顶空气相色谱法同时测定硫辛酸中8种残留溶剂含量

杨龙华，宿 洁，陈 涛，卢京光，栾成章

（山东省青岛市食品药品检验研究院，山东 青岛 266071）

顶空气相色谱法同时测定硫辛酸中8种残留溶剂含量

杨龙华，宿 洁，陈 涛，卢京光，栾成章

（山东省青岛市食品药品检验研究院，山东 青岛 266071）

目的 建立同时测定硫辛酸原料药中乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、环己烷、甲苯、三氯甲烷和1，2－二氯乙烷8种残留溶剂含量的顶空毛细管气相色谱法，以保证硫辛酸的质量满足药用要求。方法 采用顶空进样系统程序升温法，以FID为检测器，以5%二苯基－95%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱为色谱柱(SPB－5，60 m×0．53 mm，3．0 μm)。结果 乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、环己烷、甲苯、三氯甲烷和 1，2－二氯乙烷质量浓度分别在 123．9～1 983 μg／mL，126．8～2 029 μg／mL，7．284～116．5 μg／mL，12．89～1 031 μg／mL，95．32～1 525 μg／mL，27．05～432．8 μg／mL，1．268～20．29 μg／mL，0．139 9～1．399 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好（r在0．999 0～1．000 0）；平均回收率分别为103．3%，95．9%，93．1%，95．3%，97．5%，95．2%，93．3%，91．1%，RSD分别为0．8%，0．7%，1．1%，0．9%，1．1%，1．0%，1．4%，1．0%（n＝9）；方法检测限分别为15．37 μg／g，0．86 μg／g，0．38 μg／g，8．30 μg／g，0．090 μg／g，1．59 μg／g，1．27 μg／g，0．12 μg／g。结论 该法快速、灵敏、准确、简便，色谱峰分离度良好，适用于硫辛酸原料药中有机残留溶剂的测定。

硫辛酸；残留溶剂；顶空毛细管气相色谱法

硫辛酸在体内经肠道吸收后进入细胞，兼具脂溶性与水溶性，可在全身通行无阻，到达任何一个细胞，提供人体全面效能，是万能抗氧化剂[1－4]。以硫辛酸为原料的片剂、胶囊剂、注射剂等药物被广泛应用于临床[5－8]。硫辛酸原料药的生产工艺共涉及到8种有机溶剂，如乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、环己烷、甲苯、三氯甲烷及1，2－二氯乙烷。笔者根据人用药物注册技术要求国际协调会（ICH）和2010年版《中国药典(二部)》[9]的要求和残留溶剂的测定方法[10－15]，建立了可同时检查这8种有机溶剂残留量的顶空气相色谱法，限度统一为2010年版《中国药典（二部）》附录ⅧP残留溶剂检查规定的限度，为中国药典收载硫辛酸质量标准做好技术准备。

1 仪器与试药

GC－2010型气相色谱仪（日本岛津公司），氢火焰离子化检测器(FID)；Perkim Elmer顶空进样器。乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、环己烷、甲苯、三氯甲烷及1，2－二氯乙烷、二甲亚砜等试剂均为色谱纯（天津科密欧化学试剂有限公司，批号为 20140209，20130915，20130806，20140319，20131205，20131115，20130627，20140122，20140205）；水为超纯水；氢氧化钠为优级纯；硫辛酸原料药（A公司，上海现代制药股份有限公司，批号为1006001，1006002，1006003；B公司，江苏同和制药股份有限公司，批号为100401，100501，100701）。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：以5%二苯基－95%二甲基聚硅氧烷（SPB－5）为固定液的毛细管柱（60 m×0．53 mm，3．0 μm）；柱温起始温度：40℃，维持5 min，再以8℃／min的速率升温至180℃，维持5 min；载气:氮气；进样口温度：200℃，分流比为1∶1；检测器FID温度:250℃；顶空瓶平衡温度：80℃，平衡时间30 min。精密称取8种有机溶剂各适量，以二甲亚砜制成每1 mL中约含乙醇0．5 mg，丙酮0．5 mg，正己烷0．029 mg，乙酸乙酯0．5 mg，环己烷0．388 mg，甲苯0．089 mg，三氯甲烷0．1 mg，1，2－二氯乙烷0．1 mg的混合溶液，精密量取2．0 mL，置顶空瓶中，密封，在上述色谱条件下，顶空进样分析，记录色谱图。结果相邻色谱峰的分离度均大于1．5，理论板数均大于5 000，色谱图见图1。

