茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡生长性能和免疫功能的影响

连永权，张　颖，曾　艳

（1.黑龙江职业学院，哈尔滨　150111；2.中国科学院天津工业生物技术研究所，天津　300308）



茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡生长性能和免疫功能的影响

连永权1，张颖2，曾艳2

（1.黑龙江职业学院，哈尔滨150111；2.中国科学院天津工业生物技术研究所，天津300308）

摘要：在基础饲粮中添加不同水平茶树菇菌糠多糖提取物研究其对爱拔益加肉鸡生长性能与免疫功能的影响。选择健康1日龄爱拔益加肉鸡99只，随机分成3组。对照组饲喂基础饲粮，试验Ⅰ、Ⅱ组分别在基础饲粮中添加茶树菇菌糠多糖提取物5和10 g·kg-1，饲喂28 d。结果表明，各组日增重与饲料增重比差异不显著（P>0.05）；与对照组相比，试验Ⅰ组肉鸡在21～28日龄间的平均增重提高了4.14%，差异显著（P<0.05）；与对照组相比，试验Ⅰ组溶菌酶C浓度和总抗氧化能力分别提高22.4%与49.2%，差异显著（P<0.05）；试验Ⅱ组总抗氧化能力与对照组无显著差异（P>0.05）；试验Ⅰ组和试验Ⅱ组的法氏囊指数与对照组相比显著增加（P<0.05）。因此，饲粮中添加一定水平的茶树菇菌糠多糖提取物可提高肉鸡免疫功能，改善生长性能，其中5 g·kg-1的添加水平效果最好。

关键词：茶树菇菌糠提取物；肉鸡；生长性能；免疫性能

茶树菇是一种极具开发潜力的珍稀食药用菌，其目前栽培数量和产品市场占有率已超过香菇[ 1 ]。茶树菇不但口味鲜美、清脆可口、营养丰富，而且具有众多药用活性，如抗癌、抗菌等，可作为神经强壮剂还可降低高胆固醇和高血脂等[ 2-4 ]。研究表明，茶树菇的生理功能与茶树菇多糖密切相关[ 5-7 ]。

食用菌采收后产生的菌糠营养丰富，其在饲料中的应用开发有利于食用菌和养殖业的共同发展，形成农业生态良性循环。然而在饲料中如果直接使用或添加菌糠，易造成大量原料霉变、运输成本过高、营养功效机理不明等问题[8-17]。因此，菌糠的处理加工、成分分析以及动物饲养效果评价研究对解决上述问题具有重大意义，能为菌糠饲料资源的推广应用提供科学方法和试验依据。

许多研究表明，多糖作为一种生物活性饲料添加剂，具有促进动物生长、提高采食量、降低料肉比、降低疾病死亡率等作用[18-21]。而食用菌菌糠多糖由于与子实体多糖具有相似的生物活性和功能也颇受关注[22-23]。试验前期对不同食用菌菌糠多糖组分与体外抗氧化性进行分析测试，发现茶树菇菌糠多糖具有优良的自由基清除与还原能力[24]。在此基础上，本研究提取制备了茶树菇菌糠多糖提取物，将其添加到肉鸡日粮中进行肉鸡饲养试验，研究茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡生长和免疫性能的影响，以期为食用菌菌糠多糖提取物在饲料中的应用奠定基础。

1　材料与方法

1.1试验材料

茶树菇菌糠（含棉籽壳75%、锯木屑15%），由天津凯润食用菌基地提供；试验动物为1日龄的同批次健康爱拔益加肉鸡，由大成食品（天津）有限公司提供；总抗氧化能力（T-AOC）试剂盒与鸡溶菌酶C（Lysozyme C）酶联免疫试剂盒分别购于南京建成科技有限公司和武汉伊艾博科技有限公司。

1.2试验方法

1.2.1茶树菇菌糠多糖提取物制备

茶树菇菌糠干燥至恒重，粉碎过筛。按料液比（m·V-1）1ϑ20加入2次水，调节pH为4.0，加入纤维素酶1%，在45℃酶解2 h，95℃灭酶15 min，冷却离心，上清液经浓缩喷雾干燥得到桔红色固体粉末，为茶树菇菌糠多糖提取物。

