血清和糖皮质激素诱导激酶基因多态性与自然流产的关系

何淑贞，蒲育栋，曹金如，周丽霞，陈寿云，周玉玲

(东莞市第三人民医院产前诊断中心，广东 东莞 523326)

血清和糖皮质激素诱导激酶基因多态性与自然流产的关系

何淑贞，蒲育栋，曹金如，周丽霞，陈寿云，周玉玲

(东莞市第三人民医院产前诊断中心，广东 东莞 523326)

目的 探讨血清和糖皮质激素诱导激酶1(SGK1)rs1743967以及血清和糖皮质激素诱导激酶2 (SGK2)rs743998与自然流产之间的关系。方法采用病例对照研究方法，选取2013年1月至2013年12月我院64例自然流产患者作为自然流产组，同期40例人工流产患者作为对照组，利用3730XL测序仪检测SGK1 rs1743967和SGK2 rs743998基因多态性，χ2检验比较病例组与对照组基因型及等位基因频率分布。结果①SGK1 rs1743967对照组基因型为GG+GT，而自然流产组以GG+GT为主，其次是TT，两组基因型比较差异有统计学意义(P＜0.05)。对照组等位基因G和T频率各占50.0%；自然流产组G占35.2%，T占64.8%，两组等位基因频率比较差异有统计学意义(P＜0.05)。②SGK2 rs743998对照组基因型以CT+TT为主，其次是CC，而自然流产组以CC为主，其次是CT+TT，两组基因型比较差异有统计学意义(P＜0.05)。对照组等位基因C和T频率各占50.0%；自然流产组C占83.6%，T占16.4%。两组等位基因频率比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结论SGK1 rs1743967和SGK2 rs743998与自然流产有关，但相关机制有待今后进一步研究。

血清和糖皮质激素诱导激酶；自然流产；基因多态性；相关性

自然流产是育龄妇女常见的妊娠期疾病，发生率为10%～15%[1]。孕妇黄体功能不全、甲状腺功能低下、胚胎染色体异常、免疫功能异常等是发生早期自然流产的常见原因[2]。Solker等[3]发现在患有原因不明性不孕症妇女的子宫内膜中，血清和糖皮质激素诱导激酶1 (SGK1)的含量较正常孕妇高，而习惯性流产者的SGK1含量则比正常孕妇低。本研究旨在探讨SGK基因多态性与自然流产的关系，进一步阐明自然流产的分子生物学机制，为寻找自然流产的病因提供有利的借鉴依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年1月至2013年12月期间在我院就诊的自然流产患者作为自然流产组，年龄19～40岁，平均(29.6±4.3)岁。纳入对象：无染色体因素、解剖因素、感染因素、内分泌因素、抗磷脂综合征及血管栓塞性疾病等。所有研究对象均未生育过小孩。选择同期进行人工流产的患者作为对照组，年龄19～36岁，平均(28.0±4.5)岁。两组间的年龄差异无统计学意义(t=1.889，P=0.062)。本研究经本院伦理委员会批准，所有对象均签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集和抽提 收集所有对象的一般临床资料，同时采集2 ml EDTA抗凝血，-80℃冰箱保存，用于提取DNA。按DNA提取试剂盒(Axygen)说明书要求进行操作，从全血标本中提取基因组DNA。

1.2.2 主要试剂和仪器 外周血基因组DNA抽提试剂盒、Taq DNA聚合酶、DNA Marker均购自上海翼和应用生物技术有限公司，引物由该公司合成。PRISM 3730序列分析仪购自美国ABI公司。

1.2.3 引物设计与合成 通过NCBI基因序列数据库获得SGK1基因rs1743967 G/T核苷酸序列，并用Primer5.0设计引物序列如下：上游引物AGCCGGCATCAATCTTTAAT，下游引物GCAAAAGCACCC TGTAGGC，扩增产物长度是700 bp。通过NCBI基因序列数据库获得SGK2基因rs743998 C/T核苷酸序列，并用Primer 5.0设计引物序列如下：上游引物GCTCTGTTGCCCAAGAGTCTGTTAG，下游引物AATGTCAACAACTTTCTGGTAATTCTGGTG，扩增产物长度是1 583 bp。

1.2.4 PCR扩增 采用20µL PCR扩增反应体系，含1µL模板DNA，上下游引物各1µL，2µL dNTP，0.2µL Taq聚合酶，2µL反应缓冲液，0.6µL Mg2+，12.2µL双蒸水。PCR反应条件：先在95℃预变性2 min，94℃ 30 s，59℃ (rs1743967)1 min 30 s，53℃(rs743998)1 min 30 s，72℃1 min 30 s，40个循环后72℃延伸10 min。将PCR扩增产物使用美国应用生物系统公司3730XL测序仪测序。

1.3 统计学方法 所有数据输入SPSS16.0统计软件进行分析，数据用频数和构成比表示。Hardy-Weinberg平衡用于检测各基因型分布，χ2检验用于比较自然流产组与对照组基因型及等位基因频率，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 SGK1 rs1743967基因型及等位基因分布对照组基因型为GG+GT，而自然流产组以GG+GT为主，其次是TT，两组基因型比较差异有统计学意义(P＜0.05)。对照组等位基因G和T频率各占50.0%；自然流产组G占35.2%，T占64.8%，两组等位基因频率比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

表1 SGK1-rs1743967与自然流产的关系[例(%)]

2.2 SGK2 rs743998基因型及等位基因分布 对照组基因型以CT+TT为主，其次是CC，而自然流产组以CC为主，其次是CT+TT，两组基因型比较差异有统计学意义。对照组等位基因C和T频率各占50%。自然流产组C占83.6%，T占16.4%。两组等位基因频率比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

