MiR-183/182/96基因簇在食管鳞癌组织中的表达变化及意义

何斌，邱洪清，任丽华，施瑞华(苏州大学附属张家港医院，江苏张家港 5600；东南大学附属中大医院)



MiR-183/182/96基因簇在食管鳞癌组织中的表达变化及意义

何斌1，邱洪清1，任丽华2，施瑞华2(1苏州大学附属张家港医院，江苏张家港 215600；2东南大学附属中大医院)

摘要：目的观察miR-183/182/96基因簇在食管鳞癌组织中的表达变化并探讨其意义。方法 取32例食管鳞癌组织、21例食管高级别上皮内瘤变组织、9例食管低级别上皮内瘤变组织，每例患者均取其病变组织及距病变组织5 cm外的正常食管组织各1份。采用Taq-Man qRT-PCR法检测组织中miR-183、miR-182、miR-96的表达。结果miR-183、miR-182在食管鳞癌及正常食管组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05)，miR-183在食管高级别上皮内瘤变及正常食管组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05)，而miR-182在食管高级别上皮内瘤变及正常食管组织中的表达差异无统计学意义，miR-183、miR-182在食管高级别上皮内瘤变、低级别上皮内瘤变组织间的表达差异无统计学意义，在食管低级别上皮内瘤变及正常食管组织中的表达差异无统计学意义；miR-96在食管鳞癌组织、食管高级别上皮内瘤变组织、食管低级别上皮内瘤变组织中的表达差异均无统计学意义。结论 miR-183/182/96基因簇中miR-183在食管鳞癌组织、食管高级别上皮内瘤变组织中的表达上调，检测miR-183/182/96基因簇表达有助于食管鳞癌的早期筛查。

关键词：食管鳞癌；食管高级别上皮内瘤变；食管低级别上皮内瘤变;miR-183/182/96基因簇

食管癌是常见的恶性肿瘤之一，我国以食管鳞癌(ESCC)为主要类型。消化内镜的应用有助于食管癌的早期发现及诊断，但仍有部分人群确诊时已处于晚期，食管癌患者的5年生存率不足10%[1]。近年来，微小RNAs(miRNAs)在肿瘤中的作用机制成为研究热点之一，其可与靶基因的信使RNA(mRNA)的3′非编码区结合，降解mRNA或阻断其翻译，进而调节靶基因表达，在肿瘤中可发挥促癌或抑癌作用[2]。miR-183/182/96基因簇在多种肿瘤组织中表达异常，但其在食管鳞癌、食管早期病变组织中的表达尚未见相关报道。2014年7月～2015年5月，我们观察了miR-183/182/96基因簇在ESCC、食管早期病变组织中的表达变化，并探讨其意义。

1资料与方法

1.1临床资料经病理检查确诊的原发性ESCC患者32例，男27例、女5例，年龄(68±7)岁。术前均未接受过放疗或化疗等辅助治疗；消化内镜黏膜下剥离术后经病理确诊的高级别上皮内瘤变(HG-IPN)、低级别上皮内瘤变(LG-IPN)患者分别为21、9例。其中HC-IPN患者中男18例、女3例，年龄(70±8)岁；LG-IPN患者中男7例、女2例，年龄(65±9)岁。每例患者均取其病变组织及距病变组织5 cm外的正常食管组织各1份。患者均签署知情同意书并获医院伦理委员会审核批准。其中食管肿瘤的分期根据2010年WHO对于消化系肿瘤分期进行划分[3]。

1.2miR-183/182/96基因簇表达检测方法采用Taq-Man qRT-PCR方法检测上述62例份组织中miR-183/182/96的表达。 TRIzol法提取组织总RNA，Taq-Man miRNA逆转录试剂盒将10 ng的总RNA逆转录为cDNA，其中逆转录反应体系为15 μL。反应条件为16 ℃ 30 min；42 ℃ 30 min；85 ℃ 5 min。此反应得出的cDNA后用Taq-Man探针法实时定量PCR，检测组织中miRNA及U6的含量。实时定量PCR的反应体系为10 μL，反应条件为95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s；60 ℃ 60 min，共40个循环。miRNA的相对表达量以2-ΔΔCT法计算，U6为内参。

2结果

2.1miR-183在ESCC、HG-IPN、LG-IPN组织中的表达比较miR-183在32例ESCC组织中的相对表达量为0.559±0.672，在配对正常食管上皮组织中的相对表达量为0.209±0.260，差异有统计学意义(P<0.05)。miR-183在21例HG-IPN组织中的相对表达量为0.761±0.793，在配对正常食管上皮组织中的相对表达量为0.470±0.702，差异有统计学意义(P<0.05)。miR-183在9例LG-IPN组织中的相对表达量为1.487±2.092，在配对正常食管上皮组织中的相对表达量为0.744±0.852，差异无统计学意义(P>0.05)。而miR-183在HG-IPN及LG-IPN间的差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2miR-182在ESCC、HG-IPN、LG-IPN组织中的表达比较miR-182在32例ESCC组织中的相对表达量为1.881±2.393，在配对正常食管上皮组织中的相对表达量为0.571±0.676，差异有统计学意义(P<0.05)。miR-182在21例HG-IPN组织中的相对表达量为3.424±5.898，在配对正常食管上皮组织中的相对表达量为3.342±5.694，差异无统计学意义(P>0.05)。miR-182在9例LG-IPN组织中的相对表达量为1.068±1.501，在配对正常食管上皮组织中的相对表达量为0.590±0.452，差异无统计学意义(P>0.05)。而miR-182在三种组织间比较无统计学差异(P>0.05)。

