阿莫西林盐酸氨溴索血药浓度测定及药代动力学研究

严瑾

（上海中医药大学附属龙华医院，上海 200032）

阿莫西林盐酸氨溴索血药浓度测定及药代动力学研究

严瑾

（上海中医药大学附属龙华医院，上海 200032）

目的 建立测定阿莫西林和盐酸氨溴索血药浓度及药物代谢动力学（简称为药代动力学）的研究方法。方法 采用高效液相色谱(HPLC)法，色谱柱为Inertsil ODS－2柱(150 mm×4．6 mm，5 μm)，流动相为甲醇－pH＝4的0．01 mol／L醋酸铵溶液(8∶92，V／V)检测波长为244 nm，温度为25℃，流速为1．0 mL／min，进样体积为20 μL。结果 阿莫西林质量浓度在12．3～200 μg／mL、盐酸氨溴索质量浓度在 0．72～11 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好；低、中、高 3个质量浓度的日内精密度 RSD分别为 0．65%，5．81%，3．08%，日间 RSD分别为1．10%，9．28%，3．01%；低、中、高3个质量浓度阿莫西林的平均回收率分别为（99．97±0．47）%，（99．56± 2．05）%和（100．17±1．53）%，盐酸氨溴索平均回收率分别为（88．06±1．06）%，（91．22±2．10）%和（95．10±1．88）%；血药浓度峰浓度为（109．33±19．82）μg／mL，达峰时间为（3．01±0．76）h，血浆半衰期为（8．12±2．40）h。结论 HPLC法检测简便、准确，可为阿莫西林盐酸氨溴索人体内药代动力学研究提供基础。

高效液相色谱法；阿莫西林；盐酸氨溴索；药代动力学

阿莫西林是β－内酰胺类青霉素药物，广泛用于治疗急慢性呼吸道感染以及中耳炎、咽炎、肺炎和扁桃体炎[1]。盐酸氨溴索是黏液溶解剂，可稀释肺部和气管内痰液，促进痰液咳出，从而改善慢性支气管炎病情，降低炎性反应的危害，保护呼吸系统[2]。临床研究表明，盐酸氨溴索和阿莫西林联合使用可增强肺部药浓度[3]。阿莫西林盐酸氨溴索的复方制剂已投入临床应用，但同时测定2种组分血药浓度的技术还未完善。为此，本研究中完善了同时测定人血浆中阿莫西林和氨溴索浓度的高效液相色谱（HPLC）法，并探讨其复方制剂的人体药代动力学特征，为制订合理的临床给药方案提供参考。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；YXJ－2型高速离心机(江苏省金坛市环宇科学仪器厂)；PLATILAB 340(STD)型超低温冰箱（上海麦仪科学仪器有限公司）；QL－901型漩涡混合器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）。复方阿莫西林盐酸氨溴索胶囊(武汉大学药学院临床药物研究所，含阿莫西林250 mg＋盐酸氨溴索15 mg)；阿莫西林胶囊(昆明贝克诺顿制药有限公司，批号为110205，含阿莫西林250 mg)；盐酸氨溴索胶囊(四川大冢制药有限公司，批号为101103，规格为30 mg)；阿莫西林对照品(中国食品药品检定研究院，批号为130409－201011)；盐酸氨溴索对照品(中国食品药品检定研究院)；阿莫西林原料药(珠海联邦制药股份有限公司，批号为3081032049，含量为100．1%)；盐酸氨溴索原料药(北京太洋药业有限公司，批号为 M100405，含量为99．43%)；甲醇(色谱纯)，醋酸铵(分析纯)，醋酸(分析纯)。

2 方法与结果

2．1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：InertsilODS－2柱(150 mm×4．6 mm，5 μm)；流动相：甲醇－用醋酸溶液调pH＝4的0．01 mol／L醋酸铵溶液，(8∶92，V／V)；检测波长：244 nm；检测温度：25℃；流速：1．0 mL／min，进样体积：20 μL。采用外标法计算峰面积[6]。按照上述色谱条件进行操作，能将盐酸氨溴索和阿莫西林进行分离，盐酸氨溴索保留时间约为10．8 min，阿莫西林约为4．0 min。

