傣药灯台叶化学成分、药理作用、质量控制及临床应用研究进展
2016-04-06杨妮娜王灿红赵应红云南中医学院中药学院云南昆明650500西双版纳傣族自治州傣医医院云南西双版纳66600
杨妮娜, 王灿红, 赵应红(.云南中医学院中药学院,云南昆明650500;2.西双版纳傣族自治州傣医医院,云南西双版纳66600)
傣药灯台叶化学成分、药理作用、质量控制及临床应用研究进展
杨妮娜1,2, 王灿红1, 赵应红2*
(1.云南中医学院中药学院,云南昆明650500;2.西双版纳傣族自治州傣医医院,云南西双版纳666100)
摘要:本文通过调研国内外文献和傣医药相关资料,对灯台叶的化学成分、药理作用,质量控制和临床应用进行整理研究,以期为该药材及其相关新产品的开发利用提供参考,并促进化学、药理及质量控制等现代研究和临床应用的有机结合。
关键词:灯台叶;化学成分;药理作用;质量控制;临床应用
随着空气污染日益加重,呼吸系统疾病逐渐成为临床常见病和多发病[1-3],灯台叶作为常用傣药,被广泛用于此类疾病的治疗与预防[4-7]。它为夹竹桃科鸡骨常山属植物糖胶树Alstonia scholaris(L.)I.Br.的干燥树叶,傣语习称“摆埋丁别”,味苦、微涩、寒,入火、水塔,具有清火解毒、消肿止痛、止咳化痰的功效,主治咳嗽气喘、百日咳、胃痛、泄泻、疟疾、跌打损伤、溃疡出血等疾病,收载于《中国药典》(1977年版)和《云南省中药材标准》(2005年版)第七册[8-9]。现代研究发现,灯台叶主要含生物碱、黄酮、萜类等活性成分,具有止咳平喘、解痉、抗炎、镇痛、抗肿瘤、抗疟疾、抗氧化、免疫调节、调节肠胃、调节血脂和血糖等药理作用[10-16]。本文现将近年来国内外关于灯台叶化学成分、药理作用、质量控制的研究进行综述,同时调研傣医经典著作,阐述其在傣医临床中的应用,为灯台叶及其制剂的进一步研究提供依据和参考。
1 化学成分研究
1.1 生物碱成分 目前从灯台树不同药用部位中分离出的生物碱有70余种,绝大多数都存在于叶中,以单萜吲哚类
生物碱为主。按照骨架结构不同,可分为8类,即劲直胺型、糖胶树碱、灯台树明碱、土波台文碱、鸭脚木明碱、狄他树皮碱、狄他树皮定型、其他生物碱。其中,鸭脚树叶碱、灯台树明碱、灯台碱、鸡骨常山碱、土波台文碱是近年研究的热点[17 -19],结构见图1。
从灯台叶中分离出的生物碱有a1istonitrine A、picra1ina1、mani1amine、N4-methy1angusti1obine B、19,20-(E)-va11esamine、angusti1obine B N4-oxide、20(S)-tubotaiwine、6,7-seco-angusti1obine B、scho1aricine、19-epi-scho1aricine、sarpagine、N4-demthy1echitamine、echitamidine、strictamine、akuammidine、va11esamine、1agunamine、1osbanine、Nb-methy1scho1aricine、nare1ine ethy1 ether、19-E-picrinine、va11esamine Nb-oxide、N-formy1scho1arine、a1schomine、isoa1schomine、tubotaiwine、1agunamine、20(S)-tubotaiwine、scho1-arine-N(4)-oxide、狄他树皮定、鸭脚嘎叮、肯乐因、N (4)-甲基阿枯米辛、花冠木碱、那瑞灵、文特品、异肯乐因、热嗪胺、瓦勒胺、17-O-乙酰基狄他树皮定、吴茱萸次碱、伪阿桔米精、管台文、劲直胺、5β-甲氧基劲直胺、糖胶树皮碱、N4-去甲基狄他树皮碱等[17-25]。
图1 主要生物碱结构式
1.2 黄酮类成分 惠婷婷等[26]通过乙醇回流提取、反相硅胶色谱分离纯化,结合理化及波谱鉴定等手段,从灯台叶中分离出8个黄酮类成分,即山萘酚、槲皮素、异鼠李素、异鼠李素-3-O-β-D-半乳糖苷、山萘酚-3-O-β-D-半乳糖-(2→1)-O-β-D-木糖苷、山萘酚-3-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-(2→1)-O-β-D-木糖苷。杜国顺等[27]又从中分得7,3',4'-三甲氧基-5-羟基黄酮、1-羟基-3,5-二甲氧基-双苯吡酮、3,5,7,4'-四羟基黄酮。
