抗核抗体和抗核抗体谱联合检测诊断自身免疫性疾病的临床价值

周莲，符明昌，羊文芳

(1.海南省第三人民医院检验科，海南 三亚 572000；2.海南省西部中心医院检验科，海南 儋州 571700)

抗核抗体和抗核抗体谱联合检测诊断自身免疫性疾病的临床价值

周莲1，符明昌1，羊文芳2

(1.海南省第三人民医院检验科，海南 三亚 572000；2.海南省西部中心医院检验科，海南 儋州 571700)

目的 探讨自身免疫性疾病(AID)患者血清抗核抗体(ANA)和抗核抗体谱(ANAs)的表达及临床意义。方法选取2013年1月至2015年4月海南省第三人民医院收治的194例AID患者和103例非AID患者(对照组)，根据美国风湿病学会的诊断标准将194例AID患者分为系统性红斑狼疮(SLE)组、混合性结缔组织病(MCTD)组、干燥综合征(SS)组、硬皮病(PSS)组、类风湿性关节炎(RA)组和过敏性紫癜(AP)组。采用间接免疫荧光法(IIF)和免疫印迹法(IBT)检测所有患者的ANA和ANAs，并进行统计分析。结果女性患者检出ANA、Ul-SnRNP、抗dsDNA、抗SSA、抗SSB、抗核小体和抗组蛋白的阳性率均明显高于男性，差异均有统计学意义(P＜0.05)；在不同AID患者中ANA检测均呈阳性，其中SLE组阳性率最高，达93.5%，其次分别为MCTD组(85.0%)、SS组(79.2%)、PSS组(69.2%)、RA组(35.8%)、AP组(20.0%)，均明显高于对照组(4.9%)，差异均有统计学意义(P＜0.05)。RA组主要表达抗组蛋白(47.7%)，明显高于对照组(1.0%)。SLE组主要表达抗SmDl(37.9%)、抗dsDNA(66.1%)、抗SSA (41.9%）、抗核小体(77.4%)和抗组蛋白(37.1%)，均明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。SS组主要表达抗SSA(58.3%)和抗SSB(50.0%)，均明显高于对照组。MCTD组主要表达Ul-SnRNP(35.0%)、抗SSA(60.0%)和抗SSB(30.0%)，均明显高于对照组。PSS组和AP组主要表达抗Scl-70(46.1%和10.0%)，均明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)；130例ANA阳性患者检出97例ANAs阳性，符合率74.6%；64例ANA阴性患者检出58例ANAs阴性，符合率为90.6%；AID患者ANA核型分布以核颗粒型和核均质型为主，其他核型较少见；核颗粒型多为抗SSA(48.5%)、抗SSB(23.7%)和抗组蛋白(26.8%)，核均质型多为抗dsDNA(28.9%)、抗核小体(29.9%)和抗组蛋白(25.7%)。结论ANA可辅助诊断自身免疫性疾病，但缺乏特异性，联合抗核抗体谱检测对AID的诊断有重要意义。

自身免疫性疾病；抗核抗体；抗核抗体谱；表达；临床意义

自身免疫性疾病(autoimmune diseases，AID)是机体自身发生免疫应答及免疫功能发生紊乱而引发多器官系统受损的一种疾病[1]，临床表现多变，往往累及皮肤、浆膜、关节、肾及中枢神经系统等。越来越多的研究证实，采用间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence，IIF)检测抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)，对辅助诊断AID具有重要的意义[2-3]。免疫印迹法(immunoblotting test，IBT)特异性抗核抗体谱(antinuclear antibody spectrum，ANAs)检测对AID的鉴别诊断、病情判断、治疗监测和预后评估具有重要的价值[4-5]。本研究通过对AID患者中ANA和ANAs的检测，分析其在AID患者中的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年1月至2015年4月海南省第三人民医院收治的194例AID患者，其中男性70例，女性124例，年龄5～82岁，平均(46.7±15.8)岁。所有患者均符合美国风湿病学会的诊断标准，其中类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)65例，系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)62例，干燥综合征(sicca syndrome，SS)24例，混合性结缔组织病(mixed connective tissue disease，MCTD)20例，硬皮病(progressive systemic sclerosis，PSS)13例，过敏性紫癜(allergic purpura，AP)10例。对照组为同期非AID住院患者103例，男性39例，女性64例；年龄15～74岁，平均(45.3±13.1)岁。本研究经医院伦理委员会批准，并获得患者或家属知情同意。

