高效液相色谱法分离与测定盐酸多塞平顺反式异构体的含量

韩春晖，张春泓，栾 爽

(辽宁省大连市药品检验所，辽宁 大连 116021)

高效液相色谱法分离与测定盐酸多塞平顺反式异构体的含量

韩春晖，张春泓，栾 爽

(辽宁省大连市药品检验所，辽宁 大连 116021)

目的 建立盐酸多塞平乳膏中盐酸多塞平顺反式异构体分离与含量测定的高效液相色谱法。方法 色谱柱采用Kromasil 100A C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm），流动相为含0．1%三乙胺的0．2 mol／L磷酸二氢钠溶液－甲醇（65∶35），流速为1．0 mL／min，检测波长为254 nm，柱温为50℃。结果 盐酸多塞平质量浓度在7．90～12．66 μg／mL范围内与峰面积呈良好线性关系（r＝0．999 9），平均回收率为98．88%，RSD为1．32%(n＝9)。结论 该方法能良好地分离盐酸多塞平顺反式异构体，可作为盐酸多塞平乳膏中盐酸多塞平的质量控制方法。

高效液相色谱法；盐酸多塞平；含量测定；异构体

盐酸多塞平乳膏是非类固醇类药物，主要是利用盐酸多塞平的H1阻断作用治疗皮炎、湿疹引起的瘙痒,可避免局部使用皮质类固醇制剂所带来的副作用。现行质量标准采用紫外分光光度法于296 nm波长处测定含量[1]。本研究中发现，在该波长处有紫外吸收的杂质，方法专属性不强，且盐酸多塞平顺反式异构体不能良好分离。为此，笔者建立了盐酸多塞平顺反式异构体分离的高效液相色谱(HPLC)法，并测定其在盐酸多塞平乳膏中的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 2695／2487／2998型高效液相色谱仪；Agilent 1200型高效液相色谱仪；岛津LC－20A型高效液相色谱仪；Sartorius MSA225S－100－DA型分析天平（十万分之一）。盐酸多塞平对照品（中国食品药品检定研究院，批号为100069－201103）；盐酸多塞平乳膏（市售品，批号为2010001，2010002，2008012，规格为每10 g中含盐酸多塞平0．5 g）；甲醇、磷酸为色谱纯，盐酸、磷酸二氢钠为分析纯，试验用水为纯化水。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Kromasil 100A C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：含0．1%三乙胺的0．2 mol／L磷酸二氢钠溶液（用 2 mol／L磷酸调 pH至 2．5）－甲醇（65∶35）；流速：1．0 mL／min；检测波长：254 nm；柱温：50℃；进样量：20 μL。色谱图见图1。理论板数按顺式异构体（Z）计算不低于1 500，反式异构体（E）与顺式异构体（Z）峰的分离度大于1．5，乳膏空白基质溶液对测定无干扰。

2．2 溶液制备

取盐酸多塞平对照品适量，精密称定，置100 mL容量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液溶解并稀释至刻度，制成每1 mL中含0．1 mg的溶液，得对照品溶液。精密称取样品适量（约相当于盐酸多塞平20 mg），加1%盐酸甲醇溶液20 mL，置水浴中加热充分搅拌使盐酸多塞平溶解，再置冰浴中冷却1 h以上，使基质凝固，取出后迅速滤过，用冷1%盐酸甲醇溶液洗涤残渣数次，用同一滤器滤过，合并滤液与洗液，置100 mL容量瓶中，用1%盐酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL置10 mL容量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。将液态石蜡、天然脂肪醇、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸、平平加A－20、甘油聚乙二醇－75硬脂酸酯、2，6－二叔丁基对甲酚、叔丁基－4－羟基茴香醚、甘油、羟苯乙酯、乙二胺四乙酸二钠、纯化水按处方组分比例称取适量，加热至75～80℃，油相与水相等温混合，搅拌均匀，边冷却边搅拌，直至成霜，作为空白基质[2]；取约0．4 g空白基质，按供试品溶液制备方法，即得乳膏空白基质溶液。

图1 高效液相色谱图

2．3 方法学考察

线性关系考察：精密称取盐酸多塞平对照品7．90，9．19，10．48，11．45，12．66 mg，分别置 100 mL容量瓶中，用1%盐酸甲醇溶液溶解并稀释至刻度，作为系列溶液。分别量取上述溶液各20 μL，注入液相色谱仪，按拟订色谱条件测定。以质量浓度为横坐标（X）、反式异构体（E）与顺式异构体（Z）峰面积之和（Y）为纵坐标进行线性回归，得到盐酸多塞平的线性回归方程 Y＝3．170 6×10－8X－5．803 6×10－5，r＝0．999 9（n＝5）。结果表明，盐酸多塞平质量浓度在7．90～12．66 μg／mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：取同一照品溶液，依法连续进样6次。结果的 RSD为1．0%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12，16，24，48 h时进样测定。结果的 RSD为 0．9%（n＝9），表明供试品溶液在48 h内稳定性良好。

