清络饮对佐剂关节炎大鼠血清TNF-α、IL-1β的影响*

范为民　　李　艳

皖南医学院弋矶山医院中医科，安徽芜湖　241001



·实验研究·

清络饮对佐剂关节炎大鼠血清TNF-α、IL-1β的影响*

范为民李艳△

皖南医学院弋矶山医院中医科，安徽芜湖241001

摘要目的研究清络饮对佐剂关节炎(AA)大鼠的治疗作用和机制。方法建立AA大鼠模型，随机分为空白组(K组)、模型组(M组)、雷公藤多苷片组(L组)、清络饮组(Q组)，每组10只。于致炎第19天，K组和M组灌胃等容积的生理盐水，L组灌胃雷公藤多苷片水溶液10 mg/kg，Q组灌胃清络饮3 g/kg。每组大鼠连续给药30 d。于致炎后第18天(给药前)、给药后30 d分别测定每只大鼠右后足容积，并计算大鼠足肿胀率。于实验结束后，测定大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平。结果在致炎后18 d，与空白组足肿胀率相比，其他3组差异有统计学意义(P<0.05)；在给药后30 d，清络饮组与雷公藤多苷片组足肿胀率与模型组相比，差异有统计学意义(P<0.05)。实验结束后，与空白组相比，模型组大鼠TNF-α、IL-1β含量明显高于空白组(P<0.01)与模型组相比，清络饮组与雷公藤多苷片组大鼠TNF-α、IL-1β含量都低于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论清络饮能够有效降低AA大鼠足肿胀率，减少血TNF-α、IL-1β含量，其对AA大鼠的保护作用可能与降低TNF-α、IL-1β含量有关。

关键词清络饮；佐剂关节炎；肿瘤坏死因子-α；白细胞介素-1β

Effect of Qingluoyin on Serum Level of TNF-α and IL-1β in Adjuvant Arthritis(AA) Rats

FAN Weiming，LI Yan△

DepartmentofTraditionalChineseMedicine，YijishanHospitalofWan’nanMedicalCollege，AnhuiWuhu241001，China

AbstractObjectiveTo observe the clinical effects of Qingluoyin on adjuvant arthritis(AA)rats and to probe its mechanism.MethodsAA rats were established and divided into model group，glycoside group and Qingluoyin group.On the nineteenth day after inflammation，control group and model group were given normal saline，Qingluoyin group was given Qingluoyin(3 g/kg)and glycoside group was given glycoside tablet(10 mg/kg)consequently for 30 days.Rat foot swelling rate and serum levels of TNF-α and IL-1β were observed both before and after treatment.ResultsFoot swelling rate of AA rats was obviously higher than the control group(P<0.05).After the treatment，foot swelling rates of the glycoside group and the Qingluoyin group were both significantly lower than that of the model group.After treatment，serum levels of TNF-α and IL-1β in the model group were obviously higher than the other three groups(allP<0.05).ConclusionQingluoyin can reduce foot swelling rate and serum levels of TNF-α and IL-1β of AA rat.Its protective effect may be related with its effect in reduction of TNF-α and IL-1β in AA rats.

Key wordsQingluoyin；adjuvant arthritis；TNF-α；IL-1β

类风湿性关节炎(RA)是一种以滑膜增生、关节破坏为主要特征的自身免疫系统疾病。目前，其发病机制还未彻底清楚，近年来，细胞因子成为对此病研究的重点，而TNF-α、IL-1β是核心因子，成为研究细胞因子的焦点。清络饮是由首届国医大师李济仁教授经过长期临床实践，创制出治疗RA的经验方。前期的临床观察证实其对RA具有较好的疗效，本研究以佐剂关节炎(AA)大鼠为动物模型，从细胞因子角度，观察清络饮对AA大鼠TNF-α、IL-1β表达的影响，探讨清络饮对RA的作用机制。

1材料与方法

1.1实验动物

SPF级雄性SD大鼠40只，体重140～160 g，由上海杰思捷实验动物有限公司提供，许可证：SCKX(沪)2013-0006。

1.2药品与试剂

清络饮主要由苦参、青风藤、萆薢、黄柏组成，由本市中山大药房提供，取各等分中药36 g，煎煮2次，每次30 min，浓缩成1 g/ml，雷公藤多苷片由上海复旦复华药业有限公司提供，国药准字Z31020415；生理盐水由安徽双鹤药业有限责任公司生产提供，国药准字H34023609；弗氏完全佐剂由美国Sigma公司提供，批号SLBC5083。

1.3实验仪器

酶标仪由雷杜生命科学股份有限公司提供，型号：RT-6000；洗板机由雷杜生命科学股份有限公司提供，型号：RT-3100；离心机由安徽嘉文仪器有限责任公司提供，型号：JW3021 HR；漩涡混合器由其林贝尔仪器制造有限公司，型号：GL-88 B；电热恒温箱由上海三发科学仪器有限公司，型号：DNP-9052 BS-Ⅲ。