1.2 主要仪器和试剂 抗核抗体以Hep-2/猴肝为抗原基质，试剂盒由欧蒙公司提供，采用欧蒙公司EUROStarⅢPlus荧光显微镜观察，细胞或组织内出现特异性荧光判为阳性。抗核抗体谱试剂购自欧蒙(德国)医学实验诊断股份公司产品，只要有一种抗体阳性，即视为抗核抗体谱检测阳性。

1.3 检测指标与方法 所有患者均于入院次晨取空腹静脉血3 mL，离心分离血清后，采用间接免疫荧光法(IIF)检测ANA和殴蒙免疫印迹法(IBT)检测抗核抗体谱(包括抗Ul-SnRNP、抗SmDl、抗dsDNA、抗Jo-1、抗SSA、抗SSB、抗Scl-70、抗核小体、抗组蛋白、抗CNEP-B、抗PM-Scl、抗Rib-P等12种不同抗原IgG类抗体)。整个操作过程严格按照说明书进行。

1.4 统计学方法 应用SPSS17.0统计软件进行数据分析，计数资料用率表示，率的比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同性别组ANA和ANAs阳性率比较 女性患者检出ANA、Ul-SnRNP、抗dsDNA、抗SSA、抗SSB、抗核小体和抗组蛋白的阳性率明显高于男性患者，差异均有统计学意义(P＜0.05)。抗SmDl、抗Jo-1、抗Scl-70、抗CNEP-B、抗PM-Scl、抗Rib-P在性别间比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

表1 不同性别组ANA和ANAs阳性率比较[例(%)]

2.2 AID患者ANA和ANAs阳性率比较 RA组ANA、抗dsDNA、抗SSA、抗SSB和抗组蛋白的阳性率分别为35.8%、7.7%、15.4%、6.2%、47.7%，均明显高于对照组(P＜0.05)。SLE组ANA、Ul-SnRNP、抗SmDl、抗dsDNA、抗SSA、抗SSB、抗核小体、抗组蛋白和抗Rib-P的阳性率分别为93.5%、8.1%、37.9%、66.1%、41.9%、16.1%、77.4%、37.1%、12.9%，均明显高于对照组(P＜0.05)。SS组ANA、抗SSA、抗SSB和抗组蛋白的阳性率分别为79.2%、58.3%、50.0%、8.3%，均明显高于对照组(P＜0.05)。MCTD组ANA、Ul-SnRNP、抗dsDNA、抗SSA、抗SSB、抗Scl-70、抗组蛋白和抗Rib-P的阳性率均明显高于对照组(P＜0.05)。PSS组和AP组ANA、抗Scl-70的阳性率均明显高于对照组(P＜0.05)，见表2。

表2 AID患者ANA和ANAs阳性率比较[例(%)]

2.3 AID患者ANA表达和ANAs表达情况 194例AID患者检出ANA阳性130例(67.0%)，检出ANAs阳性124例(63.9%)，两者差异无统计学意义(P＞0.05)。130例ANA阳性患者检出97例ANAs阳性，符合率为74.6%；64例ANA阴性患者检出58例ANAs阴性，符合率为90.6%。

2.4 AID患者ANA核型与抗核抗体谱表达情况 对ANA和抗核抗体谱同时阳性的97例患者核型分析，其中核颗粒型多为抗SSA(48.5%)、抗SSB (23.7%)和抗组蛋白(26.8%)，核均质型多为抗dsDNA (28.9%)、抗核小体(29.9%)和抗组蛋白(25.7%)，核仁型多为抗Scl-70(3.1%)，着丝点型多为抗CNEP-B (3.1%)，胞浆颗粒多为抗SSA(3.1%)，核点型和核膜型较少见，见表3。

