超高效液相色谱串联质谱法测定茶叶中6种农药残留

陈言凯（1.福建省产品质量检验研究院，福建福州350002；2.国家加工食品质量监督检验中心（福州），福建福州350002）



超高效液相色谱串联质谱法测定茶叶中6种农药残留

陈言凯1，2
（1.福建省产品质量检验研究院，福建福州350002；2.国家加工食品质量监督检验中心（福州），福建福州350002）

摘要：建立了高效液相色谱－电喷雾电离串联质谱同时检测茶叶中灭多威、噻虫嗪、吡虫啉、啶虫脒、丁醚脲和氯噻啉6种农药残留的方法。提取液经过中性氧化铝石墨化碳小柱净化，超高效液相色谱-电喷雾电离串联质谱法测定。在空白茶叶基质中加入适量标准中间液，混匀后加乙腈提取、净化，并以空白茶叶基质提取液为稀释溶液配制标准曲线，采用外标法定量。结果表明，啶虫脒和灭多威在0.20～40.0μg/L，噻虫嗪、吡虫啉和丁醚脲在1.00～50.0μg/L，氯噻啉在5～200μg /L范围内呈良好线性关系，相关系数≥0.9924，这6种农药测得平均回收率为70.3％～101％，相对标准偏差（RSD）为0.93％～9.0％。该方法简便、可靠、稳定，可用于茶叶中多种农药残留的快速筛选与检测。

关键词：茶叶；多农药残留；固相萃取；超高效液相色谱-串联质谱

1　引言

茶叶是我国出口的主要经济作物之一。来自中国茶叶流通协会数据，2013年全国茶叶总产量达189万吨，同比增长6.5％，全国茶叶总产值首次突破1000亿元。但是近年来欧盟不断实施新的更为严格的茶叶农药残留标准，大大削弱了我国茶叶的出口能力，农药残留问题已经严重制约了我国茶叶产业的发展。

虽然我国GB/T2763- 2014中规定，灭多威、噻虫嗪、吡虫啉、啶虫脒、丁醚脲和氯噻啉6种农残在茶叶中的残留限量较高[1]，但欧盟对茶叶中这几种农残均是以仪器检出限作为限量值，这就要求我们建立更加稳定、灵敏的检测方法对这几种目标物进行分析。液相色谱－串联质谱法（LC- MS/MS）因具有灵敏、准确等特点，适用于分析茶叶基质这种复杂、背景干扰严重的痕量化合物。目前测定茶叶中农残的方法主要为液相色谱-串联质谱法[2-4]、液相色谱法[1-2]、气相色谱[6]、气质联用[7]，然而气相色谱对于挥发性差、极性强、热不稳定的有机物存在一定局限性；液相色谱很难达到要求检出限；目前鉴于LC- MS/MS同时分析茶叶中6种农药残留的方法尚未见报道。因此，本文采用自制石墨化碳中性氧化铝固相萃取小柱净化，结合液相色谱-质谱串联法建立了茶叶中6种常见农药残留的分析方法，为茶叶中农药残留的监控提供了一种快速、可靠的监测手段。

2　实验部分

2.1材料与试剂

液质联用仪：液相部分Agilent 1290（配有1290手动进样器、1290双元泵、1290柱温箱），质谱部分Agilent 6460三重四级杆质谱仪（配Agilent Jet Stream ESI电喷雾离子源，美国安捷伦科技公司）；色谱柱:Acquity BEH C18（1.7μm，50mm×2.1mm i.d.，美国Waters公司）；电子分析天平：Sartorius BSA 224S（塞多利斯科学仪器有限公司）；超声振荡器：DS- 8510DTH（上海弗鲁克流体机械制造有限公司）；旋涡混匀器：Maxi Mix II；涡旋振荡器（Thermo Fisher Scientific，美国）。

农药标准品来自农业部环境质量监督检验测试中（天津）；石墨化碳（安捷伦公司）；中性氧化铝（国药）；乙腈（色谱纯，德国Merck公司）；甲醇（色谱纯，德国Merck公司）；甲酸（色谱纯，德国Merck公司）；实验用水来自Milli- Q超纯水系统（美国，Millipore公司）。

2.2样品前处理

固相萃取柱：在6mL萃取柱管里面先加垫片，压实，加入约0.3g的石墨化碳，轻轻敲击使其均匀分布，再加入约1g的中性氧化铝，轻轻敲击使其压实，加入一垫片，用玻璃棒压实即可得到所需固相萃取小柱。使用之前用2 mL乙腈活化。

样品制备：称取样品约2.5g，加入25mL乙腈，涡旋混匀，超声提取30min，离心，准确移取上清液2.00mL过固相萃取小柱，收集流出液，用约2mL乙腈淋洗，合并流出液，氮气吹至近干，用50％乙腈定容至2.00mL，涡旋混匀，过膜上机待测。