1.4方法

1.4.1造模方法将40只大鼠适应性喂养1周后，随机分为空白组(K组)和造模组，空白组10只大鼠，造模组30只大鼠。除空白组外，造模组每只大鼠右后足趾皮内注射弗氏完全佐剂0.1 ml，复制AA大鼠模型[1]。

1.4.2给药方法造模组致炎第19天，将复制的AA大鼠随机分为模型组(M组)、雷公藤多苷片组(L组)、清络饮组(Q组)，每组10只。于致炎第19天，Q组灌胃清络饮3 g/kg，L组灌胃雷公藤多苷片水溶液10 mg/kg，K组和M组灌胃等容积的生理盐水。每组大鼠连续给药30 d。

1.4.3指标测定①大鼠足肿胀率测定：于造模前、致炎后第18天、给药后30 d，应用排水法分别测定每只大鼠右后足容积，并计算出大鼠足肿胀率，即肿胀率(%)=[(致炎后足容积-致炎前足容积)/致炎前足容积]×100%；②大鼠血清TNF-α、IL-1β测定：于实验结束后，取大鼠腹主动脉血，严格按照试剂盒要求，测定大鼠血清TNF-α、IL-1β水平。

1.5统计学处理

2结果

2.1各组大鼠足肿胀率比较

在致炎后第18天(给药前)，与空白组(K组)相比，其他3组差异有统计学意义(P<0.05)，表明大鼠经造模后，足部形成肿胀，肿胀率明显升高；在给药后30 d，与模型组(M组)相比，清络饮组(Q组)和雷公藤多苷片组(L组)差异有统计学意义(P<0.05)，表明清络饮和雷公藤多苷片对AA大鼠足肿胀具有治疗作用，但清络饮组(Q组)与雷公藤多苷片组(L组)比较，差异无统计学意义。见表1。

表1　各组大鼠足肿胀率比较

与K组比较*P<0.05；与M组比较△P<0.05

2.2各组大鼠TNF-α、IL-1β水平比较

结果显示，与空白组(K组)相比，模型组(M)大鼠TNF-α、IL-1β含量明显高于空白组(K)，差异有统计学意义(P<0.01)，表明模型组(M组)大鼠血清TNF-α、IL-1β含量升高；与模型组(M组)相比，清络饮组(Q组)和雷公藤多苷片组(L组)TNF-α、IL-1β低于模型组(M组)，差异有统计学意义(P<0.05)，表明清络饮和雷公藤多苷片能够明显降低TNF-α、IL-1β含量。见表2。

表2各组大鼠TNF-α、IL-1β水平比较

组别TNF-αIL-1βK组41.53±15.1467.46±10.52M组70.31±18.55*116.51±27.58*L组58.98±16.63△91.37±18.33△Q组59.63±16.98△89.75±17.66△

与K组比较*P<0.05；与M组比较△P<0.05

3讨论

AA大鼠模型是一种免疫性炎症模型，其免疫机制是由于弗氏完全佐剂中结核分枝杆菌被T细胞识别，引起致敏反应，病理表现与RA基本相似。因此，它是研究RA常用的动物模型[2]。

近些年来，细胞因子在RA发病中的作用机制成为研究的重点[3-4]。而大量研究[5-6]也证实，TNF-α、IL-1β的异常表达和失调是RA发病重要机制之一，它们在RA的细胞因子网络中起中心作用，是RA发病机制直接相关的重要细胞因子。其中TNF-α在RA的炎症反应过程中起关键作用，而IL-1β是参与RA进展期关节破坏的重要炎症细胞因子[7-8]。清络饮由苦参、青风藤、萆薢、黄柏组成。方中苦参功效清热、燥湿、杀虫，现代药理实验[9]证明，以苦参主要成分制成的复方苦参注射液能够降低炎性因子IL-1β、TNF-α的水平；萆薢长于渗湿，主治风湿痹痛，现代药理研究[10]表明其能够抗肿瘤、调脂抗炎、降尿酸等；青风藤功效祛风湿、通经络、利小便，主治风湿痹痛、关节肿胀，现代药理学研究[11]表明，青风藤具有镇痛抗炎、免疫调节的作用，对缓解RA关节肿胀具有明显疗效；黄柏具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮的功效，现代药理研究[12]表明，黄柏具有抗炎、抗病毒、抗痛风的作用，对活动期RA具有明显缓解作用。

本实验研究结果显示，清络饮能够有效地降低AA大鼠足肿胀率，降低血TNF-α、IL-1β含量。清络饮降低AA大鼠足肿胀，对AA大鼠的保护作用可能与减少TNF-α、IL-1β含量有关，进一步揭示了清络饮治疗RA的可能机制。

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(收稿日期：2015-11-30)

通信作者△，Corresponding author，E-mail：liyan.0301@163.com

doi：10.3969/j.issn.1674-4616.2016.01.008

*国家中医药管理局重点学科中医痹病学建设项目(国中医药人教发[2012]32号)