表3 AID患者ANA核型与抗核抗体谱表达情况[例(%)]

3 讨 论

AID是指机体免疫系统对自身组织或细胞产生病理性免疫应答反应而导致的组织损伤或功能障碍的疾病。AID的潜伏期较长，因此早期诊断AID，对改善预后及提高患者生存率具有重要的意义[6]。ANA是以各种细胞核成分为抗原的自身抗体的总称，可存在细胞核、细胞骨架、细胞浆及细胞分裂周期中，不同的AID有不同的抗核抗体谱[7]。所以，检测ANA和抗核抗体谱有助于诊断和鉴别诊断AID[8]。

身免疫性疾病女性患者较多，本研究结果显示，女性患者检出ANA、Ul-SnRNP、抗dsDNA、抗SSA、抗SSB、抗核小体和抗组蛋白的阳性率均明显高于男性患者，与罗雯斌等[9]研究结果相似。提示女性相对于男性更容易发生自身免疫性疾病，临床上表现为自身抗体的阳性率高于男性。在各种自身免疫性疾病中均可检测ANA阳性，其中SLE组阳性率最高，其次分别为MCTD组、SS组、PSS组、RA组、AP组，与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。说明检测ANA对AID的诊断具有一定临床价值，但特异性较差，只能作为AID的过筛试验。SLE患者免疫调节异常，在细胞凋亡过程中，吞噬细胞不能完全吞噬染色质断裂所释放的核酸，从而可产生多种ANA。本研究显示，SLE组主要表达抗SmDl、抗dsDNA、抗SSA、抗核小体和抗组蛋白，与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。抗SmDl、抗核小体和抗dsDNA在SLE组中呈高表达，而在其他AID组表达极低。说明抗SmDl、抗核小体和抗dsDNA对SLE的诊断具有较高的特异性，可作为SLE诊断的标记抗体。Tang等[10]研究表明，抗dsDNA抗体是SLE的诊断标准之一。覃仕锋等[11]对ENA、ANA和抗dsDNA抗体在AID患者中的相关性研究，发现抗核小体对AID的诊断具有重要的意义。RA组主要表达抗组蛋白，明显高于对照组，与吴茜等[12]研究结果基本一致。抗SSA抗体和抗SSB抗体是诊断SS的标记性抗体，本研究SS组主要表达抗SSA和抗SSB，均明显高于对照组(P＜0.05)。抗SSA在SLE组的阳性率较高，但抗SSB阳性率较低。抗SSB抗体较抗SSA抗体诊断SS具更高特异性，联合检测SSA抗体与抗SSB抗体对提高SS的诊断有重要意义。抗Ul-SnRNP抗体是MCTD的标志性抗体。本研究MCTD组Ul-SnRNP、抗SSA和抗SSB阳性率均明显高于对照组(P＜0.05)。说明Ul-SnRNP抗体有助于鉴别结缔组织病和非结缔组织病，与牟君成等[13]研究结果相符。抗Scl-70抗体是PSS的特异性抗体，多见于弥散型PSS，可用于PSS的诊断。本研究PSS组主要表达抗Scl-70(46.1%)，明显高于对照组(P＜0.05)。何建伟等[14]研究结果显示PSS患者抗Scl-70阳性率为66.7%，与本研究存在差异，这可能与研究样本量、研究方法学不同有关。

194例AID患者检出ANA阳性130例，检出ANAs阳性124例，两者检出率比较差异无统计学意义(P＞0.05)。130例ANA阳性患者检出97例ANAs阳性，符合率为74.6%；64例ANA阴性患者检出58例ANAs阴性，符合率为90.6%，与胡朝军等[15]研究结果基本一致。97例AID患者ANA核型分布以核颗粒型和核均质型为主，其他核型较少见。核颗粒型多为抗SSA、抗SSB和抗组蛋白，核均质型多为抗dsDNA、抗核小体和抗组蛋白。提示AID患者ANA核型与抗核抗体谱有一定的相关性，与文献报道[16]相符合。

综上所述，ANA检测对AID具有筛查作用，抗核抗体谱特异性抗体检测具有疾病特异度和较高的检测敏感度。通过检测ANA来排除AID患者的同时进行抗核抗体谱特异性抗体检测，可提高AID诊断准确率，为疗效观察提供有效依据。

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Clinical value of combined detection of antinuclear antibody and antinuclear antibody spectrum in diagnosis of autoimmune diseases.

