顶空气相色谱法测定头孢曲松钠中三乙胺残留量

魏永红，冯　翎，宋世丘(.丽珠集团丽珠合成制药有限公司质量控制部，广东 珠海　59030； .丽珠集团丽珠合成制药有限公司质量保证部,广东 珠海　59030)



顶空气相色谱法测定头孢曲松钠中三乙胺残留量

魏永红1*，冯翎2，宋世丘1(1.丽珠集团丽珠合成制药有限公司质量控制部，广东 珠海519030； 2.丽珠集团丽珠合成制药有限公司质量保证部,广东 珠海519030)

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.02.020

摘要目的：建立顶空气相色谱法测定头孢曲松钠原料药中三乙胺残留量的方法。方法：以氢氧化钠溶液为溶剂，采用顶空毛细管气相色谱法，用DB-624毛细管柱进行梯度升温方式分离，以氮气为载气，氢火焰离子化检测器测定三乙胺残留量。结果：在上述色谱条件下三乙胺质量浓度在考察范围内与峰面积具有良好的线性关系(R2=0.999)，平均回收率为98%～105%，精密度RSD均<5%，最低检测限为0.03 μg/ml，定量限为0.15 μg/ml。结论：本法简单、灵敏、准确，适用于头孢曲松钠中三乙胺残留量的测定。

关键词顶空气相色谱； 头孢曲松钠； 三乙胺

Determination of Residual Triethylamine in Ceftriaxone Sodium by Headspace Gas Chromatography Method

WEI Yonghong，FENG Ling，SONG Shiqiu(1.Quality Control Unit，Livzon Pharmaceutical Group Inc.，Guangdong Zhuhai 519030，China； 2.Quality Assurance Unit,Livzon Pharmaceutical Group Inc.，Guangdong Zhuhai 519030，China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish headspace gas chromatography method to determine residual triethylamine in ceftriaxone sodium (CTR). METHODS：Sodium hydroxide solution was set as solvent，headspace gas chromatography method was adopted，DB-624 capillary column separation was conducted with gradient heating way；and nitrogen was set as carrier gas，FID detector was used to detect the residual triethylamine. RESULTS：Under chromatographic conditions， the concentration of triethylamine within the scope of the investigation and the peak area were in good linear relationship (R2=0.999)，the average recovery was 98%～105%，the precision ofRSD<5%，with the lowest detection limit of 0.03 μg/ml and quantitative limit of 0.15 μg/ml. CONCLUSIONS：The method is simple，sensitive and accurate，suitable for the determination of residual triethylamine in ceftriaxone sodium.

KEYWORDSHeadspace gas chromatography； Ceftriaxone sodium； Triethylamine

头孢曲松钠为目前国内抗菌药物中的基础一线用药，其不良反应发生率较其他头孢类稍高[1-2]，但价格较低，临床广泛使用。头孢曲松钠的合成工艺中主要用到乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、二氯甲烷、三乙胺等有机溶剂，目前除三乙胺外其他溶剂均有法定的标准和检验方法[3]，且也有文献报道除三乙胺外的其他溶剂的检验方法[4-5]。虽然三乙胺的限度标准在《美国药典》《欧洲药典》《中国药典》的正文均没有硬性规定，但均在凡例中要求凡工艺用到的溶剂需检验[6-8]。由于三乙胺具有助溶和轻度的防腐作用，因此需要控制其残留限度，且其限度(质量分数0.32×10-3)也已收载于《EDQM关于化学纯度和微生物质量方面的文档要求》，因此有必要对其残留量进行考察。因头孢曲松钠会和三乙胺结合，导致其残留测定具有较大难度。本研究参照《中国药典2部》(2010年版)附录残留溶剂检查法[9]，并结合其他药典的要求[10-11]，建立了一种简单、灵敏、准确的三乙胺残留量检测方法。

1材料

1.1仪器

Agilent 7890A(美国Agilent公司)，氢火焰离子化检测器(FID)；Agilent 1888顶空进样器；德国沙多利斯电子天平。

1.2药品与试剂

头孢曲松钠(丽珠集团丽珠合成制药有限公司，批号：91203006～009)；三乙胺(天津富宇精细化工有限公司 ，AR，批号110415910)；氢氧化钠(国药集团药业股份有限公司，AR，批号1110627901)；二甲基甲酰胺(DMF)(天津富宇精细化工有限公司 ，AR，批号100420)；水为纯化水。

1.3色谱条件

顶空瓶平衡温度100 ℃；热平衡时间30 min；定量环温度105 ℃；进样时间1 min；进样体积1.0 ml；色谱柱DB-624 30 m×0.32 mm×1.8 um；柱温起始温度为60 ℃，后以20 ℃/min升温至150 ℃，保持3 min，再以60 ℃/min,升温至220 ℃，保持2 min；进样口温度200 ℃；柱流量1.0 ml/min；分流比30∶1；载气为氮气N2；FID检测器；检测器温度250 ℃。

1.4试验溶液的配制

取三乙胺适量用DMF制成约0.06 mg/ml的对照品贮备液，再精密量取其1 ml置于顶空瓶中，加DMF 1 ml、水0.5 ml、1 mol/L的氢氧化钠(NaOH)溶液0.5 ml，混匀，轧盖密封为对照品溶液；取供试品适量制成0.2 g/ml的供试品贮备液，再取其0.5 ml置于顶空瓶中，同对照品溶液的制备方法操作制成供试品溶液；另同法制备空白对照溶液。

