小麦低聚肽对大黄所致大鼠脾虚证的影响

胡明华，潘静华，汪文来，张方珍，赵宏艳，刘梅洁，鞠大宏△

(1．无限极(中国)有限公司，广州 510665;2．中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700)

小麦低聚肽对大黄所致大鼠脾虚证的影响

胡明华1，潘静华2，汪文来2，张方珍2，赵宏艳2，刘梅洁2，鞠大宏2△

(1．无限极(中国)有限公司，广州 510665;2．中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700)

目的:探讨小麦低聚肽是否具有健脾作用。方法:先将48只大鼠随机分为空白对照组12只，造模组36只2组，雌雄各半。给予造模组大鼠灌服10 g生药/kg体质量的大黄水溶液，每天1次，连续2周。然后，再将造模组大鼠随机分为模型组、小麦低聚肽低剂量组和高剂量组3组各12只，雌雄各半。小麦低聚肽低剂量组和高剂量组分别给予0.277 g/kg体质量和0.554 g/kg体质量的小麦低聚肽，每日1次，连续7周。在给药同时除空白对照组外，其余各组大鼠继续灌胃相同剂量的大黄水溶液，隔天1次，连续7周。实验结束后，将各组大鼠处死取材进行各项指标检测。结果:与模型组比较，小麦低聚肽高剂量组大鼠的脾虚症状得到明显改善，大鼠胃黏膜厚度均明显增加，外周血清中D-XY、AMY水平均明显增高。结论:小麦低聚肽能够改善大黄所致的大鼠脾虚证并具有健脾作用。

小麦低聚肽;大黄;脾虚证;大鼠

本实验以大黄所致的脾虚大鼠为模型，观察小麦低聚肽是否具有健脾作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 采用SPF级 SD大鼠48只，雌雄各半，体质量198 g～221 g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供(许可证号SCXK-(军)2012-0004)，饲养于中国中医科学院中医基础理论研究所清洁级实验动物室(实验动物使用许可证号SYXK-(京)2010-0032)。

1.1.2 药品 小麦低聚肽由无限极(中国)有限公司提供(批号130731)，临用前用纯净水分别配制成浓度0.0213 g/ml和0.0426 g/ml的溶液。

大黄产地四川，购自北京景弘康泰海馨大药房有限公司，经中国中医科学院中药研究所生药室鉴定，为蓼科大黄属掌叶大黄Rheum palmatum L．的干燥根及根茎的切片。大黄水溶液制备:将大黄切片粉碎，过40目筛，加10倍水搅匀，超声提取3 h，水温控制不超过50℃，静置过夜。离心4500 r/10 min取上清液，75℃水浴浓缩成浓度为1 g生药/ml的水溶液，－20℃冰箱保存，临用前用温水浴融化、摇匀。

1.1.3 主要试剂 大鼠D-木糖(D-Xylose，DXY)、大鼠α-淀粉酶(α-Amylase，α-AMY)ELISA试剂盒北京科盈美科技有限公司提供(批号为14062205和14063004)。

1.1.4 主要仪器 Multiskan Mk3酶标仪，Wellwash 4 Mk2洗板机，Mutifuge X3离心机，美国Thermo公司;DM 6000B正置显微镜，Qwin Pro V3.5.0图像分析系统，德国Leica公司。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及处理 采用Excel软件的随机数字功能分别对雌雄大鼠进行随机分组，先分为空白对照组12只，造模组36只，雌雄各半。参照文献［1］方法，采用大黄对造模组大鼠进行造模。给大鼠灌胃给予1 g生药/ml的大黄水溶液，1 ml/100 g体质量，剂量为10 g生药/kg体质量。每天灌胃1次，连续2周。每周大鼠称重1次，据此调整给予的大黄溶液量。空白对照组按同法灌胃给予等体积纯净水。造模2周后，造模组大鼠出现便溏、肛门污秽、进食不积极、精神倦怠、眯眼、蜷缩、不活泼、反应迟缓、四肢无力、毛发欠光泽、疏松等症状，而空白对照组大鼠大便正常，进食积极，精神状态良好，行为活泼，毛发光泽，表明脾虚模型制作成功。