1.3 萜类成分 灯台叶中的萜类成分以三萜为主,即齐墩果酸、角鲨烯、乙酰-α-香树醇酯、胡萝卜苷、生育酚、灯台叶素A、yie1ded betu1in、betu1inic acid、urso1ic acid、a1-stonic acids A、a1stonic acids B、cyc1oeuca1eno1、cyc1oartano1、1upeo1、1upeo1 acetate、betu1in等[27-31]。其中,对熊果酸、齐墩果酸、cyc1oeuca1eno1、cyc1oartano1、1upeo1的研究较多,结构见图2。
2 药理作用研究
2.1 止咳平喘 单萜吲哚类生物碱是灯台叶止咳平喘的主要成分,同时黄酮类成分也兼有一定的平喘作用,这与抑制平滑肌细胞的外钙内流、内钙释放及蛋白激酶C信号传导系统有关,而镇咳以外周作用为主[32]。杨坤芬和赵云丽[33]采用豚鼠枸橼酸引咳法及组胺和氯化乙酰胆碱引喘法,探索灯台叶碱对镇咳、平喘的最低有效剂量,发现其平喘的最低有效剂量为7.5 mg/kg。杨泳等[34]以豚鼠为实验对象,喷雾枸橼酸制造咳嗽模型,记录从喷雾结束到出现第一次咳嗽的时间和5 min内的咳嗽次数,选择5 min内咳嗽大于10次的豚鼠,灌胃给予灯台叶生物碱,发现该成分有显著的止咳作用(P<0.01)。然后,将0.2%组胺和1%乙酰胆碱等体积混合,给豚鼠喷雾30 s,记录从喷雾开始至出现惊厥的时间,筛选潜伏期合格的动物,灌胃给予灯台叶黄酮类成分,1 h后再进行致喘实验,记录“引喘潜伏期”,发现该成分有明显平喘作用(P<0.01)。
2.2 抗炎镇痛 灯台叶生物碱抗炎镇痛作用与抑制炎性递质COX、5-LOX有关,而与中枢无关,其乙醇提取物可显著减少FCA法诱导关节炎大鼠关节组织脂质过氧化水平,明显增加抗氧化酶谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶和超氧
化物歧化酶活力,该作用与其抗氧化活性密切相关[35]。灯台叶碱不同剂量连续灌胃给药3 d后,均能明显抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀,抑制蛋清所致大鼠足跖肿胀,抑制大鼠皮下棉球肉芽肿生成,减少醋酸扭体反应,增强SOD的活性,减少一氧化氮、前列腺素E2、MDA水平[35-36]。Aru1mozhi等[37]以FCA法诱导关节炎大鼠模型,观察灯台叶乙醇提取物的抗关节炎作用,发现其活性良好,可降低关节炎指数、体质量和白细胞浸润,明显减少关节组织脂质过氧化水平,显著增加谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶活力。
2.3 抗氧化作用 灯台叶水提物和醇提物均能有效抑制氧化自由基,表现出明显的抗氧化活性。Antony等[38]采用DPPH、ABTS和FIAP法,研究灯台叶水、正丁醇、乙酸乙酯提取物的抗氧化活性,发现水和正丁醇提取物作用较明显。戴云等[39]采用分光光度法,研究醇提物的体外抗氧化能力,以清除活性氧、抑制DNA损伤、抑制脂质过氧化能力为指标,与茶多酚相关能力进行对比,发现灯台叶乙醇和正丁醇提取物的以上指标与茶多酚相当。莫菁莲[40]在研究灯台叶醇提物抗肿瘤机制时发现,高剂量给药组荷瘤小鼠中H22肿瘤细胞活性氧(IOS)的水平明显低于阴性对照组。同时其血清中GI、GSH-PX、CAT、SOD活力均有所升高,机体抗氧化能力增强,MDA水平下降,表明高剂量给药组小鼠体内脂质过氧化的程度较低。
2.4 免疫调节作用 莫菁莲[40]探究灯台叶醇提物对H22肝癌移植小鼠免疫的影响时发现,高剂量醇提物能增强小鼠的碳廓清能力,提高机体体液免疫能力。韩芳[41]研究灯台叶醇提物对C57BL/6荷瘤小鼠免疫功能的影响时发现,高、中剂量组能显著提高小鼠血清白细胞介素-6、白细胞介素-10、干扰素-γ的水平,而且高剂量组还能增强T淋巴细胞增殖能力,降低CD4+/CD8+比例,从免疫分子和免疫细胞水平提高荷瘤小鼠免疫功能。