2结果

2.1系统适用性试验及专属性试验

取对照品溶液和空白对照溶液分别置顶空仪中，依法进样，记录色谱图(空白对照溶液图谱见图1～2，对照品溶液图谱见图3)。其中，三乙胺峰理论塔板数为142 120，其与相邻杂质峰分离度为30.4，表明本法系统适用性试验及专属性试验均符合要求。

图1　空白对照溶液(DMF+水+NaOH)图Fig 1　Blank reference solution(DMF+water+NaOH)

图2　空白对照溶液(DMF+水)图Fig 2　Blank reference solution(DMF+water)

图3　系统适用性试验(DMF+水+NaOH+三乙胺)典型图Fig 3　System suitability test(DMF+water+NaOH+triethylamine)

2.2精密度试验

取对照品溶液6份，依法重复进样，测定三乙胺的峰面积，结果RSD值为0.6%，表明方法精密度很好。

2.3准确度试验

取一批待测样品，制成供试品溶液，依法进样记录色谱图，按外标法计算供试品溶液中三乙胺浓度。

另取供试品贮备液3份，依法加三乙胺制成约含三乙胺80%、100%、120%的浓度。每个浓度配制3份，依法检测并记录色谱图，按标准加入法计算供试品溶液中加入的三乙胺组份的浓度，并计算其回收率。结果80%组平均回收率为98.0%，RSD为3.0%；100%组平均回收率为103.7%，RSD为4.1%； 120%组平均回收率为104.9%，RSD为2.9%；3组平均回收率均在95%～105%之内，符合残留溶剂准确度的要求。

2.4线性范围试验

分别取对照品贮备液适量，依法分别配制成相当于对照品溶液浓度的5%、10%、30%、50%、80%、100%、120%和150%的溶液，依法检测记录色谱图，按峰面积归一化法计算供试品溶液中增加的三乙胺峰面积为纵坐标，以三乙胺的浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果显示，三乙胺浓度在1～30 μg/ml浓度范围内呈线性关系，线性回归方程为Y=4.350 0X-4.315 0，相关系数为R2=0.999 0，三乙胺的浓度与峰面积的线性关系良好。

2.5检出限与定量限测定

取三乙胺适量，依法逐级稀释成不同浓度的测试溶液测定，记录色谱图。按信噪比S/N=10.0±1.0时的定量限浓度为0.15 μg/ml；S/N=3.0±1.0时的检出限浓度为0.03 μg/ml。

3讨论

3.1进样方式选择

头孢曲松钠在水中易溶，在三氯甲烷(CHCl3)或乙醚中几乎不溶；而三乙胺微溶于水，曾考虑用CHCl3等有机溶剂萃取头孢曲松钠中三乙胺[12-13]，但萃取操作较复杂，且萃取剂毒性较大；考虑到三乙胺的沸点不高可采用顶空进样法测定[14]，且顶空进样法测定残留溶剂操作简单，基质对测定无干扰，对仪器、系统污染小。

3.2溶解介质选择

三乙胺是有机碱，其沸点约90 ℃，如果全用水为溶解介质，其不易从供试品中挥发。考虑到三乙胺和DMF可以混溶，因此，加入DMF作为溶剂，以使样品溶液混合更均匀[15]。

另外，通过试验和分析头孢曲松钠及三乙胺的化学结构发现：由于头孢曲松钠和三乙胺会结合，导致只用水和DMF做溶剂时样品的加标回收率均为0，因此必须用碱破坏头孢曲松钠的结构后进样方可出三乙胺峰。通过测试不同浓度下不同体积的NaOH(0.1、0.5、1 mol/L)出峰情况发现：NaOH虽会改变DMF的峰型，但是对三乙胺的定量影响微小，低浓度的NaOH不能使加了三乙胺的头孢曲松钠溶液完全释放出三乙胺，而高浓度的NaOH的量太多又对仪器和色谱柱的损害加大，故选择1.0 mol/L NaOH溶液0.5 ml为溶解介质，用以增大三乙胺的检测灵敏度。

3.3色谱柱选择

三乙胺为含氮碱性化合物[16]，因此采用弱极性的色谱柱DB-624进行分析，三乙胺峰与相邻峰之间的分离度均能符合要求，且方法重现性好，检测灵敏度高，非常适合三乙胺残留量测定，因此选用DB-624石英毛细管柱。

3.4顶空平衡温度和时间选择

选择了80、90、100、110、120 ℃的5个顶空平衡温度分别进行平衡20 min和30 min的试验测定表明：平衡时间30 min比20 min的重现性更好；平衡温度80 ℃和90 ℃的三乙胺的峰面积较小，而高温度的峰面积相应较大，鉴于110 ℃和120 ℃的峰面积相较于100 ℃无太明显优势，且考虑样品溶液中有0.25倍体积的水，不适用太高温度的顶空条件，因此，选择100 ℃顶空平衡30 min的条件。

3.5柱温选择

因DMF沸点约150 ℃且较难洗脱，而三乙胺沸点约90 ℃，因此采用程序升温的方法操作，一方面可以保证三乙胺的分离效果，另一方面也较容易去除DMF的残留。

4结论

本研究建立的头孢曲松钠中三乙胺残留测定方法操作简单，避免了三乙胺与头孢曲松钠的结合而导致的不出峰情况，同时，检测的线性范围广，灵敏度很高，检测的准确度和精密度良好，非常适用于头孢曲松钠中三乙胺的残留检测。

参考文献

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(收稿日期：2015-08-26)

中图分类号R978.1

文献标志码A

文章编号1672-2124(2016)02-0196-03

*助理工程师。研究方向：药物分析。E-mail:weihong57@qq.com