龙蔓藤茶增强免疫力功能的实验研究

冯新玲，陈科力，李　娟

(湖北中医药大学 教育部中药资源和中药复方重点实验室，武汉 430065)



龙蔓藤茶增强免疫力功能的实验研究

冯新玲，陈科力，李娟*

(湖北中医药大学 教育部中药资源和中药复方重点实验室，武汉 430065)

摘要目的：研究龙蔓藤茶增强免疫力功能的作用.方法：采用雌性昆明小鼠，设9.10、18.20、54.60 g·kg(-1) 3个剂量组，每日灌胃1次，连续给样品30 d，检测对小鼠体重、胸腺、脾脏器官、ConA诱导的脾淋巴细胞转化、DNFB诱导的DTH、溶血空斑数、血清半数溶血值(HC(50))、碳廓清能力、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞、NK细胞活性的影响.结果：与对照组比较，18.20、54.60 g·kg(-1)剂量能显著提高小鼠迟发型变态反应能力、NK细胞活性、半数溶血值，54.60 g·kg(-1)剂量能显著提高小鼠抗体生成细胞数，各剂量对小鼠体重增长、胸腺/体重比值、脾脏/体重比值、单核-巨噬细胞碳廓清能力及巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力均无显著影响.结论：龙蔓藤茶具有一定增强免疫力功能的作用.

关键词龙蔓藤茶；增强免疫力；小鼠

Effects of Long-man Tea fromAmpelopsisgrossedentataon the Regulation of Serum Lipid

FengXinling,ChenKeli,LiJuan

(Key laboratory of Ministry of Education on Traditional Chinese Medicine Resource and Compound Prescription，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China)

AbstractObjective: To study the effect of Long-man tea fromAmpelopsisgrossedentataon immunity functions of mice. Methods: The female Kunming mice were administered with Long-man tea fromAmpelopsisgrossedentataat the dose of 9.10, 18.20 and 54.60 g·kg-1once a day for 30 days by intragastric infusion, respectively. Then the weight, thymus, spleen , ConA-induced spleen lymphocyte proliferation, DNFB-induced DHT, the number of hemolytic plaque, half of hemolytic serum (HC50), carbon clearance ability, macrophage phagocytosis of chicken erythrocytes, NK cell activity were detected after one month with the tested samples. Results: Compared with control group, the dose of 18.20 and 54.60 g·kg-1can strengthen the delayed type hypersensitivity of mice, strengthen NK cell activity and increase HC50. The dose of 54.60 g·kg-1can increase the quantity of antibody forming cells. Each dose has no significant effect on body weight increase, ratio of spleen weight to body weight, ratio of thymus weight to body weight, and ability of mononuclear macrophage carbon clearance and chicken-red cells phagocytosis. Conclusion: Long-man Tea fromAmpelopsisgrossedentatacan strengthen immunity functions of mice.

KeywordsLong-man tea;strengthen immunity; mouse

龙蔓藤茶是以藤茶、桑叶为主要原料制成的保健茶.藤茶为葡萄科显齿蛇葡萄Ampelopsisgrossedentata(Hand-Mazz) W. T. Wang 的茎叶.其性凉，归肺、肝经，轻清发散，入肺则有清热润肺利咽之效，入肝能清泻肝胆之火，并散瘀破结，长期饮用，能缓解人体亚健康某些症状[1].桑叶是我国重要的传统中药之一，藤茶伍以桑叶，相须为用，凡烟酒过度、咽喉不适、中暑、便秘之症，用之皆有良效.现代研究表明，二者均有抗氧化、降脂、降压、抗凝、调节免疫功能等作用[1-3].藤茶和桑叶加工制成的保健功能的龙蔓藤茶，不仅丰富了人们的饮食文化，而且提高了其多元化利用.本文研究了龙蔓藤茶对小鼠的细胞免疫功能、单核巨噬细胞功能、NK细胞活性的影响，为其作为保健品应用提供理论依据.