2．2 溶液制备

精密称取乙醇2．478 82 g、丙酮2．536 52 g、正己烷0．145 09 g、乙酸乙酯2．579 58 g、环己烷1．906 47 g、甲苯 0．541 06 g、三氯甲烷 0．050 74 g、1，2－二氯乙烷0．027 99 g，分别置100 mL容量瓶中，加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为各残留溶剂对照品贮备液。

精密量取乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、环己烷、甲苯对照品贮备液各1．0 mL，三氯甲烷对照品贮备液0．5 mL，1，2－二氯乙烷对照品贮备液0．1 mL，置同一50 mL容量瓶中，用二甲亚砜稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL中约含乙醇0．5 mg、丙酮0．5 mg、正己烷0．029 mg、乙酸乙酯0．5 mg、环己烷0．388 mg、甲苯0．089 mg、三氯甲烷6 μg和1，2－二氯乙烷0．5 μg的混合溶液，精密量取2．0 mL，置顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。

取硫辛酸原料药约0．2 g，精密称定，置顶空瓶中，精密加入二甲亚砜2．0 mL使溶解，密封，作为供试品溶液。

图1 顶空气相色谱图

2．3 方法学考察

线性关系考察：分别精密量取2．2项下8种对照品贮备液各适量，以二甲亚砜稀释制备8种溶剂的混合标准曲线溶液。在拟订色谱条件下，顶空进样分析，记录色谱图，以各溶剂质量浓度（C，g／mL）对相应色谱峰面积（A）进行回归计算，得到各溶剂的线性范围、标准曲线回归方程及相关系数，见表1。

定量限和检测限确定：取线性关系考察项下最低浓度的混合标准曲线溶液，以二甲亚砜逐级稀释，在拟订色谱条件下，顶空进样分析，记录色谱图。当残留溶剂色谱峰的 S／N＝10时为其定量限，S／N＝3时为其检测线，结果见表1。

表1 8种残留溶剂的线性范围、标准曲线方程及定量限、检出限（n＝5）

精密度试验：取2．2项下同一对照品溶液，在上述色谱条件下，连续顶空进样分析，记录色谱图。结果乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、环己烷、甲苯、三氯甲烷和1，2－二氯乙烷峰面积的 RSD分别为1．3%，1．2%，0．9%，1．2%，0．8%，1．2%，1．9%和1．3%（n＝10），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取硫辛酸原料药（批号为1006001），按2．2项下方法平行制备供试品溶液6份，按拟订色谱条件依法测定。结果乙醇、丙酮、正己烷、甲苯、三氯甲烷和1，2－二氯乙烷均未检出，乙酸乙酯和环己烷含量的 RSD分别为1．1%和1．7%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的硫辛酸原料药（批号为1006001，含乙酸乙酯0．0123%，环己烷0．0403%，其余残留溶剂量为0）0．2 g共9份，精密称定，分别置6个顶空瓶中。按2．2项下对照品溶液的制备方法，精密量取8种溶剂对照品贮备液各适量，用二甲亚砜稀释制备含8种有机溶剂的低、中、高3种质量浓度的混合对照品溶液；精密量取3种混合对照品溶液2．0 mL各3份，分别置上述9个顶空瓶中，密封，依法进行测定并计算各溶剂回收率。结果乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、环己烷、甲苯、三氯甲烷和1，2－二氯乙烷平均回收率分别为 103．3%，95．9%，93．1%，95．3%，97．5%，95．2%，93．3%，91．1%，RSD分别为 0．8%，0．7%，1．1%，0．9%，1．1%，1．0%，1．4%，1．0%（n＝9）。

2．4 样品含量测定

取 3批硫辛酸原料药（A公司，批号为 1006001，1006002，1006003）和3批硫辛酸原料药（B公司，批号为100401，100501，100701），分别按2．2项下方法制备对照品溶液和供试品溶液，在上述色谱条件下，顶空进样分析，记录色谱图，按外标法以峰面积计算原料药中8种残留溶剂含量。结果见表2。

