂肪肝患者和脂肪肝合并糖尿病患者FGF-21水平均显著高于正常对照组，也有报道称敲出FGF-21基因小鼠出现了脂肪肝，由此显示FGF-21可作为脂肪肝治疗的一个新的生物标记物和指示指标[8]。亦有研究显示刻意使健康机体发生高胰岛素血症的同时可伴有FGF-21的升高[9]。本研究结果显示模型对照组血清中胰岛素、FGF-21含量均明显增高，而易善复组与乌丹降脂胶囊组与模型对照组相比则明显降低，甚至有低于正常对照组的趋势，可见乌丹降脂胶囊可以有效减少胰岛素和FGF-21的产生。在乌丹降脂胶囊的构成成分中，生山楂、草决明、丹参、泽泻、黄芪等均是现代药理证明具有降脂作用的中药，而在本研究中显示模型对照组的CHOL、TG、LDL-C明显升高，HDL-C明显降低，而乌丹降脂胶囊组与模型对照组相比CHOL、TG、LDL-C明显降低，HDL-C明显升高，达到正常对照组水平，甚至LDL-C低于正常对照组，由此可见降低脂肪的合成和储存是乌丹降脂胶囊治疗脂肪肝的机制之一，即抑制第一次打击的作用来抑制脂肪肝的形成。

TNF-α是主要由活化的单核/巨噬细胞产生的、能杀伤和抑制肿瘤细胞的细胞因子[10]。在NAFLD的发病中，TNF-α是参与“二次打击”的重要炎性因子，同时还在IR的形成中起着重要作用[11,12]，本研究显示模型对照组血清中TNF-α、CRP均比正常对照组明显升高，且ALT、AST的含量亦明显升高，表明所造动物模型确实形成了肝脏的炎症，形成肝脏损伤，而乌丹降脂胶囊组的TNF-α、CRP比模型对照组明显降低，甚至明显低于易善复组，AST、ALT则恢复至正常对照组水平，表明乌丹降脂胶囊可以抑制TNF-α的产生，使肝脏的炎症减弱，促进肝功能恢复，即乌丹降脂胶囊可以降低“第二次打击”的作用抑制脂肪肝的形成。根据文献报道，有关NAFLD的记载早已有之，多属“肝癖”、“胁痛掣、积聚”等范畴[13]。其病因可由痰湿之体，肝、脾、胃、肾等脏腑失养或虚损，气血亏虚为内因，以及过食肥甘、膏粱、感受湿毒或情志失调等外因而致本病[14,15]。但是中药复方由于具有多靶点作用机制，且不良反应少，近年日益受到人们的关注。乌丹降脂胶囊的生山楂可消食导滞，化痰消积，陈皮可以健脾燥湿化痰，半夏可以燥湿化痰，消痞散结，丹参可活血祛瘀的作用，从中医的角度来看具有健脾化痰、活血化瘀的功效，有利于脂肪肝的治疗，而本研究进一步证实乌丹降脂胶囊对NAFLD形成的两次打击的阶段均有一定的抑制作用，可见其作用是多靶点的，甚至在改善肝脏炎症方面优于易善复，但是它的价钱明显低于易善复，所以是值得推广的一种用于治疗非酒精性脂肪肝的复方中药。

参考文献

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12芦建慧,陈俭静,彭相文,等.非酒精性脂肪肝病患者血清肿瘤坏死因子-α的检测及意义．国际免疫学杂志，2013，36：310-313.

13余世敏，胡东辉，张京伟.清肝降脂汤治疗非酒精性脂肪肝的临床疗效研究．重庆医学，2012，41：3255-3256,3259.

14刘锐,李劲平,伍娟娟,等.丹苘软胶囊对非酒精性脂肪肝模型大鼠胰岛素抵抗及瘦素抵抗的影响．中国实验方剂学杂志，2012，18：188-191.

15朱文正，戚国勇，贾彦.中西药合用治疗非酒精性脂肪肝疗效观察．实用中医药杂志，2014，30：35-36.

(收稿日期：2015-10-27)

【中图分类号】R 575

【文献标识码】A

【文章编号】1002-7386(2016)06-0918-03

通讯作者：杨莉，050021河北省石家庄市第五医院；

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.06.041

项目来源：河北省中医药管理局科学技术研究计划基金项目(编号：2012166);河北省科学技术研究与发展计划项目(编号：14277753D)

E-mail：yangli_yl6666@126.com