2.3miR-96在ESCC、HG-IPN、LG-IPN组织中的表达比较miR-96在32例ESCC组织中的相对表达量为0.800±1.421，在配对正常食管上皮组织中的相对表达量为1.106±2.173，差异无统计学意义(P>0.05)。miR-96在21例HG-IPN组织中的相对表达量为0.675±1.655，在配对正常食管上皮组织中的相对表达量为0.750±1.765，差异无统计学意义(P>0.05)。miR-96在9例LG-IPN组织中的相对表达量为0.398±0.970，在配对正常食管上皮组织中的相对表达量为0.269±0.608，差异无统计学意义(P>0.05)。同样，miR-96在三种组织间比较无统计学差异(P>0.05)。

3讨论

miR-183/182/96家族位于人7号染色体长臂31～34位点，该区域的序列高度保守，参与细胞重要功能的调节[4]。有研究发现在小鼠体内过表达miR-183/182/96可抑制PTEN表达，通过Shh信号途径促进髓母细胞瘤发生发展[5]。此外，家族中的miR-183成员高表达于滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌细胞，靶向抑制EGR1、PTEN促进肿瘤转移[6]。亦有研究发现miR-183低表达于视网膜母细胞瘤，靶向抑制LRP6表达，对视网膜母细胞瘤细胞的增殖、转移、侵袭等产生负面影响[7]。上述研究提示miR-183在不同肿瘤中可能通过不同的靶基因影响肿瘤进展，而miR-183/182/96基因簇在食管鳞癌、食管早期肿瘤中的表达及生物学功能目前尚不清楚。

本研究发现miR-183/182/96基因簇的相对表达量高于配对正常食管组织，其中miR-183在食管鳞癌组织中的相对表达量是配对正常食管组织的3.98倍，在食管高级别上皮内瘤变组织中的相对表达量是配对正常食管组织的2.93倍，差异均有统计学意义，这表明从正常的食管鳞状上皮向上皮内瘤变发展进而演变为食管鳞癌，miR-183表达水平可能呈逐渐上调趋势，在食管早期病变演变为食管鳞癌的生物过程中发挥重要作用。彭兵锋等[8]研究发现，miR-183表达上调与ESCC的淋巴结转移相关；且miR-183表达上调者的ESCC患者的中位生存时间明显短于非上调者[8]。而我们的研究发现miR-183在HG-IPN组织中的表达水平亦高于配对正常食管组织，由此我们推测miR-183在食管鳞癌发生发展中起重要作用，其表达上调可能是ESCC患者病情发展迅速、预后不良的影响因子之一。

综上所述，miR-183/182/96基因簇高表达于食管鳞癌组织，miR-183在食管鳞癌的演变过程中发挥重要作用。

参考文献：

[1] Jemal A, Siegel R, Xu J, et al. Cancer ststistics [J]. CA Cancer J Clin, 2010,60(5):277-300.

[2] Soifer HS, Rossi JJ, Saetrom P. MicroRNAs in disease and potential therapeutic applications [J]. Mol Ther, 2007,15(12):2070-2079.

[3] Montgomery E, Field JK, Boffetta P, et al. Squamous cell carcinoma of the oesophagus. In: Bosman FT, Carneiro F, Hruba RH, Theise ND (eds) WHO classification of tumours of the digestive system[M]. IARC: Lyon, 2010：12-24.

[4] Mihelich BL, Khramtsova EA, Arva N, et al. miR-183-96-182 cluster is overexpressed in prostate tissue and regulates zinc homeostasis in prostate cells[J]. J Biol Chem, 2011,286(52):44503-44511.

[5] Zhang Z, Li S, Cheng SY. The miR-183 approximately 96 approximately 182 cluster promotes tumorigenesis in a mouse model of medulloblastoma [J]. J Biomed Res, 2013,27(6):486-494.

[6] Sarver AL, Li L, Subramanian S. MicroRNA-183 functions as an oncogene by targeting the transcription factor EGR1 and promoting tumor cell migration [J]. Cancer Res, 2010,70(23):9570-9580.

[7] Wang J, Wang X, Li Z, et al. MicroRNA-183 suppresses retinoblastoma cell growth, invasion and migration by targeting LRP6 [J]. FEBS J, 2014,281(5):1355-1365.

[8] 彭兵锋，凌志强，罗君,等.miR-183在食管鳞癌组织中的表达及其与患者预后的关系[J].浙江医学杂志，2013，35(10)：849-855.

(收稿日期：2015-11-08)

中图分类号：R735.1；R571

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2016)13-0064-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.13.025

通信作者：施瑞华(E-mail：ruihuashi@126.com)

基金项目：苏州市科技计划项目(H0303)。