束悗通经推拿疗法对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经功能与SOD表达的影响研究※

陈林青 刘明军 卓越 陈绍涛 于明超 仲丛文 李波王 蕾张欣

（长春中医药大学针灸推拿学院，长春130117）

束悗通经推拿疗法对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经功能与SOD表达的影响研究※

陈林青 刘明军 卓越 陈绍涛 于明超 仲丛文 李波王 蕾张欣*

（长春中医药大学针灸推拿学院，长春130117）

目的观察“束悗通经疗法”对糖尿病大鼠坐骨神经功能和SOD表达的影响。方法将80只大鼠随机平均分为对照组、模型组、推拿组和药物组，采用腹腔注射链脉佐菌素的方法造模，观察各组动物坐骨神经传导速度（SNVC）和坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）表达的变化情况。结果对各组动物坐骨神经SNVC检测发现，模型组与对照组比较，SNVC呈现显著性差异（P＜0.01），推拿组与模型组比较，SNVC呈现显著性差异（P＜0.01），药物组与模型组比较，SNVC呈现显著性差异（P＜0.01），推拿组与药物组比较，SNVC无明显差异（P＞0.05）；对各组动物坐骨神经SOD检测发现，模型组与对照组比较，坐骨神经中SOD表达呈现显著性差异（P＜0.01），推拿组与模型组比较，SOD表达呈现显著性差异（P＜0.01），药物组与模型组比较，SOD表达无明显差异（P＞0.05）。结论“束悗通经推拿疗法”能够有效改善DPN大鼠模型下肢坐骨神经SNVC，表明对周围神经功能恢复具有积极的促进作用；同时“束悗疗法”能够提高坐骨神经中SOD的表达，表明具有抗氧化的作用从而发挥保护坐骨神经形态功能的疗效。本研究将为糖尿病周围神经病变提供新的辅助治疗手段，也为“束悗通经推拿疗法”的推广普及奠定实验室基础。

推拿；束悗；糖尿病；周围神经病变；SOD表达；消渴；动物实验

“束悗通经推拿疗法”是国家中医药管理局首批评选的中医学术流派“长白山通经调脏手法流派”的代表性手法之一。本法操作选取四肢大血管或大神经干走行线路为施术部位，以手指或手掌按压局部并停留一定时间为主要操作手法，然后采用“缓按快放”或“快按缓放”的方式放开按压部位以推动局部气血运行，达到疏通经络、活血止痛的治疗目的，是一种中医传统推拿操作手法的创新[1]。本研究以“束悗通经推拿疗法”为主要干预手段，通过观察糖尿病周围神经病变模型大鼠坐骨神经传导速度（SNVC）、坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）表达的改善情况开展相关机制研究。

1 实验材料

1.1 实验动物与分组选取雄性wistar大鼠80只，鼠龄8周，由长春中医药大学实验动物中心提供。分笼饲养，每笼10只，食用标准颗粒鼠粮。

按完全随机设计法（随机数字表）将大鼠分为4组：即空白对照组（简称对照组）、模型组、模型＋推拿干预组（简称推拿组）、模型＋药物干预组（简称药物组）。每组动物20只。

1.2 实验药品与试剂链脉佐菌素（美国sigma公司，1 g/瓶）；弥可保（甲钴胺注射液，卫材中国药业有限公司，500 ug/支）；丙二醛测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）；超氧化物歧化酶测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）。

1.3 实验仪器推拿手法测定仪（TAP-Ⅱ型，上海益联医学发展有限公司）；Medlab-u/4cs生物信号采集处理系统（南京美易科技有限公司；光学显微镜及图像分析系统（德国Leica公司）；酶标仪：（BIO-RAD，美国）。

2 实验方法

2.1 动物模型的制备取实验大鼠60只，将链脉佐菌素临用前用PH值4.2～4.5的0.1 mol/L柠檬酸钠一柠檬酸缓冲液避光条件下配成1%浓度溶液，按剂量50 mg/kg于实验大鼠左下腹腔内单次注射，72小时后取尾血测血糖，凡血糖＞16.7 mmol/L作为糖尿病大鼠。血糖未达标的造模大鼠，补打30 mg/kg0.1%链脲佐菌素，72 h后测血糖，不足要求则弃去。如此在1周后血糖仍＞16.7 mmol/L，且从形态上有周围神经病变出现，坐骨神经传导速度（SNCV）明显降低时，即制成周围神经病变模型大鼠。另取实验大鼠20只，用0.1 mol/L柠檬酸钠一柠檬酸缓冲液（PH4.2、4℃）按同体积左下腹腔内单次注射，72小时后取尾血测血糖，作为正常对照组。

