神经末梢受体在胃食管反流病中的作用

徐治群　李秀梅

1)湖北省荣军医院　武汉　430079　2)湖北医药学院附属襄阳医院　襄阳　441000



神经末梢受体在胃食管反流病中的作用

徐治群1)李秀梅2)

1)湖北省荣军医院武汉4300792)湖北医药学院附属襄阳医院襄阳441000

【摘要】目的探讨辣椒素受体(TRPV1，也称瞬时感受器电位香草酸受体1)在胃食管反流疾病(GERD)患者组织中的表达及其与患者症状的关系。方法利用电子胃镜采集58例GERD患者[反流性食管炎(RE)患者26例，非糜烂性反流病(NRED)患者32例]及胃镜检查正常对象(对照组)的食管黏膜组织(胃食管连接处上方3 cm)，采用HE染色评估组织炎症反应程度、免疫组化染色S-P法判定组织TRPV1表达情况、反流性疾病诊断问卷(RDQ)对患者的症状评分并进行组间比较和相关性分析。结果GERD患者的RDQ症状积分、GS炎症积分与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；RE患者、NRED患者的RDQ症状积分分别为16.77±5.39、17.52±5.03，均显著高于对照组(P<0.05)，RE患者>NRED患者>对照组的GS炎症积分(P<0.05)。GERD患者的TRPV1表达OD值显著高于对照组(P<0.05)，RE组OD值(0.023 1±0.002 6)显著高于NRED组和对照组(P<0.05)，NRED组显著高于对照组(P<0.05)。GERD患者与RDQ症状积分呈显著的正相关(r=0.517)，与GS炎症积分呈显著的正相关(r=0.554)；RE患者与RDQ症状积分呈显著的正相关(r=0.632)，与GS炎症积分呈显著的正相关(r=0.532)；NRED患者与RDQ症状积分呈显著的正相关(r=0.671)，与GS炎症积分呈显著的正相关(r=0.512)。结论GERD患者的TRPV1表达显著高于正常人群，且与患者的临床症状、炎症反应的严重程度有一定的相关关系。

【关键词】辣椒素受体；胃食管反流疾病；反流性食管炎；非糜烂性反流病

胃食管反流指胃食管因过多接触或暴露于胃液而出现的一种的食管黏膜损伤及食管反流症状。胃食管反流发病诱因多元包括患者自身食管抗反流机制损伤(如食管下括约肌功能障碍、食管体运动能力异常等)、食管外机械因素等[1]。辣椒素受体(vanill oid receptor subtype 1，TRPV1)是镇痛及疼痛的研究热点之一，动物实验显示，TRPV1是疼痛及组织损伤后痛觉敏感化的重要参与物质[2]。TRPV1与反流食管炎、功能性消化不良、肠胃道肿瘤等多种消化道疾病存在一定联系。为分析TRPV1在胃食管反流疾病(GERD)患者组织中的表达及其与患者症状的关系，笔者选取本院消化内科收治的58例GERD患者进行研究，现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料以本院消化内科2012-09—2014-09收治的58例GERD患者[反流性食管炎(RE)患者26例，非糜烂性反流病(NRED)患者32例]及胃镜检查正常对象30例(对照组)为研究对象。RE组26例，男15例，女11例；年龄24～75岁，平均(46.62±12.59)岁。NRED组32例，男18例，女14例；年龄26～77岁，平均(48.17±13.04)岁。对照组30例，男17例，女13例；年龄28～73岁，平均(45.92±11.08)岁。3组年龄、性别构成差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2纳入标准(1)GERD患者均来自于本院消化内科，具有典型的烧心、反流症状，胃镜检查食管远端黏膜未见糜烂等表现，PPI试验阳性；(2)对照组研究对象：无烧心、反流等临床症状，在本院接受电子胃镜检查但结果为正常的患者。

1.3排除标准(1)食管狭窄、消化性溃疡、食管及胃肿瘤患者、Barrett食管、近2周服用PPI或近1周服用H2受体拮抗剂的患者；(2)合并严重的肝肾功能疾病患者；(3)合并糖尿病、近期服用抗癫痫药物、口服抗凝血剂或出血性疾病患者；(4)孕妇及哺乳期妇女。

1.4标本采集及处理所有患者均行常规镜检，并取食管下段、胃窦部以及十二指肠球部黏膜组织2 mm×2 mm，选用生理盐水冲洗，石蜡包埋，切片，烤片，二甲苯脱蜡，修复抗原，H2O2消除内源性过氧化物酶活性，滴入兔抗人TRPV1多克隆抗体一抗，孵化30 min，PBS洗涤，二抗，洗涤，BAD显色，苏木素复染，镜检。

