马铃薯茎尖脱毒技术简介

吴广成（梅河口市园艺特产工作站）



马铃薯茎尖脱毒技术简介

吴广成
（梅河口市园艺特产工作站）

10.16627/j.cnki.cn22-1215/s.2016.03.010

1　脱毒材料的筛选

所选植株必须是表现典型的本品种特性的植株，包括株型﹑叶型﹑花色等植物学性状及成熟期等农艺性状；植株生长健壮，无明显的病毒性﹑真菌性﹑细菌性病害症状；单株产量和大薯率高；适时早收。

2　脱毒材料的表面消毒

块茎通过自然休眠或用1％硫脲+5毫克/升赤霉素浸种5分钟，以打破休眠。休眠后的块茎用湿润砂覆埋，待薯块顶芽长到3～4厘米时，取芽作为外植体用于茎尖脱毒。切取2～3厘米的壮芽，去掉所有叶片，用自来水充分洗净，并连续冲洗5～10分钟。然后用0.1％的升汞溶液表面灭菌10分钟，用无菌水彻底冲洗3～5次，置于封口的无菌瓶中备用（注意：无菌条件下操作）。一次消毒的芽不能太多，以免消毒后材料放置时间太长，茎尖发生褐变，影响成活率；或将通过休眠的块茎，用自来水洗净后，用75％的酒精浸泡3～5秒钟，经自来水冲洗后用0.1％的升汞溶液灭菌10分钟，在无菌条件下冲洗5次，最后将块茎切成2厘米见方的小方块，每块带一个芽眼，培养于三角瓶内（采用固体培养基）使之产生无菌苗，用于茎尖脱毒。

3　脱毒材料的热处理

于10倍解剖镜下，用尖头手术刀，切取1～1.5毫米左右的茎尖，将取下的茎尖接种在不含任何激素的马铃薯快繁培养基上，于25℃每天光照16小时的培养室培养。待茎尖长至1厘米时转入光照培养箱培养，以每天16小时光照，36℃的高温处理6～8周。

4　茎尖剥离

在超净工作台上，在40倍解剖镜下，用解剖刀小心除去茎尖周围的小叶片和叶原基，暴露出顶端圆滑的生长点，用解剖针细心切取所需的茎尖分生组织，最后只保留带一个叶原基的生长点，大小为0.1～0.2毫米。切取的茎尖分生组织随即接种到马铃薯茎尖培养基上，以切面接触琼脂，封严瓶口置于培养室进行离体培养。容器以15厘米×2厘米的试管为宜，每管盛10毫升培养基接种一个茎尖，同时给试管壁编号并做工作日记，注明接种的品种﹑试管数﹑日期等。

5　脱毒苗病毒检测

经过茎尖剥离试管培养后产生的新植株，只有经检测无任何病毒的脱毒苗才能保留，进一步在试管内大量扩繁，获得无毒试管苗群体，应用于微型薯生产。