图2 主要萜类结构式
2.5 调节血糖的作用 Aru1mozhi[42]在研究灯台叶乙醇提取物对链脲霉素诱导糖尿病大鼠的降糖作用过程中发现,它能显著降低血糖、糖化血红蛋白和脂质过氧化水平,同时具有增加体质量、肝糖原、肌糖原和抗氧化的能力。Iagasa等[43]从灯台叶二氯甲烷提取物中分离到cyc1oeuca1eno1、cyc1oartano1、1upeo1、1upeo1 acetate和betu1in等萜类成分,通过葡萄糖耐受实验(OGTT)发现,前三者的混合物具有降血糖活性。
2.6 抗肿瘤作用 灯台叶醇提物对人卵巢癌细胞C200、人乳腺癌细胞MNK-7及MCF-7、人肝癌细胞SNU-398及H22、Lewis肺癌细胞、人宫颈癌细胞、HepG2、KB、HL-60、人皮肤癌细胞等具有明显的抑制作用,但机制尚不明确[40-41,44-49]。韩芳[49]采用MTT法和PI/Annexin-V染色法,研究灯台叶醇提物对体外培养的肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,发现其质量浓度在0.1~2.0 mg/mL时,能剂量依赖性地显著抑制人卵巢癌、乳腺癌和肝癌细胞的增殖,具有一定细胞毒作用,可能是灯台叶抗肿瘤的机制之一;在1~1
000 μg/mL时,对鸡胚尿囊膜血管生成有显著抑制作用,也可能与其抗肿瘤作用相关。另外,其高剂量组能显著提高C57BL/6荷瘤小鼠血清中干扰素-γ、白细胞介素-6、白细胞介素-10的水平,对肿瘤生长有明显抑制作用,而且呈剂量依赖性增加,从免疫水平提高了荷瘤小鼠的抗肿瘤作用[41]。同时,灯台叶醇提物还能清除自由基、降低移植瘤细胞的活性氧IOS,减轻机体氧化损伤,进而抑制肿瘤生长[40]。
3 灯台叶及其制剂的质量控制研究
3.1 我国现行中药质量控制概述 目前,中药质量控制模式借鉴了西药的相关方法,以鉴别、检查和含有量测定为主[50],但中药成分复杂,构效关系不明确,疗效是多成分协同作用的结果,故仅以单个或多个成分的含有量来评价中药质量具有一定局限性,不能满足现代中药质量控制的需要。近年来,指纹图谱技术应运而生,其注重宏观规律的特征分析,强调多个成分相对稳定的比例关系及位置顺序相互制约的完整色谱或综合光谱特征[51],凭借“整体性”和“模糊性”的特点,在中药质量控制中得到广泛应用,主要有紫外光谱、红外光谱、薄层色谱、液相色谱、气相色谱、毛细管电泳及相关联用技术。但由于中药化学成分受产地、采收期、加工方法、气候、土壤等因素影响较大,在指纹图谱中选择合理的指纹信息进行中药质量控制和评价相对困难,部分药物的化学成分难以用一般的光谱和色谱来体现[52]。因此,研究者又提出了“谱效学研究”、“等效成分群”、“生物效价研究”、“组分结构理论”、“中药基因组学”、“中药代谢组学”、“中药蛋白质组学”等理论和方法,应用于中药质量控制研究[53-54]。
3.2 灯台叶及其制剂质量控制 目前,灯台叶及其制剂的质量标准滞后。该药材曾收载于《云南省药品标准》1974年版和《中国药典》1977年版,在2013年纳入《云南省中药材标准》2005年版第七册,其质量控制仅涉及以对照药材为参照的薄层鉴别[55]。1977年至2013年之间,由于相关质量控制仅局限于颜色反应,导致市场上灯台叶的质量参差不齐,安全性和有效性无法得到保障。灯台叶片和灯台叶颗粒分别收载于《国家中成药标准汇编(中成药地方标准上升国家标准部分),内科,肺系(二)分册》和《中国药典》2015年版(一部),在薄层鉴别的基础上,增加了鸭脚树叶碱含有量测定[56]。另外,有关灯台叶及其制剂的质量控制研究鲜有报道[57-59]。梁聂彦、陈学松建立面条树中鸭脚树叶碱的HPLC含有量测定法[57]。饶高雄等[58]建立灯台叶颗粒中鸭脚树叶碱含有量分析的HPLC法。刘璇等[59]建立同时测定灯台叶中鸭脚树叶碱、齐墩果酸和熊果酸含有量的方法。药材的质量直接决定了制剂的质量,进而影响到临床用药的安全性和有效性,如今灯台叶及其制剂的质量标准在不断提升,但仍处于较低的水平。
4 临床应用