表2 样品中残留溶剂测定结果（%）

3 讨论

色谱柱的选择：所检查的8种溶剂极性较弱，正己烷和环己烷在极性毛细管柱DB－1301(6%氰丙基苯基－94%聚二甲基硅氧烷，30 m×0．53 mm，3．0 μm)中几乎无保留；乙醇与丙酮在非极性毛细管柱HP－5(5%苯基－95%甲基硅氧烷，30 m×0．32 mm，0．25 μm)毛细管色谱柱中不能达到基线分离。选择弱极性毛细管柱SPB－5（5%二苯基－95%二甲基聚硅氧烷，SPB－5，60 m×0．53mm，3．0 μm)，8种残留溶剂的保留时间适宜，且分离度符合规定。

溶剂的选择：硫辛酸不溶于水，选择二甲基甲酰胺作为溶剂，在SPB－5毛细管色谱柱上，甲苯与二甲基甲酰胺的色谱峰重合，影响硫辛酸中甲苯的准确检出；选择二甲亚砜作为溶剂，8种溶剂均能够准确检出。

柱温的选择：本试验中所测8种有机溶剂沸点从56℃到111℃，各溶剂沸点相差较大。因此，采用程序升温的方法，柱温起始温度40℃，维持5 min，再以8℃ ／min的速率升温至180℃，维持5 min，可使低沸点组分和高沸点组分在色谱柱中均有适宜的保留，并保证各色谱峰分布均匀且峰形对称。本试验中所采用的升温程序，减少了样品分析时间，提高了检测灵敏度，使8种溶剂色谱峰均达到较好分离。

进样方式的选择：气相色谱可直接进样和顶空进样。本试验中所测8种有机溶剂均具有良好的挥发性，适宜采用顶空进样方法。本试验中采用顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30 min，可灵敏、有效、准确地测定硫辛酸中8种有机溶剂的残留量。

所建立的方法专属性强，灵敏度高，重复性好，操作简便，符合2010年版《中国药典（二部）》方法学验证要求；用于测定硫辛酸原料药中的残留溶剂，结果准确可靠，可作为硫辛酸原料药质量控制项目之一。

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Determination of 8 Residual Solvents in Alpha Lipoic Acid by Headspace Gas Chromatography

Yang Longhua,Su Jie,Chen Tao,Lu Jingguang,Luan Chengzhang
(Qingdao Institute for Food and Drug Control,Qingdao,Shandong,China 266071)

Objective To develop a headspace gas chromatography for the determination of 8 residual solvents in alpha lipoic acid and to ensure the quality accordance with the requirements of the medical．Methods After being dissolved with DMSO,the eight residual solvents including alcohol,acetone,n－hexane,ethyl acetate,cyclohexane,methylbenzene,chloroform,1,2－ dichloroethane in alpha lipoic acid were separated by GC on a capillary column(SPB－5,60 m×0．53 mm,3．0 μm)with a mobile phase of nitrogen．And the quantities of the 8 residual solvents in alpha lipoic acid were calculated respectively．Results The calibration curves for alcohol,acetone, n－hexane,ethyl acetate,cyclohexane,methylbenzene,chloroform,1,2－dichloroethane were linear over the range of 123．9－1 983 g／mL, 126．8－2 029 g／mL,7．284－116．5 g／mL,12．89－1 031 g／mL,95．32－1 525 g／mL,27．05－432．8 g／mL,1．268－20．29 g／mL, 0．139 9－1．399 g／mL（r＝0．999 0－1．000 0）,respectively．The average recovery rates were 103．3%,95．9%,93．1%,95．3%, 97．5%,95．2%,93．3%,91．1%,RSD were 0．8%,0．7%,1．1%,0．9%,1．1%,1．0%,1．4%,1．0%(n＝9),respectively．And the LOD were 15．37 μg／g,0．86 μg／g,0．38 μg／g,8．30 μg／g,0．090 μg／g,1．59 μg／g,1．27 μg／g,0．12 μg／g,respactively．Conclusion The method is sensitive,accurate and convenient with good resolution,which can be applied to control the quality of alpha lipoic acid．

alpha lipoic acid;residual solvent;HS－GC

R927．11；R977．2

A

1006－4931(2016)03－0049－04

绍：杨龙华（1979－），女，汉族，硕士研究生，主管药师，主要从事药物质量评价及分析，（电话）0532－85785299（电子信箱）ylhlonghua＠163．com。

2015－05－13；

2015－09－15)