ZHOU Lian1,FU Ming-chang1,YANG Wen-fang2.1.Department of Clinical Laboratory,the Third People's Hospital of Hainan Province,Sanya 572000,Hainan,CHINA;2.Department of Clinical Laboratory,Western Central Hospital of Hainan Province,Danzhou 571700,Hainan,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of serum antinuclear antibody (ANA)and antinuclear antibody spectrum(ANAs)in patients with autoimmune diseases(AID).MethodsA total of 194 cases of AID patients and 103 cases of patients without AID(control group)in the Third People's Hospital of Hain-an Province were selected from January 2013 to April 2015.According to the diagnostic criteria of the American College of Rheumatology,the 194 patients with AID were divided into 6 groups as systemic lupus erythematosus(SLE) group,mixed connective tissue diseases(MCTD)group,sicca syndrome(SS)group,progressive systemic sclerosis (PSS)group,rheumatoid arthritis(RA)group and allergic purpura(AP)group.ANA and ANAs of all patients were detected by indirect immunofluorescence(IIF)and immunoblotting test(IBT),and the statistical analysis was performed.ResultsThe positive rates of ANA,Ul-SnRNP,anti dsDNA,anti SSA,anti SSB,anti nuclear and anti histone in female patients were significantly higher than those in males,and the differences were statistically significant(P＜0.05).ANA test was positive in different AID patients,among which the positive rate of SLE group was the highest (93.5%),followed by MCTD group(85.0%),SS group(79.2%),PSS group(69.2%),RA group(35.8%),AP group (20.0%),which were significantly higher than those of control group(4.9%).The expression of anti histone(47.7%)in the RA group was significantly higher than that in the control group(1.0%).SLE group mainly expressed anti-SmDl (37.9%),anti-dsDNA(66.1%),anti-SSA(41.9%),anti-nucleosome(77.4%)and anti-histone(37.1%),which were significantly higher than those of the control group(P＜0.05).SS group mainly expressed anti-SSA(58.3%)and anti-SSB (50.0%),which were significantly higher than those of the control group(P＜0.05).MCTD group mainly expressed Ul-SnRNP(5.0%),anti SSA(60.0%)and anti SSB(30.0%),which were significantly higher than those of the control group(P＜0.05).PSS and AP group mainly expressed anti Scl-70(46.1%and 10.0%),which were significantly higher than those of the control group(P＜0.05).A total of 97 cases of ANAs positive were detected in 130 cases of ANA positive patients,and the coincidence rate was 74.6%.Fifty-eight cases of ANAs negative were detected in 64 cases of ANA negative patients,with the rate of 90.6%.The distribution of ANA karyotype in AID patients was mainly nuclear particle type and nuclear homogeneous type,and other karyotype was rare.Nuclear particle types were mostly anti-SSA(48.5%),anti-SSB group(23.7%)and anti-histone(26.8%),and the nuclear homogeneous types were mostly anti-dsDNA(28.9%),anti-nucleosome(29.9%)and anti-histone(25.7%).ConclusionANA can assist in the diagnosis of autoimmune diseases,but lack of specificity.Combined detection of antinuclear antibody and antinuclear antibody spectrum has important significance for the diagnosis ofAID.

Autoimmune diseases(AID);Antinuclear antibody(ANA);Antinuclear antibody spectrum (ANAs);Expression;Clinical significance

R593.2

A

1003—6350（2016）18—2965—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.18.014

2016-03-10)

周莲。E-mail：3306168047@qq.com