填精补髓、活血化痰开窍法对血管性痴呆大鼠海马组织BDNF和bFGF含量的影响

徐云龙刘 颖邰晓峰赵建军



填精补髓、活血化痰开窍法对血管性痴呆大鼠海马组织BDNF和bFGF含量的影响

徐云龙1刘 颖1邰晓峰2赵建军1

【摘要】目的 探讨填精补髓、活血化痰开窍法对血管性痴呆（VD）大鼠海马组织脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）含量的影响。方法 采用双血管阻塞（2VO）改良法复制VD大鼠模型，以盐酸多奈哌齐片为阳性对照组，观察填精补髓、活血化痰开窍法对大鼠海马组织BDNF及bFGF含量的影响。结果 与假手术组比较，模型组大鼠海马组织BDNF和bFGF含量升高（P＜0.05）；与模型组比较，阳性对照组，中药高剂量组，中药中剂量组海马组织BDNF含量升高（P＜0.05），阳性对照组，中药高剂量组海马组织bFGF含量升高（P＜0.05）。结论 填精补髓，活血化痰开窍法可通过提高VD大鼠海马组织BDNF和bFGF含量，改善其学习与记忆能力。

【关键词】填精补髓，活血化痰开窍法；血管性痴呆；脑源性神经营养因子；碱性成纤维细胞生长因子

作者单位：1 130021 长春中医药大学附属医院；2 130117 长春中医药大学 通讯作者：赵建军，E-mail：936768008@qq.com

血管性痴呆（vascular dementia，VaD）是指由各种脑血管病引起脑组织损害而产生的痴呆综合征，其患病率位居老年期痴呆类型的第二位。现代医家治疗VD多用填精补髓，活血化痰之法，且疗效较好［1］。为进一步验证填精补髓﹑活血化痰开窍法对VD的疗效，本研究采用结扎双侧颈总动脉的方法建成VD大鼠模型，观察填精补髓﹑活血化痰开窍法对VD大鼠海马组织脑源性神经营养因子（BDNF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）含量的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物

选用4～7月龄，体重220～280 g wistar大鼠，雌雄各半，购自长春市亿斯实验动物技术有限责任公司。动物合格证编号：SCXK-（吉）2011-0004。

1.2 实验用药

填精补髓﹑活血化痰开窍方：石菖蒲﹑郁金﹑山药﹑山萸肉﹑龟板胶﹑川芎﹑红花﹑肉苁蓉﹑益智仁组成。以上药由四川新绿色药业科技发展股份有限公司生产，批号：1503001。盐酸多奈哌齐片：卫材（中国）药业有限公司生产，批准文号：国药准字H20050978。规格：5 mg/片。

1.3 主要仪器

BDNF酶联检测试剂盒：长春市博迈生物器材经销部。bFGF-4酶联检测试剂盒：长春市京涛生物技术有限公司。

1.4 分组及给药

实验大鼠中随机分为假手术组﹑模型组﹑阳性对照药组﹑填精补髓﹑活血化痰开窍方高﹑中﹑低剂量组，除去死亡后每组选取10只。各治疗组在造模后第2 d开始给药治疗，中药高剂量组（2.0 g/kg体重）﹑中剂量组（1.0 g/kg体重）﹑低剂量组（0.5 g/kg体重），该给药剂量分别相当于该药物临床每天服用剂量的等效剂量4倍﹑2倍和等效剂量。阳性对照组盐酸多奈哌齐片（0.77 mg/ kg体重）。连续灌胃给药28 d，每天给药1次，给药体积为10 ml/ kg体重。假手术对照组﹑模型组给予同体积蒸馏水。

1.5 模型制备

采用双血管阻塞（2VO）改良法复制VD大鼠模型［2］。

动物购入后常规饲养，适应环境7 d。戊巴比妥钠（3 mg/kg腹腔注射）将大鼠麻醉后，仰卧位固定，颈部仔细剪毛并消毒，颈部正中切口，长约 2 cm，切开皮肤后，逐层钝性分离皮下组织及肌肉等，充分暴露双侧颈动脉，以手术线在两侧颈总动脉近心端﹑远心端分别双结扎。缝合皮肤，回笼饲养。假手术组动物操作同模型组，但不结扎动脉血管。

1.6 检测指标及方法

检测各组大鼠海马组织BDNF和bFGF含量的变化。断头处死大鼠，冰盘上快速取脑，取海马组织称重，移至玻璃匀浆管中，并加入等倍体积的预冷生理盐水，于冰盘上匀浆，充分研碎，使组织匀浆化。制备好的50%匀浆3 500 r/min离心10 min，提取上清。后采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测海马组织BDNF和bFGF含量。

1.7 统计学处理

采用Excel 2000统计学软件对本次的研究数据进行处理分析，结果用（均数±标准差）（±s）表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

与假手术组比较，模型组大鼠海马组织BDNF和bFGF含量升高，二者差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较，阳性对照组，填精补髓﹑活血化痰开窍法高剂量组，中剂量组海马组织BDNF含量升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组比较，阳性对照组，填精补髓﹑活血化痰开窍法高剂量组海马组织bFGF含量升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。结果见表1。