2.2 干预方法（1）推拿组：将实验大鼠仰卧，固定其头部与上肢。施术者以左手牵拉大鼠一侧下肢，使下肢伸直呈水平位，以右手拇指指腹缓慢按压于大鼠腹股沟处，力量经推拿手法测试仪测定约为1 kg，持续30 s左右，然后突然抬手，停止按压，即“缓按快放”；间隔60 s左右，再次以右手拇指指腹快速按压于大鼠腹股沟处，力量经推拿手法测试仪测定约为1 kg，持续30 s左右，然后缓慢抬手，停止按压，即“快按缓放”。如此操作3次。以上治疗方法每日早晚操作2次，共治疗8周。（2）药物组：将实验大鼠仰卧，捆绑固定，每日1次，每次10分钟。根据人与动物体表面积计算法换算注射弥可保，大鼠用药量为50μg/kg，隔日注射于下肢肌肉，左右腿交替注射，以利于吸收，共治疗8周。（3）对照组和模型组：将实验大鼠仰卧，捆绑固定，每日1次，每次10分钟，共8周。

2.3 检测指标及方法

2.3.1 检测指标（1）实验大鼠一般情况；（2）实验大鼠坐骨神经传导速度（SNVC）；（3）实验大鼠坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）表达。

2.3.2 检测方法将实验大鼠治疗8周后尾静脉取血以检测血糖。以电子秤称取每只大鼠体重后，腹腔注射10%水合氯醛（350 mg/kg）进行麻醉，将大鼠俯卧固定于固定架上，暴露出坐骨神经，用无菌玻璃剥离器轻轻剥离坐骨神经并游离下来，应用生物信号采集处理系统，测得坐骨神经传导速度，然后迅速将坐骨神经放入液氮中，放入-70℃冰箱中存放，以备匀浆使用。

2.4 数据分析用SPSS17.0软件包统计处理，计量资料用均数±标准差表示，多组均数之间的比较应用方差分析，等级资料组间比较应用秩和检验，检验的显著水平为P＜0.05。

3 实验结果

3.1 实验大鼠坐骨神经传导速度（SNCV）

表1 束悗疗法对坐骨神经传导速度的影响

表1 束悗疗法对坐骨神经传导速度的影响

注：与对照组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，；与模型组比较，★P＜0.05，★★P＜0.01

组别例数SNCV（m/s）对照组20 35.47±2.65模型组18 25.66±2.84▲▲推拿组19 33.82±2.29★★药物组18 32.17±2.73▲★★

通过表1可见，模型组与对照组比较，坐骨神经传导速度呈现显著性差异（P＜0.01），证明实验造模成功。推拿组与模型组比较，坐骨神经传导速度呈现显著性差异（P＜0.01），药物组与模型组比较，坐骨神经传导速度呈现显著性差异（P＜0.01），提示推拿“束悗疗法”和药物疗法能够有效改善DPN大鼠的坐骨神经传导速度；推拿组与药物组比较，坐骨神经传导速度无明显差异（P＞0.05）。

3.2 实验大鼠坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）表达

表2 束悗疗法对坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）表达的影响

表2 束悗疗法对坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）表达的影响

注：与对照组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与模型组比较，★P＜0.05，★★P＜0.01

组别例数SOD表达（U/mgprot）对照组20 32.86±5.33模型组18 21.07±6.49▲▲推拿组19 48.92±5.78▲▲★★药物组18 23.26±6.43▲

通过表2可见，模型组与对照组比较，坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）表达呈现显著性差异（P＜0.01），证明实验造模成功。推拿组与模型组比较，坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）表达呈现显著性差异（P＜0.01），提示推拿疗法能够有效提高坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）表达；药物组与模型组比较，坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）表达无明显差异（P＞0.05），提示药物疗法对坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）表达无明显影响。

5 讨论

束悗通经推拿疗法来源于传统推拿疗法束悗疗法，其最早记载见于《内经》。在《灵枢·杂病》中记载：“痿厥为四末束悗，乃疾解之，日二，不仁者，十日而知，无休。病已止。”主要的意思是在治疗痿厥症病人时，将患者四肢捆绑起来，待其产生憋闷胀痛感觉后，迅速解开，每天治疗两次，原本四肢没有知觉的患者在治疗十天之后就会产生知觉，这种治疗方法不要停止，直到患者痊愈为止。可见，束悗疗法中的“束”，意为约束，束缚；“悗”，《辞海》解释为“烦闷”，《灵枢·五乱》中记载有“清浊相干，乱于胸中，是谓大悗”。由此引申束悗具有约束阻滞之意。《灵枢集注》中曾批注“夫按之束之，皆导引之法，犹尺蠖之欲伸而先屈也”。可见，在治疗气机不畅、麻痹不仁的病症时，可以在四肢脉位运用束悗按抑的手法，达到通郁开闭、导气通达的治疗目的。然而，现代推拿临床中，源于中医传统古籍的束悗疗法却鲜有应用，仅散见于个别理论性的文献探讨中[2]。

