nm23-H1蛋白在急性髓细胞白血病患者中的表达及其疗效

任　羽, 贺爱军, 葛繁梅

(延安大学附属医院, 1. 血液科; 2. 普外科, 陕西 延安, 716000)



nm23-H1蛋白在急性髓细胞白血病患者中的表达及其疗效

任羽1, 贺爱军2, 葛繁梅1

(延安大学附属医院, 1. 血液科; 2. 普外科, 陕西 延安, 716000)

摘要:目的探讨nm23-H1蛋白在急性髓细胞白血病(AML)患者中的表达及其疗效。方法86例急性髓性白血病患者设为观察组，79例健康人群作为对照组。结果86例AML患者免疫分型阳性表达率由高到低依次为CD33(94.17%)、MPO(86.05%)、CD13(77.91%); CD13+组患者血清nm23-H1蛋白表达情况显著高于CD13-组(t=3.641, P<0.001)。CD33+组患者血清nm23-H1蛋白表达情况显著高于CD33-组(t=2.699, P=0.008)。MPO+组患者血清nm23-H1蛋白表达情况显著高于MPO-组(t=3.402, P=0.001)。初治组患者、CR组、复发组血清nm23-H1蛋白表达显著高于对照组(P<0.05)。结论AML免疫抗原CD13、CD33、MPO表达阳性患者血中nm23-H1蛋白呈现表达上调。

关键词:急性髓细胞白血病; 免疫分型; 酶联免疫吸附试验

急性髓性白血病(AML)是一种骨髓与外周血中原始和优质髓性细胞异常增生的恶性疾病，患者主要表现为贫血、出血、感染、脏器浸润、肝、脾及淋巴结肿大等特点[1]。对于AML的分型，临床有众多的标准，其中细胞形态学和免疫学标准对于AML的诊断和治疗意义重大，且能互相印证，分型符合率一致性较高。有研究[2]发现nm23-H1的表达能抑制人类造血干细胞的分化，与肿瘤的转移和肿瘤细胞增殖、分化密切相关，是一种肿瘤转移抑制基因。本研究主要分析nm23-H1在AML患者不同免疫分型抗原CD13、CD33、MPO中的表达情况与不同疗效下患者血中nm23-H1定量含量的变化，为AML患者的诊断和治疗提供参考与依据。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2013年1月—2014年12月在本院接受治疗的86例急性髓性白血病患者为观察组，其中男54例，女32例，平均年龄(67.6±9.4)岁；按FAB分型可分为原粒细胞微分化型(M0) 1例，原粒细胞白血病未分化型(M1)6例，原粒细胞白血病部分分化型(M2)25例，颗粒增多的早幼粒细胞白血病(M3) 20例，粒-单核细胞白血病(M4) 9例，单核细胞白血病(M5) 22例，红白血病(M6) 2例，巨核细胞白血病(M7) 1例。同时选取 79例在本院进行体检的健康人群作为对照组，其中男42例，女37例，平均年龄(65.8±7.5)岁。2组研究对象一般临床资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2检测与治疗方法

入院后取观察组患者髂骨处0.2 mL骨髓做涂片(6张)，按照FAB标准形态学分类。再取患者骨髓5 mL, 置于枸橼酸抗凝管中尽快送检。选用美国BD流式细胞仪，单克隆抗体选择髓系相关抗体CD13、CD33、MPO进行测量[3]，单克隆试剂由美国BD公司出品。免疫分型以CD45/SCC设计，检测10 000个细胞，判断标准如下[4]: 以白血病细胞表面抗原表达≥20%和胞内抗原≥10%为阳性。各抗原积分根据白血病免疫学分型研究组积分系统确定免疫类型。取观察组患者清晨静脉血5 mL, 离心后用0.22 μm超微滤纸进行过滤后，置于-80 ℃环境下进行测定。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定患者血清中nm23-H1蛋白的含量，试剂盒由深圳依诺金生物科技有限公司提供，操作方法详见产品说明书。

M3型AML采用全反式维甲酸联合柔红霉素进行治疗，其余类型的AML患者采用柔红霉素+阿糖胞苷(DA)、高三尖杉酯碱+阿糖胞苷(HA)或去甲氧柔红霉素+阿糖胞苷(IA)进行化疗[5]。

按照国内2004年AML疗效判断标准: ① 完全缓解(CR): 中性粒细胞≥1.5×109/L, 血小板>100×109/L, 骨髓细胞面积>20%, 骨髓幼稚细胞<5%，无Auer小体。② 复发: CR患者外周血中出现幼稚细胞或骨髓中幼稚细胞的数量超过5%。

1.3观察指标

比较2组研究对象一般临床资料；不同FAB分类免疫分型抗原CD13、CD33、MPO表达情况；比较nm23-H1蛋白在免疫分型抗原CD13、CD33、MPO中表达情况; nm23-H1蛋白在AML患者和健康人群中表达情况。

1.4统计学方法

采用SPSS 19.0软件对收集的数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差表示，进行t检验。计数资料使用卡方(χ2)检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1一般资料

本研究共纳入研究对象165例，其中观察组86例，对照组79例。2组患者一般资料见表1。2组研究对象性别比例、年龄、体质指数(BMI)、吸烟及饮酒史比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。

表1　2组研究对象一般资料比较

2.2不同FAB分类免疫分型抗原CD13、CD33、MPO表达情况

86例不同FAB分型AML患者免疫分型抗原CD13、CD33、MPO表达情况见表2。86例AML患者免疫分型阳性表达率由高到低依次为CD33(94.17%)、MPO(86.05%)、CD13(77.91%)。其中CD33表达阳性率为94.17%(81/86), M0～M7的CD33表达阳性率为1.23%(1/81)，7.41%(6/81)、29.63%(24/81)、23.46%(16/81)、9.88%(7/81)、27.16%(22/81)、1.23%(1/81)、0。