1.5研究方法

1.5.1症状积分评估：本研究采用反流性疾病诊断问卷(RDQ)进行症状积分评估，主要包括4各症状：烧心、胸痛后疼痛、反酸、反食为主要症状，根据近4周的发作时间及频率进行评分，发作频率：从未有过为0分，<1 d/周为1分，1 d/周为2分，2～3 d/周为3分，4～5 d/周为4分，5～6 d/周为5分；症状积分：症状不明显，医师提醒下发现为1分；症状明显，影响生活，偶尔需要服药为3分；症状非常明显，需要长期服药5分；症状频率积分及严重程度积分总分为RDQ总积分。

1.5.2HE染色炎症反应程度积分标准：采用GS炎症评分标准，对组织基底细胞增生、乳突的延长、细胞间隙增大进行评分，分别对应0、1、2分；同时根据上皮内部嗜酸性粒细胞计数进行评分：0分为无嗜酸性粒细胞，1分为1个嗜酸性粒细胞，2分为>1个嗜酸性粒细胞；两类评分相加即为GS评分总分。

2结果

2.14组症状积分及GS炎症积分比较GERD患者的RDQ症状积分、GS炎症积分与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；RE、NRED患者的RDQ症状积分均显著高于对照组(P<0.05)，RE患者>NRED患者>对照组的GS炎症积分(P<0.05)。见表1。

表1　4组症状积分及GS炎症积分比较　±s，分)

注：与对照组比较，*P<0.05，与NRED患者比较，#P<0.05

2.24组食管组织中TRPV1表达情况比较GERD患者的TRPV1表达OD值显著高于对照组(P<0.05)，RE组OD值(0.023 1±0.002 6)显著高于NRED组和对照组(P<0.05)，NRED组显著高于对照组(P<0.05)。见表2、图1。免疫组化S-P组化染色结果见图2。

表2　4组食管组织中TRPV1表达情况比较　

注：与对照组比较，*P<0.05；与NRED患者比较，#P<0.05

图1　4组食管组织中TRPV1表达

ABC

图2免疫组化S-P组化染色结果

A：RE患者TRPV1表达图，可见棕褐色细胞

B：NRED患者TRPV1表达图，可见棕褐色细胞

C：对照组TRPV1表达图

2.3相关性分析 GERD患者与RDQ症状积分呈显著的正相关(r=0.517)，与GS炎症积分呈显著的正相关(r=0.554)；RE患者与RDQ症状积分呈显著的正相关(r=0.632)，与GS炎症积分呈显著的正相关(r=0.532)；NRED患者与RDQ症状积分呈显著的正相关(r=0.671)，与GS炎症积分呈显著的正相关(r=0.512)；对照组与RDQ症状积分、GS炎症积分均无相关性。见表3。

表3　GERD患者与RDQ症状积分、GS炎症积分的

3讨论

胃食管反流疾病患者临床症状与内镜下黏膜损伤程度不成正比，部分黏膜无异常患者依然存在反酸、烧心等症状，而部分伴胃食黏膜损伤的患者则可能没有任何临床症状。这种异常情况给胃食管反流疾病病理分析带来的极大挑战，为此有学者给予志愿者注入辣椒素以激活其受体(TRPV1)后发现，患者胸痛、烧心症状显著增强[3]。国外研究证实，非糜烂性反流、反流性食管炎患者食管黏膜鳞状上皮细胞及固有神经纤维内均存在TRPV1高表达情况[4]，这表明TRPV1可能是胃食管反流疾病发生、发展的重要影响因子。