现代医学认为，糖尿病性周围神经病变（DPN）的病理表现一是营养神经的血管出现病变，表现为毛细血管的内皮细胞增生或基底膜增厚；二是神经本身出现病变，主要表现为神经纤维轴索的损伤或构成髓鞘或神经内膜的施万细胞的变性坏死[3-4]。中医则认为，DPN属于“痹证”“痿证”之范畴，多由于气虚失运、血虚不荣、痰瘀阻滞或风湿痹阻等原因导致局部血流缓慢，瘀阻脉道，皮肉经脉失去气血濡养而痿废不用[5-6]。这与糖尿病性周围神经病变（DPN）所表现出来的临床症状是相吻合的。课题组在也曾在临床上以“束悗疗法”辅助治疗糖尿病性周围神经病变并取得满意疗效[1]。

神经电生理检查是早期诊断糖尿病并发周围神经病变的敏感指标，神经传导速度减慢是糖尿病出现神经病变的一个先兆，常常用于评价临床疗效与预后情况。运动神经传导速度（SNVC）反映坐骨神经运动的功能状态，是研究实验性DPN最常用的观察指标。有研究表明，当机体出现高血糖后，高糖引起线粒体中的超氧阴离子增多，诱发周围细胞发生氧化应激，最终造成糖尿病的各种慢性并发症[10]。自由基是反映机体氧化应激的直接指标，但是自由基具有短瞬即逝的特性，实验中难以测定。但是，一些蛋白质、脂质和DNA自由基损伤的终产物作为反映氧化应激的可靠指标和间接指标则能够检测到。超氧化物歧化酶（SOD）是机体细胞内部重要的自由基清除酶，其表达的高低直接反映了机体清除自由基的能力[11-12]。

通过对实验结果的研究，课题组发现“束悗通经推拿疗法”能够有效改善DPN大鼠模型下肢坐骨神经的神经传导速度（SNVC），表明对周围神经功能恢复具有有效的促进作用；同时能够提高坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）的表达，表明具有抗氧化的作用从而发挥保护坐骨神经形态功能的疗效。本研究将为糖尿病周围神经病变提供新的辅助治疗手段，也为“束悗通经推拿疗法”的推广普及奠定实验室基础。

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Effect of the Traditional Tuina Therapy of Shumantongjing on Diabetic Peripheral Neuropathy in Rats Model of Sciatic Nerve of SNVC and SOD Expression

CHEN Linqing, LIU Mingjun, ZHUO Yue, CHEN Shaotao, YU Mingchao, ZHONG Congwen, LI Bo,WANG Lei, ZHANG Xin
(College of Acupuncture-Moxibustion and Tuina,Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

Objective To observe the effect of the traditional Tuina therapy of ShumanTongjing on diabetic peripheral neuropathy in rats model of sciatic nerve of SNVC and SOD expression.Methods 80 rats were randomly divided into control group,model group, Tuina group and drug group.The peritoneal injection of STC was used to prepare the rats of diabetic peripheral neuropathy.The SNCV of the sciatic nerve and the SOD in the sciatic nerve were observed.Results In the SNVC detection,SNVC showed a significant difference between the control group and the model group(P<0.01),SNVC showed a significant difference between the tuina group and the model group(P<0.01),SNVC showed a significant difference between the drug group and themodel group (P<0.01),there was no significant difference in SNVC between the Tuina group and the drug group(P>0.05).In the SOD expression detection,SOD expression showed a significant difference between the control group and the model group(P<0.01), SOD expression showed a significant difference between the Tuina group and the model group(P<0.01),SOD expression showed no significant difference between the drug group and the model group(P>0.05).Conclusion The traditional Tuina therapy of Shuman Tongjing can effectively improve the SNVC of sciatic nerve,and it showed that Tuina has positive effects on peripheral nerve functional recovery.Tuina therapy of Shuman Tongjing can improve the expression of SOD in sciatic nerve,and it showed that Tuina has antioxidant effect so as to play a protective efficacy of morphology and function of sciatic nerve.This study will provide a new means for the treatment of diabetic peripheral neuropathy,and will lay the foundation for the promotion of the traditional Tuina therapy of Shuman Tongjing.

Tuina;Shuman;diabetes;peripheral neuropathy;SOD Expression;consumptive thirst;animal experiment

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.05.067

1672-2779（2016）-05-0135-03

：杨杰本文校对：李波

2016-01-08）

国家中医药管理局中医学术流派传承工作室建设项目（No：20130101137JC）；吉林省中医药管理局科学技术基金项目（No：2014-Q31）；吉林省教育厅高校科学技术研究规划项目（No：2015-348）

*通讯作者：1147346490@qq.com