α-地贫静止型基因分析及临床意义分析*

2016-04-04叶婉玲

山东第一医科大学(山东省医学科学院)学报 2016年3期

关键词：珠蛋白电泳贫血

余　勋　叶婉玲　梁　军

(东莞市妇幼保健院产前诊断中心，广东东莞　523000)

α-地贫静止型基因分析及临床意义分析*

余勋叶婉玲梁军

(东莞市妇幼保健院产前诊断中心，广东东莞523000)

摘要：目的对基因确诊的220例静止型α-地贫筛查方法的回顾性统计分析，并为减少其漏诊寻找最合适的检验方法。方法选取2011年10月-2014年10月期间我院例行产检及婚检的440例经基因确诊为静止型的α-地贫患者，采用自动血细胞分析仪测定红细胞平均体积(MCV)，镜下观察红细胞形态，用血红蛋白电泳仪进行血红蛋白分析，采用 PCR法检测确诊α-地贫。结果440例确诊静止型α-地贫，132例患者 MCV≤ 80 fL，132例患者镜下 RBC形态异常，112例患者电泳后HbA(2 )正常，10例HbA2异常(<2.5%)；MCV：80.1～82 fL132例，镜下 RBC形态未见异常18例，异常114例，电泳后 HbA2正常 116例，异常6例；MCV> 82 fL176例，镜下 RBC形态异常130例，未见异常46例，电泳后 HbA2正常166例，异常10例。结论电泳方法用于筛查静止型α-地贫的检出率很低，三种方法联合检测能较好减少静止型α-地贫的漏诊。

关键词：α-地贫静止型基因；电泳；临床意义

地中海贫血(简称地贫)是一组高度异质性的遗传性溶血性疾病。它是由于珠蛋白基因突变，生物合成受阻、产量不足或缺如所致。地贫有明显地理分布特征，多见于我国南方如广东、广西及其他沿海地区。为了进一步明确α-地贫静止型基因分析及临床意义，以2010年1月至2011年8月期间在我院做产检及婚检的440例经基因确诊为静止型的α-地贫患者作为研究对象，具体报告结果如下。

1资料与方法

1.1一般资料2010年1月至2011年8月期间在我院做产检及婚检的440例经基因确诊为静止型的α-地贫患者。

1.2检查方法①样本采集：取静脉血2 ml，EDTΑ抗凝。②MCV测定：采用日本SystemKx-21自动血细胞分析仪及其配套的稀释液和溶血素试剂测定，实验前严格按照操作规程进行质控。MCV正常值为82~100 fL、异常值为<82 fL。③Hb电泳分析：采用法国sebia公司capillarys 2型毛细管电泳仪及配套试剂进行血红蛋白电泳。④镜下观察红细胞形态、Heinz小体：取0.0004 mol/L美兰液及1.25%亚硝酸葡萄糖液1∶1配制，加0.78%NaCl按1∶9配成反应液，加静脉血一滴水浴3~6 h，取出加10%龙胆紫一滴再水浴30 min，湿片镜检。⑤α-地贫基因诊断：α-地贫试剂由亚能生物技术(深圳)有限公司提供，PCR扩增仪为美国MJPTC-200，严格按说明书进行操作。

2结果

对440例确诊为静止型α-地贫作回顾性分析，132例患者 MCV≤ 80 fL，132例患者镜下 RBC形态异常，112例患者电泳后HbA2正常，10例HbA2异常(<2.5%)；MCV：80.1～82 fL132例，镜下 RBC形态未见异常18例，异常114例，电泳后 HbA2正常 116例，异常6例；MCV> 82 fL176例，镜下 RBC形态异常130例，未见异常46例，电泳后 HbA2正常166例，异常10例。

3讨论

地中海贫血是广东、广西、海南等南方省份影响最大、发病率最高的一类血红蛋白疾病，在上述地区中，又以广西最为严重，上述3省人群中α地中海贫血的发生率约为1.7%～9.3%，其中，重型α地贫的发生率也是不可忽视的，达到了0.4‰。地中海贫血在目前的治疗方法主要是预防，并没有特别有效的药物，其中HbBart's患儿在出生后几十分钟内一般都会死亡，很难有幸免，更严重的是一些胎儿常在晚期妊娠中死于母腹之中。对于重症的β地中海贫血患儿，其治疗方法一般靠频繁的输血，除此之外无其它有效方法维持患儿的生命，这对于一般的家庭是难以承受的，通过给家庭造成了严重的经济负担，很多家庭因此走向破败。综上，笔者认为，目前预防地中海贫血的最有效的途径就是阻止患儿的出生，这在法律上也是合理的途径之一。