2．2 溶液制备

精密称量阿莫西林对照品25 mg，置100 mL容量瓶中；盐酸氨溴索对照品经105℃干燥至恒重后，精密称量30 mg，置 100 mL容量瓶中用甲醇溶解并稀释至100 mL；准确量取5 mL的盐酸氨溴索对照品溶液至上述100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并精确稀释到100 mL，作为对照品母液，使用前用甲醇进行稀释[4]。称取适量复方阿莫西林盐酸氨溴索本品(相当于阿莫西林 25 mg，盐酸氨溴索 1．5 mg)，置 100 mL容量瓶中，加流动相溶解后精确稀释至100 mL，作为供试品溶液[5]。

2．3 方法学考察

线性关系考察：分别将各系列阿莫西林对照品溶液和盐酸氨溴索对照品溶液各100 μL于 0．4 mL，配成阿莫西林质量浓度分别为5，10，20，50，100，200，500 μg／mL以及氨溴索质量浓度分别为 1，2，5，10，20 μg／mL的溶液，依法进样测定，记录阿莫西林（As1）和氨溴索色谱峰面积（As2）与内标色谱峰面积（Ar），以峰面积比(R，R＝As／Ar）对质量浓度（C）进行回归。阿莫西林回归方程为 R＝0．000 421 1 C＋0．000 000 142 2，r＝0．999 8；盐酸氨溴索为 R＝0．002 314 C＋0．000 684，r＝0．999 9。结果表明，阿莫西林质量浓度在12．3～200 μg／mL、盐酸氨溴索质量浓度在 0．72～11 μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：将对照品溶液配成低、中、高3个质量浓度（12．5 μg／mL，75 μg／mL，200 μg／mL），每一质量浓度平行配制5份，在日内不同时间点测定，考察日内精密度；连续检测3 d，考察日间精密度。结果见表1。

表1 精密度试验结果（n＝5）

回收率试验：配制成低、中、高3个质量浓度（12．5 μg／mL，75 μg／mL，200 μg／mL）的阿莫西林和氨溴索血浆样本，每一质量浓度平行配制3份，依据线性回归方程计算各自的质量浓度，以测定质量浓度和真实质量浓度比值计算回收率[7]。结果表明，在3个质量浓度组中，阿莫西林的平均回收率分别为（99．97± 0．47）%，（99．56±2．05）%和（100．17±1．53）%，盐酸氨溴索平均回收率分别为（88．06±1．06）%，（91．22± 2．10）%和（95．10±1．88）%。

2．4 药代动力学研究

采用DAS 3．0软件分析30名受试者血药浓度，峰浓度为（109．33±19．82）μg／mL，达峰时间为（3．01± 0．76）h，血浆半衰期为（8．12±2．40）h，0－t药时曲线下面积为（920．14±78．43）μg／（h·L），0－∞药时曲线下面积为（960．23±91．43）μg／（h·L）。

3 讨论

阿莫西林盐酸氨溴索胶囊是以阿莫西林、盐酸氨溴索为主成分的复方制剂。临床适用于急、慢性呼吸道疾病引起的痰液黏稠，咳痰困难[8]。阿莫西林杀菌作用强，对大多数致病革兰阳性菌和革兰阴性菌(包括球菌和杆菌)均有抑菌和杀菌作用。其杀菌机制主要为：细菌通过转肽酶合成细胞壁的主要成分糖肽，口服阿莫西林后药物分子中的内酰胺基在体内立即水解生成肽键，并和菌体内的转肽酶结合使之失活，从而抑制了细菌细胞壁的生成，最终由细胞壁缺失、水分大量渗透导致菌体变成球状体而破裂死亡[9]。盐酸氨溴索是重要的祛痰药，可稀释呼吸道内的黏稠分泌物，以减少黏液滞留，以及促进肺表面活性物质分泌和支气管纤毛运动，使痰及时排出，改善呼吸状况[10]。应用本品治疗时，患者黏液分泌恢复正常，咳嗽及痰量显著减少。两药合用可减慢唾液黏蛋白的分解代谢[11]。阿莫西林盐酸氨溴索胶囊中含250 mg阿莫西林、30 mg盐酸氨溴索，两者含量相差甚大，为提高药物含量检测率，本试验中建立并完善了精确测定2种成分含量的HPLC法。

目前，阿莫西林含量测定方法主要有微生物效价测定法、碘量法、电位滴定法、旋光法、分光光度法、流动注射化学发光法、HPLC法。阿莫西林本身不具抗原性，不会直接引发过敏反应，制剂中的杂质包括高分子聚合物会导致过敏反应，而这些高分子杂质目前还无合适的标准品。用HPLC法测定药物中阿莫西林含量的方法结果准确，将逐步取代经典的效价测定和传统的理化测定方法。胶束电动毛细管色谱（MECC）法具有高效、快速、微量和易于自动化等特点;高效液相色谱与质谱（HPLC／MS）法技术具有色谱分离与质谱分离的双重功能，可依靠质谱的分辨能力，区分不同的色谱峰，抗干扰能力强，二者均能满足极低浓度药物测定的需要，分析技术逐渐趋向微量、灵敏、简便、快速和自动化。