2.3LC-MS/MS条件

2.3.1色谱测定条件

柱温40℃；进样量2.0μL；流速0.3mL/min；流动相：A：0.3％甲酸水溶液，B：乙腈；梯度洗脱条件：0～2.00 min，流动相B保持80％；2.01～3.5min，流动相B由80％变到1％；3.51～5.50min，流动相B保持1％的比例，5.51～7min，流动相B保持80％的比例。

2.3.2质谱测试条件

扫描方式：正离子模式；监测方式：多反应监测（MRM）；干燥气温度：300℃；干燥气流速：8L·min-1；雾化气压力：40psi；鞘气温度：350℃；鞘气流速：12 L·min-1；毛细管电压：3500V；喷嘴电压：0V。碰撞能量及定性和定量离子对等质谱参数见表1。

3　结果与讨论

3.1固相萃取小柱的制备

由于茶叶基质非常复杂，因此必须采用大量净化手段净化后才能上机。石墨化碳由于其具有多层稳定的结构和多向异性，与色素等杂质具有较强的作用力，而本文所选择的目标物产生的作用比较单一，且不会保留所选目标物，因此是非常理想的净化基质。中性氧化铝对亲脂性色素也具有一定的吸附性，且对农药无吸附作用。吸附剂粉末的用量是影响前处理净化效果和回收率的重要因素，用量小，则净化效果不明显；用量大，净化效果虽好，但回收率低，不能满足检测要求。当石墨化碳低于0.2g时，色素不能完全被吸附；当石墨化碳高于0.3g时，色素可以被完全吸附。通过实验探索，在6mL的固相萃取小柱中加入1g中性氧化铝和0.4g的石墨化碳可以将色素完全吸附，且得到较好的回收率。

3.2方法的线性范围、定量下限、回收率与精密度

在空白茶叶基质中加入适量标准中间液，混匀后加入乙腈提取、净化，并以空白茶叶基质提取液为稀释溶液配制标准曲线，采用外标法定量。结果表明，啶虫脒和灭多威在0.20～40.0μg /L；噻虫嗪、吡虫啉和丁醚脲在1.00～50.0μg /L；氯噻啉在5～200μg /L范围内呈良好的线性关系，相关系数≥0.9924，这6种农药测得平均回收率为70.3％～101％，相对标准偏差（RSD）为0.93％～9.0％，以各个农药的加标水平下限为准，按3倍信噪比（S/N）计算方法检出限（LOD），氯噻啉1.0μg /L，吡虫啉、噻虫嗪和丁醚脲为0.1μg /L，啶虫脒和灭多威0.03μg/L。以10倍信噪比计算方法定量限（LQD）氯噻啉3.3μg/L，吡虫啉、噻虫嗪和丁醚脲为0.3μg/L，啶虫脒和灭多威为0.1 μg/L。

3.3实际样品分析

采用本试验建立的分析方法对市售的50个批次茶叶样品进行分析，丁醚脲检出6个，检出浓度为5～23 μg/kg；灭多威检出11个，检出浓度为6～85μg/kg；吡虫啉检出5个，检出浓度为35～128μg/kg；啶虫脒、噻虫嗪和氯噻啉均未检出。实验结果表明，本方法准确、快速、可靠，可应用于实际大批量样品的快速分析。

参考文献

[1]陈红平，刘新，王川丕，等.超高压液相色谱－串联质谱测定茶叶中10种极性农药残留[J].分析试验室，2011，30（8）：48- 53.

[2] Chen G，Cao P，Liu R. A multi- residue method for fast determination of pesticides in tea by ultra performance liquid chromatography- electrospraytandemmassspectrometry combined with modified QuEChERS sample preparation procedure[J]. Food Chemistry，2011，125（4）：1406- 1411.

[3]蒋定国，杨大进，王竹天，等.茶叶中34种有机磷和氨基甲酸酯农药多残留的测定[J].中国卫生工程学，2007，6（3）：157- 159.

[4]刘妍慧，于常红，刘岩，等.基质固相分散萃取-高效液相色谱串联质谱法（HPLC- MS- MS）同时测定茶叶中11种农药的残留量[J].茶叶科学，2014，34（3）：71- 78.

[5]楼正云，汤富彬，陈宗懋，等.高效液相色谱法检测茶叶中噻虫嗪残留量[J].分析试验室，2009，28（5）：76- 78.

[6]王军，刘丰茂，温家钧，等.苯醚甲环唑在茶叶中的残留量及其在茶汤中的浸出动态研究[J].农药学学报，2010，12（3）：299- 302.

[7]庞国芳，范春林，李岩，等.茶叶中653种农药化学品残留GC - MS、GC- MS/MS与LC- MS/MS分析方法：国际AOAC方法评价预研究[J].分析测试学报，2012，31（9）：13- 26.□

作者简介：陈言凯（1987-），男，助理工程师，硕士，从事食品安全分析工作，18950420032，cyk521501@163.com。

基金项目：国家质检总局行业公益性科研专项资助（201210075）

收稿日期：2015- 12- 10

中图分类号：O657.63

文献标识码：A

文章编号：1008- 553X（2016）02- 0089- 03

doi：10.3969/j.issn.1008- 553X.2016.02.028