TRPV1是-6次螺旋跨膜蛋白质的一种，主要分布于背根神经节、结状神经节及三叉神经节的小型或中型细胞内容。TRPV1是伤害性刺激整合器的一种，归属于感受器电位通道家族，可探测、整合热及化学刺激信号，在接受刺激后可起到Ca2+内流，诱使细胞内Ca2+高表达，进而激活一系列信号的传导，形成动作电位，最终将信号反应至中枢神经系统，使机体生成灼伤样疼痛[5]。以往研究显示，食管TRPV1多集中于神经细胞及神经纤维上，但近些年的研究发现，TRPV1还表达于食管鳞状上皮细胞上，为TRPV1参与食管相关病理改变提供了更多证据[6]。食管黏膜层并不存在神经细胞，最多分布少量神经纤维末梢，提示胃食管反流疾病可能只与食管鳞状上皮细胞内的TRPV1有关[7]。本次研究发现，GERD患者的TRPV1表达OD值显著高于对照组，RE组OD值显著高于NRED组和对照组，NRED组显著高于对照组，提示TRPV1高表达是胃食管反流疾病的重要影响因素。我们的研究中还发现GERD患者的RDQ症状积分、GS炎症积分与对照组比较差异均有统计学意义；RE患者、NRED患者的RDQ症状积分均显著高于对照组，RE患者>NRED患者>对照组的GS炎症积分。此外，GERD患者与RDQ症状积分呈显著的正相关(r=0.517)，与GS炎症积分呈显著的正相关(r=0.554)；RE患者与RDQ症状积分呈显著的正相关(r=0.632)，与GS炎症积分呈显著的正相关(r=0.532)；NRED患者与RDQ症状积分呈显著的正相关(r=0.671)，与GS炎症积分呈显著的正相关(r=0.512)，这表明TRPV1高表达与组织炎症密切相关。食管炎症时，局部神经生长因子及胶质细胞源性神经营养因子将高表达，进而诱使细胞膜去极化，并影响膜电位水平，最终影响TRPV1表达[8]。此外，局部神经生长因子还可通过调节TRPV1的转录和翻译来促进TRPV1蛋白的高表达[9]。对于内镜检测无食管黏膜损伤而存在胃食管反流症状的患者，分析其发病机制可能为：(1)患者内镜下虽无黏膜损伤，但依然存在微管炎症，如基底细胞增殖、嗜酸性粒细胞浸润、乳突延长等，这些可能诱发胃食管反流；(2)患者除胃食管反流诱因外，还可能存在情志相关诱因，后者也可能导致局部神经生长因子及其他神经营养因子异常表达，并诱发本病[10]。

综上所述， TRPV1高表达是GERD发生、发展的重要影响因素，且TRPV1表达水平还与患者的临床症状、炎症反应的严重程度有一定的相关关系。提示TRPV1可作为GERD诊断的新指标，或可为GERD防治工作提供新靶点。

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(收稿2014-12-15)

Effect of nerve ending receptors in gastroesophageal reflux disease

XuZhiqun﹡,LiXiumei

﹡RongjunHospitalofHubeiProvince,Wuhan430079,China

【Abstract】Objective To discuss the expression of capsaicin receptor (TRPV1,also known as transient receptor potential vanilloid 1) in gastroesophageal reflux disease (GERD) in patients and their relationship. Methods Electronic gastroscope was used for the esophageal mucosa (3 cm above the gastroesophageal junction) in 58 GERD patients (reflux esophagitis: 26 cases; RE in patients with non erosive reflux disease: 32 cases of NRED) and normal subjects (control group). HE staining was used to evaluate the tissue inflammatory reaction degree,immunohistochemical staining SP method was used to determine tissue TRPV1 expression,reflux disease questionnaire (RDQ) was used on the patients with the symptom score,these were compared and were correlatively analyzed. Results The differences between GERD patients with RDQ symptom score and GS inflammation score and control group were statistically significant (P<0.05); RDQ symptom score in RE patients and NRED patients were 16.77±5.39,17.52±5.03,which were significantly higher than those in the control group (P<0.05),GS inflammation score in RE patients>NRED patients>control group (P<0.05). The OD value of the expression of TRPV1 in GERD patients was significantly higher than that of the control group (P<0.05),the OD value in RE group was 0.0231±0.0026,which was significantly higher than that of NRED group and control group (P<0.05),the NRED group was significantly higher than that of the control group (P<0.05). There were significant positive correlations between GERD patients and RDQ symptom score (r=0.517),and GS inflammation score (r=0.554); there were significant positive correlations between RE patients and RDQ symptoms score (r=0.632),and GS inflammation score(r=0.532); there were significant positive correlations between NRED patients and RDQ symptoms score (r=0.671),and GS inflammation score(r=0.512). Conclusion The expression of TRPV1 in GERD patients is significantly higher than that of normal people,and there is a certain correlation between the severity of clinical symptoms and inflammatory response in patients.

【Key words】Capsaicin receptor; Gastroesophageal reflux disease; Reflux esophagitis; Non erosive reflux disease

【中图分类号】R743.3

【文献标识码】A

【文章编号】1673-5110(2016)04-0005-04