高效液相色谱法测定蒙药毛浩日查干－5中二苯乙烯苷含量

银金兰，郑 敏，李佳青

（内蒙古自治区人民医院，内蒙古 呼和浩特 010017）

高效液相色谱法测定蒙药毛浩日查干－5中二苯乙烯苷含量

银金兰，郑 敏，李佳青

（内蒙古自治区人民医院，内蒙古 呼和浩特 010017）

目的 建立测定蒙药毛浩日查干 －5中二苯乙烯苷含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 色谱柱采用 Eclipse Plus－C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）、ODS预柱，流动相为乙腈－水（25∶75），检测波长320 nm，流速为1．0 mL／min。结果 二苯乙烯苷进样量在0．05～0．75 μg与峰面积呈良好线性关系(r＝0．999 99，n＝6)，加样回收率为98．34%，RSD为1．56%(n＝6)。结论 该法结果准确，可用于测定毛浩日查干－5中二苯乙烯苷含量。

毛浩日查干－5；二苯乙烯苷；含量测定；高效液相色谱法

蒙药毛浩日查干－5由手掌参、黄精、玉竹、制何首乌、广枣组方，具有补肾、滋补强身之功效；用于肾寒、肾虚、精血不足、筋骨酸痛、年迈体弱等症。二苯乙烯苷是方中制何首乌药材特有的生物活性成分，水溶性良好，同时具有补肝益肾的作用，现代药理研究表明其还具有抗衰老、降低胆固醇、提高免疫功能、防止动脉硬化及护肝等作用[1－2]。且其含量较稳定，检测重现性好，质量易控制。为此，将其作为毛浩日查干－5的指标性成分进行含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国 Agilent公司)，包括四元泵、在线脱气机、柱温箱、自动进样器、VWD检测器，HP化学工作站。乙腈为色谱纯试剂，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯；对照品为2，3，5，4′－四羟基二苯乙烯－2－O－β－D葡萄糖苷（简称二苯乙烯苷，中国食品药品检定研究院，批号为 110844－201310）；毛浩日查干 －5(自制，批号为 140401，140402，140403）。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：Eclipse Plus－C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），ODS预柱；流动相：乙腈－水（25∶75）；检测波长：320 nm；流速：1．0 mL／min；柱温：室温；进样量：10 μL。

2．2 溶液制备

取本品粉末约0．5 g，精密称定，置50 mL棕色容量瓶中，加流动相40 mL，超声处理30 min（功率250 W，频率20 kHz），放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液[3－5]。精密称取二苯乙烯苷对照品适量，加流动相制成每100 mL含5 mg的溶液，即得对照品溶液。按处方量制备缺制何首乌药材的阴性样品，取约0．5 g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备得阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

系统适用性试验：取供试品溶液、二苯乙烯苷对照品溶液和阴性对照品溶液在上述色谱条件下进样10 μL，记录色谱图，见图1。可见阴性对照品溶液在二苯乙烯苷峰位置无相应峰出现，且二苯乙烯苷和其他组分色谱峰可很好分离，对二苯乙烯苷的测定无干扰；在与二苯乙烯苷对照品峰相对应位置上供试品具有相应色谱峰，且与相邻峰的分离度大于1．5，按二苯乙烯苷峰计算理论板数为10 000以上，拖尾因子为1．03。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密量取二苯乙烯苷对照品溶液（50 μg／mL）1，2，4，8，10，15 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积（A）对进样量（C）进行线性回归，得回归方程 A＝0．936 2 C－1．78，r＝0．999 99(n＝6)。结果表明，二苯乙烯苷进样量在0．05～0．75 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：精密量取同一对照品溶液10 μL，连续进样6次。结果的 RSD为0．22%(n＝6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品（批号为140404）溶液，分别于0，2，4，6，8，10 h时进样。结果的 RSD为0．20% (n＝6)，表明供试品溶液在10 h内稳定。

重复性试验：取同一批样品（批号为140401），依法制备6份供试品溶液，按拟订方法分别进样，测定峰面积并计算含量。结果平均含量为1．620 mg／片，RSD为1．60%(n＝6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品9份（批号为140401）约0．2 g，精密称定，置50 mL棕色容量瓶中，分别按不同量级加入二苯乙烯苷对照品溶液（0．123 g／L），按供试品溶液制备方法制备，依法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 二苯乙烯苷回收试验结果(n＝9)

2．4 样品含量测定

取3批样品，按供试品溶液制备方法制备，依法测定。结果批号为140401，140402，140403的二苯乙烯苷含量分别每片为1．62，1．49，1．49 mg。

3 讨论

目前，用HPLC法测定二苯乙烯苷含量所用的流动相多为乙腈－水的不同比例[3－5]。本试验中比较了乙腈－水（19∶81）、乙腈－水（25∶75）、乙腈－水（24∶76），发现第2个峰形好，且与2010年版《中国药典(一部)》药材项下二苯乙烯苷含量测定所用流动相一致，故流动相选择乙腈－水（25∶75）。

本法作为该药品的含量测定方法，能保证药品检测时数据的真实性、可靠性，可作为保证药品质量的检测依据。

[1]许评比，李荣宗 ．人参、何首乌的毒性反应[J]．海峡药学，2001，13（3）：112－113．

[2]李玉芳，和玄华．何首乌现代研究进展[J]．中成药，1997，19（5）：37－39．

[3]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京：中国医药科技出版社，2010:946．

[4]郑丽娜，任海勇，张作平．HPLC法测定养血生发胶囊中二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚的含量[J]．中国药物警戒，2011，8（4）：199－201．

[5]秦郁文，唐富丽．HPLC法测定七宝美髯软胶囊中二苯乙烯苷的含量[J]．中国药师，2013，16（5）：686－688．

R284．1；R286

A

1006－4931(2016)01－0066－02

银金兰，女，主任药师，研究方向为药物分析，(电子信箱)nmyyyjl＠sohu．com。

2015－06－30)