慢性盆腔炎免疫抗炎机制的实验研究进展

2016-03-10广西中医药大学硕士研究生530001南宁市明秀东路179号王志萍广西中医药大学530001张叶美麟广西中医药大学硕士研究生530001

广西中医药 2016年1期

熊　冰　广西中医药大学硕士研究生　530001　南宁市明秀东路179号王志萍　广西中医药大学　530001张　波　米　惠　梁　草　叶美麟　广西中医药大学硕士研究生　530001

慢性盆腔炎免疫抗炎机制的实验研究进展

熊冰广西中医药大学硕士研究生530001南宁市明秀东路179号
王志萍*广西中医药大学530001
张波米惠梁草叶美麟广西中医药大学硕士研究生530001

关键词慢性盆腔炎；免疫抗炎机制；研究进展

慢性盆腔炎（chronic pelvic inflammatory disease，CPID）是指女性内生殖器及其周围结缔组织、盆腔腹膜的慢性炎症［1］。常为急性盆腔炎未彻底治疗，在患者体质较差的情况下，急性盆腔炎的病程迁延及反复发作，造成慢性盆腔炎，但也有部分慢性盆腔炎患者无急性盆腔炎症病史。慢性盆腔炎包括慢性子宫内膜炎、慢性输卵管炎、输卵管卵巢炎及慢性盆腔结缔组织炎［2］。慢性盆腔炎其特点主要是病情复杂、病程长、反复发作、临床表现痛苦、治愈率低等［3］。据统计，在我国本病的发病率达15%～20%［4］。大量的临床病例研究表明，在我国该病高发人群为20～35岁育龄妇女，总患病率约为40%［5］。近年来临床和实验研究证实，调节机体自身免疫，提高人体抵抗力，对于治疗慢性盆腔炎疾病具有独特的优势。现就近年来慢性盆腔炎免疫抗炎机制的实验研究综述如下。

1　病因病机

根据本病临床特点，其可散见于中医古籍“热入血室”“带下病”“经病疼痛”“妇人腹痛”“癥瘕”“不孕”等病症［6］。中医认为其常因湿热、湿毒之邪乘虚入侵，与气血互结，气血瘀滞，或肝气郁结，气滞血瘀，不通为痛，久则内结成癥［7］。现代医学发现慢性盆腔炎发病除了与病原体感染有关外，还与机体免疫功能低下、紊乱有关。由于血瘀、血液黏稠度异常，致使血流不能正常进行，使得血液中的蛋白发生了改变，影响了免疫功能。当机体抵抗力低下或出现了其他因素导致免疫力低下时，就可能导致慢性盆腔炎的发生。

2　免疫抗炎机制的实验研究模型

慢性盆腔炎病理机制及治疗手段一直是各研究领域的热点和难点，建立一个稳定的慢性盆腔炎动物模型对于治疗该疾病以及在今后的实验应用上具有重大意义。

2.1模型动物选择目前用于慢性盆腔炎动物模型的有：家兔、大鼠、小鼠。唐伟琼［8］采用家兔为实验动物，模拟人类盆腔炎致病机制，使双侧输卵管发生机械损伤和细菌感染。结果证实该方法可造成家兔有明显的盆腔炎症状，并有输卵管阻塞、积脓、积水等现象。但由于家兔的成本高，且造模后的家兔容易感染而死，所以目前选用家兔进行盆腔炎造模已较少。刘弘等［9］采用小鼠造模，造模前取小鼠阴道分泌物UU培养均为阴性，然后小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇注射液，每周1次，共4次。第二次注射后阴道接种UU感染液，每天接种1次，连续3次。1周后再加强接种1次。造模结束后1周取小鼠阴道分泌物进行UU液体培养。造模组肉眼可见子宫和输卵管不同程度水肿，光镜下观察黏膜层及间质中性粒细胞有不同程度的浸润，腺体扩增，提示造模成功。目前文献报道中，绝大部分采用大鼠作为慢性盆腔炎模型动物。刘明等［10］采用盆炎清灌肠剂治疗慢性盆腔炎的实验是选用大鼠子宫作为研究对象，其原因为：大鼠的子宫在其盆腔生殖器中占有相当大的比重，并且子宫内膜炎是盆腔炎的一种，又可因其上行感染引起盆腔其他脏器的炎症，故可认为大鼠子宫内膜炎基本可以反映盆腔的炎症状态。