1.2.2茶树菇菌糠多糖提取物成分分析

采用苯酚-硫酸法测试茶树菇菌糠多糖提取物中的多糖含量；采用张丽英的方法测试菌糠多糖提取物中的蛋白质与脂肪含量[25]。

1.2.3试验动物分组与饲养管理

将1日龄肉鸡99只随机分为3组，即对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组，每组3个重复，每个重复11只。对照组饲喂基础日粮，试验Ⅰ、Ⅱ组分别在基础日粮中添加茶树菇菌糠提取物5和10 g·kg-1，试验期共28 d，期间肉鸡自由采食和饮水，饲养管理按常规程序进行免疫。基础饲粮组成及营养水平见表1。

表1　基础饲粮组成及营养水平　DM

1.2.4生产性能测试

利用称重法、饲料结算法和死、弱、病鸡淘汰法，分别在7、14、21、28日龄进行平均日增重、料重比和死淘率的计算。

1.2.5血清生化指标测试

试验结束时，每重复随机选取试验鸡4只，空腹翅静脉采血5 mL，收集于促凝管中，3 500 r·min-1离心10 min制备血清。采用试剂盒测定血清的TAOC和Lysozyme C含量。

1.2.6免疫器官指数测试

试验结束时，每个重复随机选取2只试验鸡宰杀后，摘取脾脏、胸腺和法氏囊，称鲜重，免疫器官指数计算公式见式1。

免疫器官指数=免疫器官重（g）/鸡活重（kg）（1）

1.2.7数据统计与分析

试验结果用SPSS 13.0软件，采用One Way ANOVA进行统计，并进行Duncan's多重比较，结果以“平均值±标准误”表示。

2　结果与分析

2.1茶树菇菌糠多糖提取物成分分析

茶树菇菌糠多糖提取物单糖组成见表2。

表2　茶树菇菌糠多糖提取物单糖组成mol%

茶树菇菌糠经纤维素酶酶解提取、干燥获得茶树菇菌糠多糖提取物，经分析其多糖含量为32.64±1.57（w/w），蛋白质含量为11.3±0.69（w/w），脂肪含量为0.14±0.02（w/w）。为深入了解菌糠多糖构效作用，对茶树菇菌糠多糖提取物中的多糖成分进行分析，进一步通过乙醇沉淀和Sevag脱蛋白方法获得精制茶树菇菌糠多糖。通过三氟乙酸水解，结合高效液相色谱（HPLC）方法，对水解产物进行单糖组成分析，发现其由葡萄糖、半乳糖、岩藻糖和阿拉伯糖等单糖构成，其中葡萄糖与半乳糖含量较高，其摩尔比例分别是56.9%和38.5%。

利用OPA柱前衍生法结合HPLC对精制菌糠多糖中蛋白成分进行氨基酸组成分析，结果见附图。

附图　茶树菇菌糠多糖结合蛋白的氨基酸分析结果

由图1可知，主要必需氨基酸及比例为：赖氨酸2.9%、苏氨酸7.6%、亮氨酸4.6%、缬氨酸5.9%等；风味氨基酸甘氨酸11.9%、谷氨酸20.7%、天冬氨酸11.3%和丙氨酸10.4%，均具有较高含量。以上分析结果表明，茶树菇菌糠多糖提取物是以结合蛋白形式存在，其比例占6.8%。蛋白多糖具有抗氧化、抗疲劳等功能，可作为非特异性免疫刺激的生物应答调节物质，能对动物产生免疫调节作用[26]。