α地中海贫血主要是因为α珠蛋白基因的缺失或者变异。目前能够查明的α地中海贫血基因突变类型资料有限，一般研究者认为有87种，其中35种为确实性基因突变造成的，53种是点缺失造成的，这是目前医学界能够得出的最确切的成果。中国的地中海贫血的基因突变类型主要有3种，其中①α+突变，其有又可以细分成两种类型，具体情形在此不作讨论，②α0突变，即突变确实了一条染色体上的部分蛋白。本研究中的477例患者中，α地中海贫血有302例，占了到总比例的64.12%。

目前，能够用来筛查珠蛋白生成障碍的手段有限，中国主要采用MCV进行筛查，但是由于MCV降低和其它一些原因，缺铁性贫血患者也比较多，除了常见轻型珠蛋白生成障碍性贫血外，一般这种诊断效果缺乏特异性，并不能取得较好的效果。用红细胞脆性一管的方法检测珠蛋白生成问题是另一些医院的做法，这种做法能达到一般效果，但是灵敏度低，部分珠蛋白生成问题难以检测，从而加重了检测的不确定性。另外一些方法如利用血红蛋白电泳技术来诊断珠蛋白生成问题，同样能起到良好效果，但是这种方法一样具有不可克服的弱点，即其对静止型珠蛋白生成障碍性贫血的诊断效果比较差。有条件的医院可以适用PCR结合反向斑点杂交法或者Gap-PCR法，此种检验方法特异性强，技术比较成熟，可以在有限的范围内推广应用。但是此种方法容易漏掉对非缺失型地中海贫血的检测。近年来，国外的多重链接酶依赖探针扩增技术发展较为成熟，能够有效对地中海贫血的疑似病例进行检、测，在此基础上还可以发现新的突变点。目前传统的地中海贫血诊断方法存在很大的漏洞，这是因为地中海贫血基因谱十分复杂。MLPA技术针对覆盖了检测的整个目的序列，针对不同的检测序列设计有针对性的探测组，检测效果大大提高，有针对性的检测数目的序列几乎所有的基因缺陷。能够正确运用基因测序技术和MLPA技术，建立一个优化、全面的筛查和诊测平台，并在临床中合理的应用，将能检测出更多缺陷基因的疑似患者，切实提高地中海贫血基因缺陷的检测能力，更好的指导婚配和生育，都有着重要的意义。

参考文献：

[1]潘翠琦,白杨,刘冬冬，等.缺失型α-地中海贫血基因携带者红细胞参数特征研究[J].国际检验医学杂志,2014,(14):1836-1838.

[2]吴洁,林丽,覃西，等.78例海南α-地中海贫血患者基因型及血液学表型分析[J].海南医学院学报,2012,18(11):1658-1661.

[3]赖兆新,欧丽荣.静止型α-地贫筛查方法的分析及意义[J].中国医药指南,2012,10(4):186-187.

[4]申芫子,李哲刚,潘干华，等.广东省佛山市新婚育龄人群α地中海贫血的分子流行病学调查[J].中国计划生育学杂志,2010,18(1):31-33.

[5]朱春江,丁晖,郑海清，等.非缺失型α珠蛋白生成障碍性贫血杂合子及纯合子基因型与表型分析[J].实用儿科临床杂志,2012,27(15):1157-1159.

[6]刘兴梅,李贵芳,吴娴，等.贵州165例α-地中海贫血基因突变类型初步分析[J].重庆医学,2015,44(17):2416-2418.

[7]张永良,汪伟山,周玉球，等.α-地中海贫血基因型和红细胞参数关系的研究[J].中华检验医学杂志,2012,35(5):418-422.

[8]巫福娟,张小庄,罗先琼，等.脐血血液学指标筛查α-地中海贫血的意义[J].中国妇幼保健,2015,30(19):3267-3269.

[9]李爱敏,唐曙明,陈海霞，等.儿童地中海贫血基因诊断和血液学指标分析[J].中国现代医药杂志,2015(8):50-52.

[10]唐海深,满婷婷,江陵，等.琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳及高分辨熔解曲线技术在α-地中海贫血新生儿筛查中的应用[J].中国产前诊断杂志：电子版,2013,5(2):7-11.

(收稿日期2015-12-02)