精密称取适量阿莫西林对照品和盐酸氨溴索对照品，加流动相配制终质量浓度为25 g／L与20 g／L的溶液，在200～400 nm波长范围内扫描。结果显示，阿莫西林在230 nm波长处有最大吸收，盐酸氨溴索在244 nm波长处有最大吸收。由于在244 nm处所受的干扰较少，且二者均吸收较好，故选择波长244 nm作为本品含量测定的检测波长。

本试验中尝试不同流动相系统[12]，当流动相为甲醇－水(10∶90)时，阿莫西林大约在5．6 min出峰，但峰形较差。当用乙腈－磷酸盐系统和甲醇磷酸盐系统作流动相时，有机相比例过高，阿莫西林出峰时间过早，不能与内源性物质分离开来；把有机相比例降低，出峰时间又推迟10 min。经过反复探索发现，当流动相为甲醇－0．01 mol／L醋酸铵溶液(8∶92)时，不仅出峰时间短(约为5 min)，峰形好，且能与内源性物质完全分离，节省了样品分析时间。

在对色谱条件进行优化后，测量了日内、日间精密度，均小于10%；低、中、高3个质量浓度下对照品回收率均大于90%；20℃环境中放置3 d和反复冻融3次的稳定性 RSD均小于10%。这些检测结果都能满足药代动力学研究的需要，以及临床药物监测与生物等效性研究。

综上所述，本试验中所建立的测定血浆中复方阿莫西林盐酸氨溴索的HPLC法准确度高、灵敏度好、专一性好、线性范围宽而且操作简便，可为阿莫西林新制剂研发及人体内复方阿莫西林盐酸氨溴索的药代动力学研究提供参考。

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[3]宋金春．复方阿莫西林盐酸氨溴索血药浓度测定及药代动力学研究[J]．中国药业，2013，22(4):21－23．

[4]李帅鹏．高效液相色谱－串联质谱法测定牛（羊）奶中阿莫西林的残留[J]．华南农业大学学报，2014，35（4）:16－21．

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[10]陈 杏．复方阿莫西林干混悬剂溶出度的测定[J]．中国药师，2014，17(6):967－969．

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Determination of Blood Drug Concentration and Pharmacokinetics of Amoxicillin and Ambroxol Hydrochloride

Yan Jin
(Affiliated Longhua Hospital of Shanghai University of TCM,Shanghai,China 200032)

Objective To establish a determination method for blood drug concentration and pharmacokinetics of amoxicillin and ambroxol hydrochloride．M ethods HPLC method was used,the column chromatography:Inertsil ODS－2 column(50 mm×4．6 mm,5 μm);mobile phase:methanol－0．01 mol／L ammonium acetate solution(pH＝ 4)(8∶92,V／V),wavelength was 244 nm;the temperature was 25℃; the flow rate was 1．0 mL／min,the injection volume was 20 μL．Results The mass concentration of amoxicillin in the range of 12．3－200 μg／mL,ambroxol hydrochloride in the range of 0．72－11 μg／mL showed a good linear relationship with peak area;the relative standard deviations(RSD)were 0．65%,5．81% and 3．08% for the low,medium and high quality concentrations,the RSDs of day to day precision was 1．10%,9．28%,3．01%;the average recovery rates of amoxicillin for the low,medium and quality concentration were(99．97±0．47)%,(99．56±2．05)% and (100．17±1．53)% respectively,and the average recovery rates of ambroxol hydrochloride for the low,medium and quality concentration were(88．06±1．06)%,(91．22±2．10)% and(95．10±1．88)% respectively; the plasma concentration was(109．33±19．82)μg／mL,the peak time was(3．01±0．76)h,and the plasma half－life was(8．12± 2．40)h．Conclusion The HPLC method is simple,accurate,which can provide a reference for human pharmacokinetics study of amoxicillin and ambroxol hydrochloride．

HPLC;amoxicillin;ambroxol hydrochloride;pharmacokinetics

R969．1；R978．1；R974＋．1

A

1006－4931(2016)03－0040－03

2015－07－23)