采用Excel软件的随机数字功能，按体质量将造模组雌雄大鼠分为模型组、小麦低聚肽低剂量组和高剂量组3组各12只，雌雄各半。然后各给药组开始灌胃给药，小麦低聚肽低剂量组和高剂量组分别灌胃给予浓度0.0213 g/ml、0.0426 g/ml的小麦低聚肽溶液，给药体积均为13 ml/kg体质量，给药剂量分别为0.277 g/kg体质量和0.554 g/kg体质量。以上给药每日1次，连续7周。空白对照组、模型组按同法给予等体积纯净水。给药同时除空白对照组外，其余各组大鼠继续灌胃大黄水溶液(给药浓度、体积及剂量同上)，隔日1次，连续7周。空白对照组按同法给予等体积纯净水。每周大鼠称重1次，据此调整给药量以及给予的大黄溶液量。

在给药7周后，在大鼠处死前各组大鼠禁食不禁水12 h。在麻醉前1 h，按照文献［2］的方法，各组大鼠灌胃给予3%D-XY溶液，1 ml/100 g体质量，剂量为0.3 g/kg体质量。给D-XY 1 h后，将各组大鼠以45 mg/kg体质量剂量的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉。沿腹中线打开腹腔，腹主动脉取血静置2 h，3000 r/min离心15 min取血清，－80℃冰箱保存待测。将大鼠处死取出胃置于福尔马林中固定。

1.2.2 指标检测 ①D-XY、AMY水平检测:检测前，从冰箱中取出冻存的大鼠外周血清，室温下复温。采用 ELISA法，按照试剂盒说明书，用Multiskan Mk3酶标仪检测外周血清中 D-XY和AMY水平;②胃黏膜厚度检测:分别将胃组织标本从福尔马林中取出，于幽门上0.5 cm处切取厚度为3 mm的胃体组织，用乙醇逐级脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，用切片机切取厚度为5 μm的切片;HE染色，光学树脂封片。采用Qwin Pro V3.5.0图像分析系统，在4倍物镜下测量胃黏膜厚度。

1.2.3 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件进行统计分析，实验结果以均数±标准差(±s)表示。

2 结果

2.1 一般状况

空白对照组大鼠精神状态良好，行为活泼，被毛光泽，进食积极，大便正常。模型组大鼠便溏，肛门污秽，精神状态差，倦怠，眯眼，蜷缩，不活泼，反应迟缓，四肢无力，被毛疏松欠光泽，进食不积极。小麦低聚肽低剂量组大鼠的状况与模型组相当。小麦低聚肽高剂量组大鼠大便的性状明显好于模型组，有的虽软但成形;与模型组比较，大鼠精神状态明显变好，活动增加，反应性增强，四肢较有力，毛色也较模型组光泽且进食积极。

2.2 小麦低聚肽对脾虚大鼠胃黏膜厚度的影响

表1显示，与空白对照组比较，模型组以及小麦低聚肽高、低剂量组大鼠胃黏膜厚度均显著减少。与模型组比较，小麦低聚肽高剂量组胃黏膜厚度明显增加，低剂量组则无显著性变化。小麦低聚肽高剂量组与其低剂量组比较差异无统计学意义。

表1 各组大鼠胃黏膜厚度变化

2.3 小麦低聚肽对脾虚大鼠外周血清中DXY水平的影响

图1显示，模型组以及小麦低聚肽高、低剂量组大鼠外周血清中D-XY水平均明显低于空白对照组。小麦低聚肽高剂量组D-XY水平明显高于模型组，低剂量组与模型组比较差异无统计学意义。小麦低聚肽高剂量组与其低剂量组比较差异无统计学意义。

图1 各组大鼠外周血清中D-XY水平的变化

2.4 小麦低聚肽对脾虚大鼠外周血清中AMY水平的影响

图2显示，模型组以及小麦低聚肽高、低剂量组大鼠外周血清中AMY水平较空白对照组均明显降低。小麦低聚肽高剂量组的AMY水平与模型组比较明显增高，低剂量组与之比较差异无统计学意义。与小麦低聚肽低剂量组比较，高剂量组的AMY水平虽有增高的趋势但无统计学意义。

