公猪精液的冷冻保存及解冻

吴玉玉

(河南省延津县畜牧局 453200)



公猪精液的冷冻保存及解冻

吴玉玉

(河南省延津县畜牧局 453200)

一般利用液氮(-196℃)作冷源(过去有用干冰作冷源的)，将新鲜公畜精液经过处理，分装，冷冻保存，即为冻精制作。本文就猪精液冷冻保存稀释液的制作、精液稀释、降温和平衡、精液的分装和冻结及冻精的解冻进行技术性阐述。

1精液冷冻保存稀释液

精液冷冻保存的稀释液一般以葡萄糖、乳糖、甘油为主要成分，其中甘油浓度以1%～3%为宜。据报道，一些配方中建议加入EDTA(乙二胺四乙酸)，可起到良好作用。精液品质与冷冻效果密切相关，最好用浓精液制作冻精。

2精液稀释

一般多采用一次稀释法或二次稀释法，三次稀释法很少用。①一次稀释法：常用于颗粒精液。把含甘油的稀释液按要求比例一次加入精液之中，在8℃下平衡3.5～6 h，保证甘油能够完全浸入精子内，产生抗冻保护作用。②二次稀释法：常用于袋装精液。为减少甘油对精子的有害作用，采用本法效果好。将采出的精液先以不含甘油的第一稀释液稀释至最后倍数的一半，经1 h缓慢降温至15℃，维持4 h，再从15℃经1 h降温至5℃，然后用含甘油的第二稀释液在同温度下作等量第2次稀释。在5℃下平衡2 h。③三次稀释法：首先用脱脂奶将浓份精液在30℃下按1∶0.5倍作第1次稀释，至1 h降温至15℃；其次用蔗糖-卵黄液(11%蔗糖液80 mL加入卵黄20 mL)，按原精液量1∶1作第2次稀释，经2～3 h降温至5℃；进一步在5℃下用含甘油的蔗糖-卵黄液(11%蔗糖78 mL加入卵黄20 mL、甘油2 mL)，按原精液1：1作第3次稀释。稀释后的精液在38～40℃进行镜检，要求精子活力不低于原精液。如果精液密度没有测定，稀释倍数一般以2～4倍为宜[1]。

3降温和平衡

降温指精液稀释后在30℃以上，经1 h由30℃降至15℃，维持4 h，再经1 h降至5℃，或用原精在室温静置2 h后，离心增加浓度，经2 h降至5℃[2]。平衡指加入含甘油的稀释液对精液作用的时间，以防低温打击。

4精液的分装和冻结

冻精采用颗粒、细管、安瓿瓶和袋装四种分装方法。细管冻精是当今流行的冻精分装方法：应用材料为0.25 mL或0.5 mL塑料细管，在5℃下分装精液，用聚乙烯粉末封口，充分平衡后冻结。颗粒法：将平衡的精液滴在一定温度下冻结成0.1～0.2 mL的颗粒。安瓿法目前很少应用。由于输精量大，猪的精液也可用塑料袋装，但效果不太好。

根据剂量和冷源不同，冻结方法有干冰埋藏法和液氮熏蒸法。

干冰埋藏法：A.颗粒冷冻法：将干冰置于木盒中，用滴管将5℃经平衡的精液(0.1 mL或0.2 mL)滴入孔内，用干冰封埋2～4 min，收集冻精放入液氮或干冰内贮存。B.细管、袋装冷冻法：将分装的精液平铺在压实的干冰面上，覆盖干冰，2～4 min后将冻精移入液氮或干冰内贮存。

液氮熏蒸法：A.颗粒冷冻法：将装有液氮的广口保温瓶上置一铜纱网，距液氮面1～3 cm，预冷数分钟，使其温度维持在-80℃～-100℃(猪的滴冻温度是-75℃～-80℃)，将平衡的精液按规定量均匀而整齐地滴在上面，停留2～4 min，精液变白时，收集冻精入瓶，移入液氮贮存。B.细管、袋装冷冻法：与颗粒冷冻相同，将细管和袋装精液放在距液氮面一定距离的铜纱网上，停留5 min，待精液冻结后收集贮于液氮中。

冻精的保存：冻结的细管、颗粒、安瓿瓶或袋装精液，经解冻检查合格后，即按标识(品种、编号、采精日期、型号)分别包装，转入液氮罐中贮备使用。

4冻精的解冻

解冻温度、解冻液成分和解冻方法直接影响精子解冻后的活力。解冻方法分为低温水解冻(0～5℃)法、温水解冻(30～40℃)法和高温解冻(50～70℃)法等，其中以30～40℃解冻方法实用、效果较好。解冻液的种类：除各自的稀释液和精清外，较好的有葡萄糖3 g、柠檬酸钠1.5 g，溶解在100 mL蒸馏水中，加安钠咖注射液2 mL使用效果较好。解冻方法：细管、安瓿瓶和袋装精液可直接投入35～40℃温水中，待精液融化一半时，立即取出备用。颗粒精液可干解冻，即将灭菌容器置于50～60℃水中恒温后，投入一次输精剂量的精液颗粒，让其均匀散开，摇至融化，同时加入20～30℃解冻液1 mL；湿解冻是将1 mL解冻液装入灭菌解冻容器，置于50～60℃温水中预热，然后投入一次输精剂量的若干颗粒冻精，均匀散开，摇至融化，取出使用。解冻后精液应立即用于输精，不宜保存。

5参考文献

[1]孙智.公猪精液的稀释和保存[J].养殖技术顾问，2014(7)：58.

[2]赵书广.中国养猪大成[M](第2版).北京：中国农业出版社，2013.

中图分类号：S828.3

文献标识码：B

文章编号：1005-2739(2016)03-0029-02

作者简介：吴玉玉(1988-)，女，河南省延津县人，大专，助理畜牧师。

收稿日期：2015-12-28