2.2精制茶树菇菌糠多糖抗氧化性评价

精制茶树菇菌糠多糖抗氧化活性评价结果见表3。

表3　精制茶树菇菌糠多糖抗氧化活性评价结果

为评价茶树菇菌糠多糖的抗氧化性，选用氢转移反应机制（ORAC）和基于单电子转移机制（ABTS+和·DPPH）的清除实验以及参与氧化还原反应的FRAP实验进行评价。以水溶性维生素E（Trolox）为标准品，计算每克菌糠多糖样品相当于Trolox物质的量，即ORACFL和TEAC值，表示为μmol Trolox·g-1；以Fe2+为标准品，计算每克菌糠多糖样品相当于Fe2+物质的量，即FRAP值，表示为μmol Fe2+·g-1；以半抑制率IC50值（mg·mL-1）表示菌糠多糖清除DPPH自由基的能力。

结果表明，茶树菇菌糠多糖的ORACFL为1 215 μmol Trolox·g-1，高于You等报道的松口蘑多糖TM-P2（ORAC值894.23 μmol Trolox·g-1），与Ma等报道的灵芝多糖GLP的ORACFL值1 200 μmol Trolox·g-1相当[27-28]，这说明茶树菇菌糠多糖具有较好的抗氧自由基活性，与一些食用菌子实体多糖相当。FRAP值为281 μmol Trolox·g- 1，也高于Cheung等研究的超声波提取云芝多糖的FRAP值160 μmol Fe2+·g-1，说明茶树菇菌糠多糖有较好的铁离子还原能力[29]。Dong等研究表明，来源于人工培养冬虫夏草菌丝体多糖和野生冬虫夏草多糖两者对DPPH的IC50值分别为0.93和1.23 mg·mL-1，茶树菇菌糠多糖对DPPH的IC50介于二者之间，为1.13 mg·mL-1；对ABTS自由基清除率实验的TEAC值为63.4 μmol Trolox·g-1，也接近于相关研究报道的子实体多糖的TEAC值（68 μmol Trolox·g-1）[30-31]。综合评价，茶树菇菌糠多糖具有较高的抗氧化能力，因此进一步对其在肉鸡生长和免疫性能方面的影响进行评价。

2.3茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡生产性能的影响

茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡生产性能的影响见表4。

表4　茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡生产性能的影响

试验组与对照组比较，全期增重与饲料增重比均无显著差异（P>0.05），说明茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡的生长性能的影响不明显，这与聂新志等报道的壳聚糖对肉鸡生长性能影响结果一致[32]。然而，整个试验期间，试验组的肉鸡死淘率为0，低于对照组（死淘率3%）。试验组的肉鸡在21～28日龄的生长后期平均增重高于对照组。说明日粮中添加茶树菇菌糠多糖提取物可以减少肉鸡死淘率，在肉鸡生长后期对肉鸡有较好的增重效果，且茶树菇菌糠多糖提取物的添加量以5 g·kg-1为宜。罗长财等研究表明，真菌多糖通过调节动物胃肠道中的pH，可以抑制病原菌的生长，建立肠道最佳微生态平衡，减少粪便及氨气的排放量，可选择性地促进动物肠道有益菌如双歧杆菌、乳酸杆菌等的大量增殖而使其在胃肠道中形成微生态竞争优势，直接抑制了外源菌和肠内固有腐败菌的生长繁殖，有效地防治多种细菌性、病毒性疾病，从而降低了死亡率、提高了动物的生产性能[18]。

2.4茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡血清生化指标的影响

茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡血清生化指标的影响见表5。

表5　茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡血清生化指标的影响

由表5可知，与对照组相比，试验Ⅰ组的溶菌酶C浓度和T-AOC显著提高（P<0.05），分别提高22.4%与49.2%。而试验Ⅱ组的T-AOC提升不显著（P>0.05），说明不同剂量的茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡的血清生化指标影响不同。张敦林等在复方中草药对爱拔益加肉鸡非特异性免疫影响的研究中也发现类似情况，添加复方中草药2%的作用效果优于添加4%[33]。肉鸡血清中溶菌酶具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种药理作用。而肉鸡抗氧化能力的提高，能提高肌肉的持水性，提高肌肉的不饱和脂肪酸和脂溶性维生素的含量，是改善肉品质的重要手段[34]。由此推测，在日粮中的添加茶树菇菌糠多糖提取物5 g·kg-1，有利于肉鸡的健康生长与品质改善。前期比较了茶树菇菌糠多糖与白玉菇菌糠、香菇菌糠、平菇菌糠和蛹虫草菌糠多糖的体外抗氧化性，发现茶树菇菌糠多糖效果较好[24]。通过本试验进一步说明在一定剂量范围内茶树菇菌糠多糖也具有提高肉鸡血清总抗氧化的能力。