图2 各组大鼠外周血清中AMY水平的变化

3 讨论

中医理论认为，脾主运化即是指脾具有把水谷(饮食物)化为精微，并将精微物质转输至全身的生理功能。脾的运化功能旺盛，机体的消化吸收功能才能健全，才能为化生精、气、血、津液提供足够的养料，才能使脏腑、经络、四肢百骸、筋肉皮毛等得到充分滋养，从而进行正常的生理活动。若脾虚运化功能减弱，则机体的消化吸收功能也因之失常，而出现便溏、食欲不振、倦怠、消瘦和气血生化不足等症状。本实验结果显示，采用大黄造模后大鼠出现便溏、肛门污秽、进食不积极、精神状态差、倦怠、眯眼、蜷缩、不活泼、反应迟缓、四肢无力、被毛疏松、欠光泽等明显的脾虚症状，而小麦低聚肽高剂量能使上述症状得到明显改善。所以从症状来看，小麦低聚肽能改善大黄所致的大鼠脾虚证而具有健脾作用。

本实验结果显示，采用大黄造模9周，可使大鼠胃黏膜厚度显著减少、变薄，而小麦低聚肽高剂量能使其明显增加。这从组织形态角度证明，小麦低聚肽对大黄所致的大鼠脾虚证具有明显改善作用。

D-XY吸收实验能够准确地反映小肠的消化、吸收功能，D-XY水平的变化是目前较公认的反映脾虚状态的重要指标之一。临床研究表明，脾虚证患者的D-XY排泄率显著低于健康人［3-4］。本实验结果显示，采用大黄造模9周，大鼠外周血清中DXY水平显著降低，表明大鼠的小肠吸收功能减弱，发生了脾虚;而小麦低聚肽高剂量能使D-XY含量明显增高，说明小麦低聚肽能够增强脾虚大鼠小肠的吸收功能而改善脾虚证，达到健脾的作用。

AMY是公认的反映脾虚状态的另一个重要指标。其不需激活就具有活性，可将淀粉、糖原和大多数其他碳水化合物水解为糊精、麦芽糖以及麦芽寡糖［5］182;若其合成或分泌不足，就不能使食物得到充分消化，进而导致小肠对营养物质的吸收减少。临床研究表明，脾气虚证患者血清中的AMY水平明显降低［6］。本实验结果显示，采用大黄造模9周，大鼠外周血清中的AMY水平显著降低。这一结果说明，大黄可使AMY水平下降，进而妨碍小肠对食物的消化与吸收，这是大黄之所以能够导致脾虚证发生的机理之一;而小麦低聚肽高剂量能使其水平明显增高，说明小麦低聚肽可通过提高AMY的水平而增强小肠的消化与吸收功能，进而改善脾虚证，达到健脾的作用。

综上所述，小麦低聚肽高剂量(0.554 g/kg体质量)能使大黄所致脾虚大鼠的症状得到改善，使变薄的胃黏膜厚度增加，使外周血清中低下的D-XY和AMY水平增高，表明小麦低聚肽能够改善大黄所致的大鼠脾虚证而具有健脾作用。

［1］陈奇．中药药理研究方法学［M］．北京:人民卫生出版社，1993:1024．

［2］薛丽莉，薛金，杜晨光．益脾止泻汤对脾虚泄泻大鼠血清D-木糖含量及血浆胃动素的影响［J］．中国中医急症，2009，18 (6):951-952．

［3］陈淑芬．脾虚证与血清胃泌素、D-木糖排泄率及T细胞亚群的关系探讨［J］．四川中医，1999，17(11):6-7．

［4］肖鸣．健脾药饼灸对脾虚证患者血清胃泌素、D-木糖排泄率及T细胞亚群影响的观察［J］．甘肃中医，2000(3):53-54．

［5］朱大年．生理学［J］．7版．北京:人民卫生出版社，2012:174．

［6］杨维益，梁嵘，陈家旭，等．脾气虚证与胰腺外分泌功能关系的临床研究［J］．中国中西医结合杂志，1996，16(7):414-416．

R285．5

B

1006-3250(2016) 02-0184-02

2015-06-12

胡明华(1981-)，女，辽宁东港人，中级工程师，从事保健食品功能因子开发研究。

△通讯作者:鞠大宏(1963-)，男，辽宁凤城人，研究员，医学博士，博士研究生导师，从事中医基础理论的研究，Tel:010-64014411-2564，E-mail:judahong@sohu．com。