重复性试验：取同一批号的样品6份，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定。结果的 RSD为0．6%（n＝6），表明方法重复性良好。

回收率试验：取盐酸多塞平原料、辅料，按处方组分比例模拟工艺流程分别制成模拟乳膏，其中已知含量的盐酸多塞平原料药分别按标示量的80%，100%，120%加入到模拟乳膏中。依法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸多塞平回收试验结果（n＝9）

2．4 样品含量测定

取样品3批(批号为2010001，2010002，2008012），依法制备供试品溶液，按外标法测定并计算含量。结果3批样品中含盐酸多塞平分别为标示量的101．3%，100．5%和100．7%。

3 讨论

文献[3－4]报道，测定盐酸多塞平含量采用多塞平的紫外最大吸收波长为297 nm。本研究中通过DAD检测器3D扫描发现，297 nm波长处峰纯度不高。通过分析国内企业的生产工艺得知，盐酸多塞平的主要工艺杂质为羟基物，该物质于297 nm波长处有较强紫外吸收，严重干扰盐酸多塞平的测定。故选择测定波长为盐酸多塞平吸收较强且杂质吸收较弱的254 nm。

盐酸多塞平原料药为反式异构体（E）与顺式异构体（Z）的混合物。早期含量测定中未将顺反式异构体分离[5]，导致色谱峰出现明显肩峰。有研究报道，使用HPLC法[6]和毛细管气相色谱法[7]测定顺式异构体含量。本研究中通过优化色谱条件，将顺反式异构体完全分离，排除了测定过程中的相互干扰，相关研究尚未见有报道。

流动相的水相中加入0．1%的三乙胺，有效地改善了峰拖尾现象。试验表明，在主成分与各杂质的分离中顺、反式异构体峰最难分离，故使用顺、反式异构体峰的分离度进行系统适用性试验。当顺、反式异构体峰的分离度大于1．5时，其他杂质均可获得良好分离。

本研究中采用了另外3个品牌的色谱柱，如AMERITECH Accurasil C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm)，Dilkma Platisil C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm），ThermoHyparcil GOLD C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），分别在Waters 2695／2996型、Agilent 1200型与岛津 LC－20A型液相色谱仪上进行方法耐用性试验考察。结果提示，供试品溶液色谱图中顺反式异构体之间及与相邻杂质峰间分离度均大于1．5，耐用性良好。

[1]国家药典委员会．国家食品药品监督管理局《国家药品标准》新药转正标准第 34册[M]．北京：人民卫生出版社，2003：193．

[2]唐 芳，丁登峰，周金玉．复方盐酸多塞平乳膏的制备与质量控制[J]．中国药房，2004，15(1):26－28．

[3]周利娟，艾呜哲，谷亦平．高效液相色谱法测定盐酸多塞平乳膏中盐酸多塞平含量[J]．医药导报，2007，26(8):938．

[4]宋兴发，高 山．高效液相色谱法测定盐酸多塞平片含量[J]．医药导报，2009，28(10):1 359－1 360．

[5]张晨华．反相高效液相色谱法测定盐酸多塞平片的含量[J]．中国药师，2007，10(12):1 220－1 221．

[6]郝荣华．高效液相色谱法测定盐酸多塞平顺式异构体限度[J]．药学与临床研究，2008，16(3):242－244．

[7]周利娟，艾鸣哲，谷亦平．毛细管气相色谱法测定盐酸多塞平顺式异构体含量[J]．医药导报，2006，25(4):344－345．

Separation and Determination of ZE－Doxepin Hydrochloride by HPLC

Han ChunHui,Zhang ChunHong,Luan Shuang
(Dalian Institute for Drug Control,Dalian,Liaoning,China 116021)

Objective To establish a method for the separation and determination of Doxepin Hydrochloride in Doxepin Hydrochloride Cream by HPLC．Methods Chromatography was performed on a Kromasil 100A C18(150 mm×4．6 mm,5 μm)column．The mobile phase was consisted of 0．1% triethylamine in 0．2 mol／L sodium dihydrogen phosohate solution－methanol(65∶35)．The flow rate was 1．0 mL／min．The detection wavelength was 254 nm．The column temperature was 50℃．Results The linear response range was 7．90～12．66 μg／mL for Doxepin Hydrochloride(r＝0．999 9)．The recovery of Doxepin Hydrochloride was 98．88%(RSD＝1．32%，n＝9)．Conclusion The method can separate ZE－doxepin hydrochloride,which was suitable for the determination of Doxepin Hydrochloride in doxepin hydrochloride cream．

HPLC;doxepin hydrochloride;determination;isomer

R927．11；R971＋．43

A

1006－4931(2016)01－0061－03

韩春晖，男，硕士研究生，主管药师，主要从事药物分析及药品质量标准研究，（电话）0411－84255311（电子信箱）luanshuangdl＠163．com。

2015－07－28)