2.5茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡免疫器官指数的影响

茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡免疫器官指数的影响见表6。

表6　茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡免疫器官指数的影响g·kg-1

动物免疫功能的高低取决于免疫器官的发育状态及机能的强弱。一般用法氏囊、胸腺和脾脏的相对重量来评价雏鸡的免疫状态，并认为免疫器官重量降低为免疫抑制所致，反之则为免疫增强、生长发育快[35]。

由表6可知，试验Ⅰ、Ⅱ组的法氏囊指数显著增加（P<0.05），脾脏指数变化不大，而试验Ⅱ组的胸腺指数与对照组相比显著下降（P<0.05）。这说明茶树菇菌糠多糖提取物能促进禽类特有的体液免疫器官法氏囊的发育,对肉鸡B细胞、浆细胞、单核巨噬细胞和少量T细胞等的生成有利。但考虑到茶树菇菌糠多糖提取物对肉鸡胸腺发育有所抑制，其适宜添加剂量为5 g·kg-1。由于由锯木屑和棉籽壳等木质纤维素组成，茶树菇菌糠多糖提取物中含有一些酚类物质，有研究表明，酚类物质会影响动物的消化吸收能力，进而影响机体的免疫调节能力，因此需要在一定剂量范围内应用[36]。

3　结　论

茶树菇菌糠多糖提取物含有丰富的多糖和蛋白质成分，能影响肉鸡的免疫系统，显著促进禽类特有免疫器官法氏囊的发育，提高肉鸡血清中的溶菌酶含量与抗氧化能力，并对肉鸡的后期生长有一定的增重作用。推荐茶树菇菌糠多糖提取物在肉鸡日粮中的最佳添加量为5 g·kg-1。

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Effect of Polysaccharide Extract from AgrocybeCylindracea Spent Mushroom Substrate on the Growth Performance and Immune Functions of Broilers

LIAN Yongquan1, ZHANG Ying2, ZENG Yan2

（1. College of Heilongjiang Polytechnic, Harbin 150111, China; 2. Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences, Tianjin 300308, China）

Abstract:To study the effects of polysaccharide extract from Agrocybe cylindracea spent mushroom substrate on the growth performance and immune functions of broilers, ninety-nine Arbor Acres broilers at the age of one day were divided into three treatment groups radomly, including the control treatment, groupⅠ(addition of 5 g·kg-1polysaccharide extract in basal diet) and groupⅡ(addition of 10 g·kg-1polysaccharide extract in basal diet). The feeding experiment was conducted for 28 days. The results showed that, the average daily gain and feed gain ratio of three treatment groups had no obvious difference (P>0.05). The average daily gain of groupⅠduring 21～28 days was improved 4.14% than the control treatment (P<0.05); The serum parameters of lysozyme C concentration and the total antioxidant capacity (T-AOC) in groupⅠwere 22.4% and 49.2% higher than those of the control treat⁃ment (P<0.05), while no obvious change of T-AOC was detected in groupⅡ(P>0.05). Compared to the control treat⁃ment, the cloacal bursa index of groupⅠandⅡwere both significantly improved (P<0.05). These findings proved that the polysaccharide extract from Agrocybe cylindracea spent mushroom substrate could improve the immunebook=16,ebook=21functions and growth performance of broilers. The optimum additive amount of the polysaccharide extract was 5 g· kg-1in basal diet.

Key words:polysaccharide extract from Agrocybe cylindracea spent mushroom substrate; broiler; growth per⁃formance; immune function

作者简介：连永权（1964-），男，辽宁丹东人，硕士，主要从事动物营养的研究。

收稿日期：2015-12-17

中图分类号：S567.3；S831

文献标志码：A

文章编号：1001-0084（2016）02-0015-06