2.3nm23-H1蛋白在免疫分型抗原CD13、CD33、MPO中表达情况比较

CD13+组患者血清nm23-H1蛋白表达情况明显高于CD13-组，差异有统计学意义(t=3.641,P<0.001)。CD33+组患者血清nm23-H1蛋白表达情况明显高于CD33-组，差异具有统计学意义(t=2.699,P=0.008)。MPO+组患者血清nm23-H1蛋白表达情况明显高于MPO-组，差异具有统计学意义(t=3.402,P=0.001)。见表3。

表2　不同FAb分类免疫分型抗原CD13、CD33、

表3　nm23-H1蛋白在免疫分型抗原CD13、CD33、

与CD13-比较, **P<0.01; 与CD33-比较, ##P<0.01;

与MPO-比较, △△P<0.01。

2.4nm23-H1蛋白在AML患者和健康人群中表达情况

经过治疗后发现，初治组患者、CR组、复发组血清nm23-H1蛋白表达水平依次为(47.05±8.61)、(11.34±0.92)、(65.19±10.87) ng/mL, 显著高于对照组的(5.62±0.94) ng/mL(P<0.05)。初治组、复发组患者血清nm23-H1蛋白表达显著高于CR组(P<0.05)。

3讨论

以往医学界对于AML的诊断分型主要依靠形态学FAB分型标准进行诊断。随着免疫学、遗传和分子生物学技术的发展，FAB分型的局限性逐渐显露出来。遗传和分子生物学检测手段由于操作复杂，成本较高，作为AML的常规诊断尚需时日[6-7]。有学者[8]发现，免疫学分型具有较强的抗原特异性和异质性，交叉表达出现的概率较小，可根据白血病患者不同分化阶段的特异性抗原的表达情况对白血病进一步分型，分型准确性可高达90%以上。有学者[9]发现，AML患者最常见的表达抗原为CD13和CD33，可作为AML特异性免疫抗原标记。本研究发现, 86例AML患者免疫分型阳性表达率由高到低依次为CD33(94.17%)、MPO(86.05%)、CD13(77.91%)，与上述文献的观点一致。有研究发现，CD33是髓系细胞分化抗原，主要分布在髓系血细胞，主要存在于分化的早期阶段。90%以上的AML患者存在CD33表达上调，可以作为髓系白血病治疗的良好靶点。

肿瘤转移抑制基因(nm23)家族是一组抑制肿瘤细胞的转移表型，有研究[10]发现在人体内nm23基因主要包括nm23-H1、nm23-H2。nm23-H1、nm23-H2是RNA的2个完全不同的基因，受两个独立的调控系统调节，其中nm23-H1的mRNA的水平表达降低与癌细胞转移呈反相关。对于nm23-H1基因在恶性肿瘤中的表达研究较少，但是近年来有学者[11]发现nm23-H1具有二磷酸核苷激酶相同的结构，能够将蛋白质上的二磷酸核苷转化成三磷酸腺苷，当体内nm23-H1表达下调时可减低三磷酸核苷的生成，从而影响微管聚合和细胞素信号传导功能，促进肿瘤细胞发生浸润。本研究发现，CD13、CD33、MPO免疫抗原表达阳性的患者血中nm23-H1的表达强度高于CD13、CD33、MPO免疫抗原表达阴性的患者，说明nm23-H1基因在AML患者血中呈现高表达，可能与nm23-H1参与AML患者血中原始和幼稚细胞异常增生有关[12-13]。作者还发现，通过化疗治疗后, AML完全缓解的患者血中nm23-H1出现低表达，而在复发患者中出现异常的高表达的情况，说明nm23-H1高表达预示AML患者预后多为不良，可作为评价治疗效果和预后的特异性指标。

综上所述, AML免疫抗原CD13、CD33、MPO表达阳性患者血中nm23-H1蛋白呈现表达上调，而在完全缓解的患者中表达降低，临床上可作为AML患者诊断和预后观察的指标。

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Expression of nm23-H1 protein in patients with acute myelocytic leukemia and its efficacy

REN Yu1, HE Aijun2, GE Fanmei1

(1.DepartmentofHematology; 2.DepartmentofGeneralSurgery,TheAffiliatedHospitalofYan′anUniversity,Yan′an,Shaanxi, 716000)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore expression of nm23-H1 protein in patients with acute myelocytic leukemia (AML) and its efficacy. MethodsEighty six patients with AML were selected as observation group, while 79 normal people were selected as control group. ResultsPositive expression rates of immune classification from high to low in 86 patients with AML were 94.17% of CD33, 86.05% of MPO and 77.91% of CD13. Expression of nm23-H1 protein in CD13+ group was significantly higher than that in CD13- group (t=3.641, P<0.001). Expression of nm23-H1 protein in CD33+ group was significantly higher than that in CD33- group (t=2.699, P=0.008). Expression of nm23-H1 protein in MPO+ group was significantly higher than that in MPO- group (t=3.402, P=0.001). Expressions of serum nm23-H1 protein in initial treatment group, CR group and recurrence group were significantly higher than control group (P<0.05). ConclusionIn AML patients with positive expressions of immune antigen CD13, CD33and MPO, expression of serum nm23-H1 protein is up-regulated.

KEYWORDS:acute myelocytic leukemia; immune typing; enzyme linked immunosorbent assay

中图分类号:R 733.7

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2016)05-043-03

DOI:10.7619/jcmp.201605013

基金项目:陕西省延安市科技局项目(2014KW-03)

收稿日期:2015-11-19