1材料和方法

1.1材料

1.1.1实验动物

SPF级雌性昆明种小鼠，体重(18±2) g，武汉生物制品研究所提供，合格证号：SCXK(鄂) 2008-0012.饲料由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供，生产许可证号SCXK(湘)2006-0001.实验条件为屏障环境，实验期间实验环境温度22～24℃，湿度50%～56%.

1.1.2样品

由武汉龙蔓生物科技有限公司提供(批号：20130601)，人口服推荐剂量为每日12 g，以每人60 kg体重计算，折合为小鼠给药剂量1.82 g·kg-1.取样品1 kg于常压下，加入温度85℃左右的蒸馏水10 L，浸泡30 min，提取两次，将提取液合并浓缩至1 L(此浸泡浓缩液1mL相当于1g样品).

1.1.3仪器与试剂

T1000型电子天平，JA2003型电子天平、洁净工作台、二氧化碳培养箱、离心机、722型分光光度计、Tecan酶标仪、Olympus显微镜、游标卡尺、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板等.

SRBC、生理盐水、Hank′s液、RPMI1640培养液、小牛血清、青链霉素.ConA、1%冰醋酸，1mol·L-1的HCl溶液，酸性异丙醇、MTT、PBS缓冲液(pH7.2～7.4)、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、琼脂糖、都氏试剂、YAC-1细胞、乳酸钠、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化性辅酶Ⅰ、2 mol·L-1的Tris-HCL缓冲液、2.5%Triton、印度墨汁、0.1%的碳酸钠、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液等.

1.2分组和剂量选择

动物随机分组，每组10只，各取4组分别进行5个实验项目[6]：碳廓清实验(Ⅰ)；ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞的活性测定(Ⅱ)；脏体比值测定、半数溶血值(HC50)的测定、和抗体生成细胞数的测定(Ⅲ)；迟发型变态反应实验(Ⅳ)；小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(Ⅴ).

据人体口服推荐量，设龙蔓藤茶低、中、高剂量分别为9.10、18.20、54.60 g·kg-1(分别相当于人体推荐量的5、10、30倍).试验时，分别取龙蔓藤茶浸泡浓缩液10.0 mL、20.0 mL、60.0 mL加蒸馏水定容至200 mL，按0.2 mL·10g-1体积给小鼠灌胃，对照组灌胃予以等体积的溶剂.每天一次，连续灌胃至少30 d.

1.3实验方法

ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)；DNFB诱导小鼠迟发型变态反应(DTH)(耳肿胀法)；抗体生成细胞检测(Jeren改良玻片法)；血清溶血素测定(半数溶血值)；小鼠碳廓清实验；小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法)；NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶测定法)[4].

1.4 数据处理

2结果

2.1样品对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响

给小鼠灌胃龙蔓藤茶30 d，各剂量组对小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值无显著影响(p>0.05).结果见表1.

表1　对小鼠胸腺、脾脏的影响±s)

2.2样品对小鼠细胞免疫功能的影响

样品对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响见表2，中、高剂量组对足跖肿胀度与对照组比较显著提高(p<0.05)，而低剂量组对小鼠迟发型变态反应能力无显著影响(p>0.05).

样品对小鼠ConA诱导的淋巴细胞转化能力的影响见表2，样品各剂量组对小鼠淋巴细胞转化能力无显著影响(p>0.05).

组别注射后24h足跖肿胀度/mm淋巴细胞增殖能力(OD差值)对照组0.23±0.110.032±0.016低剂量0.30±0.080.037±0.024中剂量0.37±0.08*0.044±0.025高剂量0.40±0.10**0.046±0.018

注：与对照组比较*p<0.05，**p<0.01

2.3样品对体液免疫的影响

样品对小鼠抗体生成细胞数的影响见表3，高剂量组对小鼠抗体生成细胞数与对照组比较有显著影响(p<0.01).

样品对小鼠半数溶血值(HC50)的影响见表3.