表1　填精补髓、活血化痰开窍法对VD大鼠海马组织BDNF、bFGF含量的影响（±s，n=10）

表1　填精补髓、活血化痰开窍法对VD大鼠海马组织BDNF、bFGF含量的影响（±s，n=10）

注：与模型组比较：*P＜0.05

组别　　剂量　B D N F（p g / m l）b F G F（p g / m l）假手术组模型组阳性对照组高剂量组中剂量组低剂量组9 9 .9 ± 1 0 .0 8*1 0 9 .2 ± 5 .6 4 1 1 7 .3 ± 9 .6 2*1 1 7 .8 ± 9 .8 1*1 1 6 .8 ± 9 .8 1*1 1 5 .0 ± 9 .1 2 --0 .7 7 m g / k g 2 .0 g / k g 1 .0 g / k g 0 .5 g / k g 7 .1 4 ± 0 .6 9*7 .8 3 ± 0 .7 8 8 .4 8 ± 0 .5 5*8 .7 9 ± 0 .7 3*8 .4 2 ± 0 .6 6 8 .2 3 ± 0 .5 4

3 讨论

神经营养因子（NeurotroPhic factors，NTF）经研究发现对神经系统有营养及保护作用。研究证实在脑缺血后脑内神经营养因子表达增加，可以起到保护受损脑细胞及促进神经细胞功能恢复的作用。

脑源性神经营养因子（BDNF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）为NTF家族重要成员，有研究显示BDNF主要由海马和大脑皮质的神经元产生［3］。它不但能促进神经元存活，还可以通过调节突触传递和可塑性，有改善学习﹑记忆和认知行为的作用［4］。bFGF作为神经营养因子，能保护神经元，促进神经生长。有研究显示，外源性的bFGF在皮下注射入VD大鼠后，能迁移至海马，使海马神经干细胞增殖，修复受损组织，从而改善VD大鼠的运动能力及学习记忆的能力［5］。

血管性痴呆在中医认为本病属“痴证”“呆痴”等范畴，且中医认为本病主要病机在于髓虚毒损，髓虚指肾精不足，髓海亏虚。毒损指瘀毒﹑热毒﹑痰毒等毒邪破坏形体，损伤脑络［6］。故本病应采用填精补髓治本，活血化痰开窍治标。通过观察填精补髓﹑化痰开窍法对VD大鼠海马组织BDNF和bFGF含量的影响。结果表明：VD大鼠海马组织BDNF和bFGF含量较假手术组升高，提示VD大鼠大脑受到缺血损伤刺激后，可应激性激活海马组织内的BDNF和bFGF表达，发挥其修复神经元的作用［7］。填精补髓﹑活血化痰开窍法高剂量组﹑中剂量组﹑阳性对照组较模型组能提高VD大鼠海马组织BDNF的含量，证明中药高剂量组﹑中剂量组能增加VD大鼠海马组织内BDNF的含量，达到改善VD大鼠学习及记忆能力的目的。而中药高剂量组和阳性对照组可提高VD大鼠海马组织bFGF的含量，且高于模型组，说明填精补髓﹑化痰开窍法高剂量组能增加VD大鼠海马组织内bFGF的含量，从而提高VD大鼠的认知功能。

参考文献

［1］韩德军，杨锡燕，田金洲，等.中药治疗痴呆随机对照文献治法及用药规律分析［J］.中医杂志，2014，55（12）：1051-1054.

［2］徐叔云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2002：1060.

［3］Kawamoto Y，Nakamura S，Nakano S，et al.Immunohistochemical localization of brain-derived neurotrophic factor in adult rat brain［J］.Neuroscience，1996，74（4）：1209-1226.

［4］Pandya CD，Kutiyanawalla A，Pillai A.BDNF-TrkB signaling and neuroprotection in schizophrenia ［J］.Asian journal of psychiatry，2013，6（1）：22-28.

［5］叶建新，林航，穆军山，等.bFGF对血管性痴呆大鼠海马神经干细胞的影响［J］.中国比较医学杂志，2009，19（11）：1-5.

［6］王永炎.关于提高脑血管疾病疗效难点的思考［J］.中国中西医结合杂志，1997，17（4）：195-196.

［7］张晋霞，伞云琨，李晶，等.养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区BDNF和bFGF蛋白表达的影响［J］.世界科学技术-中医药现代化，2015，17（11）： 2246-2251.

Effect of Tianjingbusui and Huoxuehuatankaiqiao on the Contents of Basic Fibroblast Growth Factor and Brain-derived Neurotrophic Factor in Hippocampus of Vascular Dementia Rats

XU Yunlong1LIU Ying1TAI Xiaofeng2ZHAO Jianjun11 Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130021，China，2 Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130117，China

【Abstract】

Objective To explore the effect of tianjingbusui huoxuehuatankaiqiao on the contents of basic fibroblast growth factor（bFGF）and brain-derived neurotrophic factor（BDNF）in hippocampus of vascular dementia（VD）rats.Methods The vessel occlusion（2VO）was modified to establish the VD model，and the contents of bFGF and BDNF in hippocampus were observed.Results Compared with normal group，the contents of bFGF and BDNF were increased（P＜0.05）in model group.Compared with model group，the contents of BDNF were increased（P＜0.05）in the high，middle dose of traditional Chinese medicine groups and the donepezil group，the contents of bFGF were increased（P＜0.05）in the high dose of traditional Chinese medicine groups and the donepezil group.Conclusion The tianjingbusui and huoxuehuatankaiqiao could increase the contents of bFGF and BDNF，and improve the learning and memory capability.

【Key words】Tianjingbusui，Huoxuehuatankaiqiao，Vascular dementia，Brain derived neural nutrition factor，Basic fibroblast growth factor

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2016.02.138

【中图分类号】R285.5

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9316（2016）02-0186-02-0186-03