2.2造模方法选择目前用于建立慢性盆腔炎动物模型的方法有化学性烧伤、细菌感染、混合菌感染加机械损伤等。沈正龙等［11］采用配制成的25%的苯酚胶浆作为致炎剂，向大鼠双侧子宫内注射0.04 ml，注毕，分层关腹，消毒术区，之后通过病理切片观察炎症的程度。陶雪峰等［12］采用苯酚胶浆加机械损伤来造大鼠子宫慢性盆腔炎的模型，在大鼠的左侧子宫用注射器针头划伤子宫内壁，然后再注射制备好的苯酚胶浆，最后缝合伤口，碘伏消毒。病理切片结果显示子宫上皮组织变性坏死明显，充血水肿明显，炎性浸润明显，说明盆腔炎模型成立。造模用的菌液可以是单一菌液，也可以是混合菌。程乐等［13］采用大肠杆菌感染大鼠子宫制造慢性盆腔炎症，抽取配制好的大肠杆菌悬液（浓度为6×106/ml）0.2 ml，于子宫分叉处插入右侧子宫，用注射器机械损伤子宫内膜组织，然后注射菌液，缝合伤口。结果大鼠子宫肿胀度大、白细胞计数明显升高，表明造模成功。汪明德等［14］将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌按2∶1比例配成30亿个菌株的混合菌注入已经机械损伤的大鼠双侧子宫，一段时间后，取大鼠子宫做切片染色观察，可见子宫壁增厚，正常结构紊乱，分层不清，有大量炎性细胞浸润，表明造模成功。卢如玲等［15］将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌按2∶1∶1比例用无菌生理盐水稀释，配成浓度约为3×109／ml的混合菌注入大鼠双侧子宫，一段时间后取大鼠子宫进行病理切片，结果子宫周围软组织中可见大量炎性细胞浸润，有脓肿形成及纤维组织增生。冯书梅等［16］采用混合菌加机械损伤建立大鼠慢性盆腔炎模型，大鼠行下腹正中切口，开腹后暴露并固定子宫，用1 ml注射器机械损伤子宫内膜组织，注入0.2 ml菌液至双侧子宫内，缝合伤口。子宫病理学改变：大部分见宫腔粘连、扩张，黏膜固有层变薄或消失。上皮细胞部分变性坏死，部分间质结果破坏，内膜充血明显，说明造模成功。

3　免疫抗炎机制的实验研究方法

有研究表明，免疫因素是引起慢性盆腔炎的关键因素［17］。目前慢性盆腔炎免疫抗炎机制研究方法，从宏观整体指标到细胞分子，甚至基因水平等不同层次开展。

3.1整体免疫抗炎整体免疫抗炎通过宏观整体指标检测来说明中医治疗慢性盆腔炎的抗炎机制，如子宫组织学指标、血液流变学指标。张小丽等［18］采用盆炎宁治疗混合菌液制造的大鼠慢性盆腔炎模型，结果显示：盆炎宁片可不同程度地改善子宫病理情况，可使子宫黏膜上皮细胞坏死变性及固有层、肌层结缔组织增生显著减少，病变程度明显减轻，未见浆膜层炎细胞浸润剂管腔粘连阻塞。常润等［19］采用妇炎舒胶囊治疗混合菌加机械损伤所致的慢性盆腔炎模型大鼠，通过检测大鼠血液流变学相关指标，得出：妇炎舒大、中、小剂量组与模型组比较，高切、中切、低切全血黏度，红细胞聚集指数、红细胞电泳指数、红细胞压积等指标降低，有显著性变化。结果表明，妇炎舒胶囊对混合菌液致大鼠慢性盆腔炎有治疗作用，其作用机制可能是由于降低血液粘度，加快盆腔血流速度，从而促进炎症吸收，加速组织修复与再生。

3.2分子免疫抗炎慢性阶段的病理改变是继细菌感染后的免疫反应所致，与免疫因素如细胞因子、炎性介质、自由基及细胞凋亡等因素的异常改变有关。陈莹等［20］采用妇炎宁颗粒（具有温阳益气、活血通络、清热解毒之功）治疗混合菌液造模的慢性盆腔炎大鼠，通过酶联免疫吸附（ELISA）法测定大鼠血清白介素－2（IL－2）、白介素－6（IL－6）的浓度变化。结果治疗组大鼠血清IL－2、IL－6值与模型组相比有显著性差异，其中治疗高剂量组与模型组相比具有极显著性差异，与对照组相比有显著性差异。表明妇炎宁颗粒治疗慢性盆腔炎作用机制与其调节机体免疫功能相关。李鑫等［21］采用混合菌菌液致大鼠盆腔炎性疾病模型，观察妇科千金片对大鼠阴道、宫颈、子宫、输卵管四个部位病理改变影响。用ELISA法检测血清中白介素－1β（IL－1β）、肿瘤坏死因子－α（TNF－α）、白介素－10（IL－10）细胞因子，结果表明妇科千金片能够降低大鼠血清中IL－1β、TNF－α浓度，提高IL－10浓度。邢人鑫［22］采用双侧输卵管注入30%苯酚胶浆制造免疫低下大鼠模型，运用不同剂量的金刚藤口服液灌胃给药。应用ELISA法检测血浆中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）及免疫球蛋白G（IgG）的含量。结果表明金刚藤口服液能够升高IgA、IgM及IgG含量，从而提高机体的免疫应答，说明金刚藤口服液对中枢免疫器官具有保护作用。巴东娇［23］采用柳叶腊梅灌肠剂（有清热解毒，化湿除带，祛瘀止痛，散结消癥功效）治疗慢性盆腔炎模型鼠，测定大鼠血清T淋巴细胞亚群，血液抗凝后用仪流式细胞仪测CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋，结果表明各药物组T淋巴细胞CD4＋含量明显提高，CD8＋含量明显降低，CD4＋/CD8＋显著提高，与模型组比较有显著性差异，说明柳叶腊梅灌肠能够明显改善慢性盆腔炎模型鼠细胞的免疫功能。李钦等［24］观察了盆炎坤和汤（组成：忍冬滕、蚤休、白花蛇舌草、蒲公英、丹参、地鳖虫、皂角刺、鳖甲、五灵脂、延胡索、桂枝、黄芪、鸡内金）对苯酚胶浆致慢性盆腔炎大鼠模型的影响，检测血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量，结果显示造模后大鼠血清SOD水平显著下降，MDA含量明显升高，盆炎坤和汤可不同程度升高SOD水平，降低MDA含量。陈东生等［25］采用大肠杆菌致大鼠慢性盆腔炎模型，发现菝葜（有活血化瘀、消炎止痛等功效）能够明显减轻慢性炎症病理变化，明显降低大鼠血清中IL－2和MDA水平，结果表明菝葜水提取液对慢性盆腔炎的免疫功能紊乱有良好的调节作用。程静等［26］用混合菌制造大鼠慢性盆腔炎模型，再采用免疫组化法观察大鼠子宫内膜细胞半胱天冬酶类（Caspase－3）、基质金属蛋白酶－2（MMP－2）、核转录因子kappa B（NF－κB）的表达。盆康舒给药组Caspase－3、MMP－2的表达增加，促进细胞凋亡，减轻炎症反应，减少纤维组织过度增生，减少炎症介质的过度释放。