表3样品对小鼠抗体生成细胞数、半数溶血值(HC50)的影响

组别溶血空斑数/(个/106个脾细胞)半数溶血值/(HC50)对照组113±37156.38±36.46低剂量142±65188.34±49.32中剂量162±63207.09±35.20*高剂量198±54**217.90±58.07*

注：与对照组比较*p<0.05，**p<0.01

中、高剂量组小鼠半数溶血值(HC50)与对照组比较显著提高(p<0.05).

2.4样品对小鼠单核—巨噬细胞吞噬功能的影响

样品对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的影响：见表4，各剂量组对小鼠碳廓清能力无显著影响(p>0.05).

样品对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响：见表4，样品各剂量组对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力无显著影响(p>0.05).

表4　样品对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响±s)

2.5样品对小鼠NK细胞活性的影响

中、高剂量组对小鼠NK细胞活性与对照组比较显著提高(p<0.05)，结果见表5.

表5　样品对小鼠NK细胞活性的影响±s)

注：与对照组比较*p<0.05，**p<0.01

3结论

在本实验室条件下，经口灌胃给予小鼠9.10、18.20、54.60 g·kg-1剂量的龙蔓藤茶30 d，与对照组比较，18.20、54.60 g·kg-1剂量能显著提高小鼠迟发型变态反应能力、NK细胞活性、半数溶血值，54.60 g·kg-1剂量能显著提高小鼠抗体生成细胞数(p<0.05)，各剂量对小鼠体重增长、胸腺/体重比值、脾脏/体重比值、单核-巨噬细胞碳廓清能力及巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力均无显著影响(p>0.05).提示龙蔓藤茶具有一定增强免疫力功能的作用.

藤茶含有丰富的黄酮类，能显著增强免疫功能，在免疫毒理学方面的评价是安全的[5].桑叶含有丰富的氨基酸、黄酮类、多糖类等成分，据报道多糖对正常小鼠和免疫力低下的小鼠，均具有一定的免疫增强作用[3,6].以藤茶和桑叶为主要原料制成的龙蔓藤茶不但能改善桑叶茶的口感，而且营养成分丰富，具有良好的降脂[7]、降压等保健作用，本文证实其配伍后具有增强NK细胞活性等作用，适合某些免疫力低下人群的饮用.

参考文献

[1]李燕婧,钟正贤. 浅谈藤茶的研究与应用[J]. 中国民族民间医药, 2013,16:26-27.

[2]Tiemey M．The tolerability and pharmacokinetics of n-butyl deoxynojiri mycin in patients with advanced HIV disease (AXTG100)[J]. J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol, 1999, 10(5):549-553.

[3]许健豪,钟杨生,陈芳艳,等. 桑叶中的活性功能物质及桑叶茶的开发利用[J]. 广东蚕业, 2015，49(1)：29-33.

[4]中华人民共和国卫生部. 保健食品检验与评价技术规范[M]. 北京: 中华人民共和国卫生部, 2003: 22-34.

[5]周才碧,张敏星,穆瑞禄,等. 藤茶有效成分及功效的研究进展[J]. 福建茶叶,2014, 3:2-4.

[6]侯瑞宏,廖森泰,刘凡,邹宇晓,等. 桑叶多糖对小鼠免疫调节作用的影响[J], 食品科学, 2011,32(13):280-283.

[7]王佳芷,陈科力,严绪华,等.龙蔓藤茶辅助降血脂功能实验研究[J].中国药师, 2014,17(10):1631-1633.

中图分类号R285.5

文献标识码A

文章编号1672-4321(2016)01-0067-03

基金项目国家自然科学基金青年项目(81202615)

作者简介冯新玲(1972-),女，副教授，博士，研究方向：藏象理论及其应用研究,E-mail：604508848@qq.com

收稿日期2015-12-28*通讯作者李娟(1982-)，女，副教授，博士，研究方向：中药资源及其品质评价.E-mail：lz198207@126.com