4.1 灯台叶在呼吸系统疾病治疗中的应用 灯台叶是傣医临床常用药物,被广泛地用于治疗拢答儿(颌下淋巴结肿大)、拢达儿(腮腺肿大)、乃多皇迈唉列习特来(肺热咳嗽,痰多)、拢唉(嗽),习火(哮喘)、拢唉习火(咳嗽,喘息不定)等呼吸系统疾病[60]。傣医经典著作《档哈雅龙》中记载到,咳嗽者取摆埋丁别(灯台树叶)30 g煎汤,以红糖为引内服;小儿咳喘病取贺麻年(苦卡拉)15 g,摆埋丁别(灯台树叶)15 g,毫怀咪王(钩藤对钩)15 g,穿心莲10 g,捣细粉,化水调匀,药粉搓成小丸药内服;《傣医方剂学》中治疗拢达儿(腮腺肿大)时,取摆埋丁别(灯台树叶)鲜品适量,加少许青黛,捣烂外敷患处;拢唉习火(咳嗽,喘息不定)取贺罗呆哼(黄姜花根)20 g,摆埋丁别(灯台树叶)20 g,煎汤服;西双版纳州傣医医院制剂室生产的灯台叶止咳合剂和棉榔青口服液均为灯台叶制剂,十几年来由于疗效显著,备受广大患者认可[61-62]。
4.2 灯台叶在疑难杂症治疗中的应用 “风病理论”是傣医基础理论的重要组成部分,灯台叶除被用于治疗呼吸系统疾病外,还常应用于风病等疑难杂症,如农杆农暖(乳腺炎、乳腺肿痛)、“拢匹勒”(月子病致头昏目眩,周身酸痛麻木)、拢梦曼(荨麻疹)、拢洞烘(斑疹瘙痒)、纳勒冒麻、纳勒冒沙么(妇女闭经、痛经)、拢梅接路多火档(风湿肢体关节疼痛)、拢沙力坝(狂躁型精神病)和“拢匹把母”(癫痫病)。《档哈雅龙》中写到,治疗“拢匹把母”(癫痫病)时取摆埋丁别(灯台树叶)捣细蒸熟,加分因(阿魏),地利糯过(犀鸟唾液)15 g,喃麻威(佛手叶)调匀外包;“农兵杆兵飞”(乳房包块、生疮)取摆埋丁别(灯台树叶)捣烂,加红糖外包;“沙力坝”不言不语,取摆庄(酸桔叶)、摆埋丁别(灯台树叶)捣烂外包[61,63]。
5 小结与展望
灯台叶为我国传统傣药材,在民间药用历史悠久,主产于广东、广西、海南、福建、云南、台湾等地,收载于《中国药典》(1977年版)和《云南省中药材标准》(2005年版)第七册,被广泛地用于拢答儿(颌下淋巴结肿大)、乃多皇卖唉列习特来(肺热咳嗽)、习火(哮喘)等呼吸系统疾病和农杆农暖(乳腺疾病)、“拢匹勒”(月子病)、拢梦曼(荨麻疹)、“拢匹把母”(癫痫病)等疑难杂症的治疗与预防。灯台叶富含生物碱、萜类和黄酮,其中以生物碱和萜类的研究较为深入,是其主要活性成分。其中,单萜吲哚类生物碱(鸭脚树叶碱、鸡骨常山碱、灯台碱、土波台文碱)是灯台叶止咳平喘、抗炎的主要物质基础;熊果酸、齐墩果酸、cyc1oeuca1eno1、cyc1oartano1、1upeo1与其抗肿瘤、调节血脂、血糖、免疫等药理作用相关。
虽然灯台叶在化学和药理研究方面取得了一定进展,但仍然存在一些问题。首先,灯台叶执行标准较低,质量控制研究较少,因此建立该药材的质量控制及评价方法是亟待解决的问题,也是保证临床疗效的关键。其次,灯台叶现代研究不能脱离傣医药基础理论的指导,但目前大多数相关研究是从天然产物的角度出发,对临床的指导意义较小[64-65]。例如,灯台叶治疗农杆农暖(乳腺疾病)、“拢匹勒”(月子病)、拢洞烘(斑疹瘙痒)、拢沙力坝(狂躁型精神病)、“拢匹把母”(癫痫病)等疾病并没有得到现代研究的证明。同时,灯台叶醇提物抗肿瘤、调节血脂血糖等作用不易在临床上推广,因其提取方法与传统水煎煮相违背[40-42,66]。基于以上问题,本课题组今后将借助现代手段,以傣医药基础理论为指导,探索灯台叶的质量控制方法和治病防病的物质基础与作用机制,为开发相关新药提供实验依据,使民族医药为人类的健康事业贡献一份力量。
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[科研报道]
*通信作者:赵应红(1968—),女(佤族),主任药师,研究方向为药物制剂。Te1:15887797260,E-mai1:328664811@qq.com
作者简介:杨妮娜(1988—),女,硕士,研究方向为中药质量控制与评价。Te1:15887615937,E-mai1:547018935@qq.com
收稿日期:2015-10-08
doi:10.3969/j.issn.1001-1528.2016.03.035
中图分类号:I284.1;I285.5
文献标志码:A
文章编号:1001-1528(2016)03-0645-06