3.3基因免疫抗炎目前研究领域不仅涉及宏观整体、细胞分子，甚至已经开始从基因水平进行研究，探讨慢性盆腔炎抗炎机制在基因水平上的更详细的表达结果。刘瑞芬等［27］采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）法检测大鼠子宫组织中细胞粘附分子－1（ICAM－1）mRNA、TNF－αmRNA的表达，免疫组化法检测各组大鼠子宫组织中NF－κB、IκB、ICAM－1、TNF－α的表达。结果表明，模型组大鼠子宫组织ICAM－1mRNA、TNF－αmRNA、ICAM－1、TNF－α表达水平高于正常对照组，盆腔炎颗粒可以显著降低模型大鼠的NF－κB、IκB、TNF－α、ICAM－1、TNF－αmRNA、ICAM－1mRNA的表达。孙晶等［28］采用荧光定量PCR方法检测大鼠子宫组织ICAM－1mRNA、TGF－βmRNA的表达。结果显示：妇炎宁汤可以降低盆腔炎性疾病后遗症大鼠模型TGF－βmRNA、ICAM－1mRNA的表达。

4　结　语

综上所述，影响慢性盆腔炎患者的病情严重程度除了与疾病本身有关之外，更与患者的机体免疫功能紊乱有密切关系，其中参与免疫反应有关的因素有：细胞因子、炎症介质、细胞凋亡及自由基等。因此，对盆腔炎患者而言，除了运用不同方法治疗疾病外，还应注重改善自身免疫调节。通过研究具体的抗炎通路及相应的免疫因子来达到针对性的治疗值得进一步继续研究。

参考文献

［1］曹泽毅.中华妇产科学［M］.北京：人民卫生出版社，1999：1212－1217.

［2］乐杰.妇产科学［M］.5版.北京：人民卫生出版社，2002：295－303.

［3］许延霞，赵秋革，李小风.中药灌肠配合体外高频治疗慢性盆腔炎疗效观察［J］.中国实用医药，2009，4（25）：45－46.

［4］郭慧宁，张静，胡国华.慢性盆腔炎中西医治疗浅谈［J］.黑龙江中医药，2013，42（2）：4－5.

［5］张秀军，陈月花，张桂英，等.消积颗粒对慢性盆腔炎患者免疫功能的影响［J］.海南医学院学报，2015，21（5）：689－691.

［6］吕桂凤，安燕，李燕.中医药对慢性盆腔炎免疫调节作用的研究现状［J］.中外医疗，2009，28（7）：79－80.

［7］石富娟.慢性盆腔炎的辨证论治［J］.中医药学刊，2005，23（1）：186.

［9］刘弘，赵红，苑贺英，等.解脲支原体血清8型感染小鼠盆腔炎症性疾病模型的建立［J］.中日友好医院学报，2011，25（2）：98－100，121.

［10］刘明，张永萍，梁建东，等.盆炎清灌肠剂抗炎及对慢性盆腔炎大鼠血液流变性的影响［J］.中药药理与临床，2014，30（6）：148－150.

［11］沈正龙，刘虹，郑学刚.延黄妇清片对慢性盆腔炎大鼠血清中SOD、MDA影响的实验研究［J］.新中医，2014，46（10）：195－196.

［12］陶雪峰，成雪花，武苗，等.盆腔炎方对苯酚胶浆致大鼠慢性盆腔炎模型的影响［J］.陕西中医，2012，33（8）：1087－1088.