表2 SGK2-rs743998与自然流产的关系[例（%）]

3 讨 论

血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(Serum and glucocorticoid-regulated protein kinase，SGK)是一种新发现的丝/苏氨酸蛋白激酶，基因全长2.4 kb，在各种哺乳动物组织和细胞系中均有表达。它有SGKl、SGK2和SGK3三种异构酶，三种异构酶的结构同源性高达80%[4]。近年来研究表明，血清和糖皮质激素调节蛋白激酶可能是多种细胞信号转导通路和细胞磷酸化级联反应的一个功能性交汇点，可被多种应激因素诱导激活，在调节离子通道、细胞增殖、细胞存活和凋亡的信号转导中起重要的作用[5-6]。

本研究结果发现，SGK1 rs1743967对照组基因型为GG+GT，而自然流产组以GG+GT为主，其次是TT，两组基因型比较差异有统计学意义。进一步由OR值1.778可知，TT基因型是自然流产发生的危险因素。而等位基因也证实，当G突变为T时，增加了患者发生流产的风险，所以T等位基因是自然流产发生的危险因素。SGK2 rs743998对照组基因型和自然流产组基因型比较差异有统计学意义，进一步由OR值0.060可知，CT+TT基因型是保护性因素，当CT+TT转变成CC基因型越多，发生自然流产的风险越大。而等位基因T是保护性因素，当T突变为C，则增加自然流产的风险。

由于SGK1和SGK2的等位基因发生突变，考虑可能使上皮钠通道(ENaC)表达上调，并且使泛素连接酶(Nedd4-2)表达下调，从而引起一系列生理反应，导致自然流产的发生。Salker等[3]的研究也表明，SGK1能够防止子宫内膜间质成纤维细胞的氧化细胞死亡，所以蜕膜SGK1表达减少将导致流产。

综上所述，SGK1 rs1743967和SGK2 rs743998与自然流产存在着一定的关联，但具体的机制如何有待今后进一步的实验加以证实，以期为更好地研究自然流产的相关机制提供有利的借鉴依据。

[1]刘玉昆,刘颖琳,杜涛,等.早期妊娠自然流产患者的超声表现与绒毛染色体核型分析[J].中山大学学报(医学科学版),2013,34(1):94-98.

[2]谢幸,苟文丽.妇产科学[M].北京:人民卫生出版社,2013:49.

[3]Salker MS,MChristian,Steel JH,et al.Deregulation of the serum and glucocorticoid-inducible kinase SGK1 in the endometrium causes reproductive failure[J].NATURE MEDICINE,2011,17(11):1509-1513.

[4]孙婷婷,倪鑫.血清和糖皮质激素调节的蛋白激酶[J].生命的化学, 2007,27(2):133-135.

[5]包庆,赵勇,闰郡琴,等.分子开关蛋白激酶在不明原因复发性流产患者蜕膜组织中的表达[J].中国基层医药,2014,21(13):1947-1949.

[6]许海.血清和糖皮质激素调节蛋白激酶3在乳腺癌干细胞中的表达[J].中国组织工程研究,2013,17(40):7061-7067.

Association of SGK gene polymorphism with spontaneous abortion.

HE Shu-zhen,PU Yu-dong,CAO Jin-ru,ZHOU Li-xia,CHEN Shou-yun,ZHOU Yu-ling.Prenatal Diagnosis Center,the Third People's Hospital of Dongguan City, Dongguan 523326,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the association of serum and glucocorticoid-regulated protein kinases 1(SGK1) and SGK2 polymorphisms(rs1743967 for SGK1 and rs743998 for SGK2)with spontaneous abortion.MethodsSixty-four cases of spontaneous abortion,who enrolled into our hospital from January 2013 to December 2013,were selected as the spontaneous abortion group,and 40 cases of artificial abortion were selected as a control group for the same period. Polymorphisms of rs1743967 and rs743998 were determined through 3730XL sequencer.genotype and allele frequency distribution of the case group and the control group were compared with χ2test.Results①rs1743967 genotype of SGK1 in the control group were GG+GT,while rs1743967 genotype of SGK1 in the spontaneous abortion group were mainly GG+ GT,followed by TT.Control group and spontaneous abortion group had a statistically significant difference(P＜0.05).Allele frequency of G and T in the control group was equally 50.0%,while allele frequency of G and T in spontaneous abortion group were respectively 35.2%and 64.8%,and allele frequency distribution has a statistically significant difference between control group and spontaneous abortion group(P＜0.05).②rs743998 genotype of SGK2 in control group was mainly CT+ TT,followed by the CC,while spontaneous abortion group was mainly CC,followed by CT+TT,and genotype of the two groups have a statistically significant difference(P＜0.05).Allele frequency of C and T in control group was equally 50.0%, while allele frequency of C and T in spontaneous abortion group was respectively 83.6%and 16.4%.Allele frequency distribution of rs743998 had a statistically significant difference between control group and spontaneous abortion group(P＜0.05).ConclusionSGK1 and SGK2 polymorphisms(rs1743967 for SGK1 and rs743998 for SGK2)have the correlation with spontaneous abortion.However,the mechanisms have yet to be studied in detail.

Serum and glucocorticoid-regulated protein kinases(SGK);Spontaneous abortion;Gene polymorphism;Correlation

R714.21

A

1003—6350（2016）09—1393—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.09.006

2016-01-05)

广东省科技厅社会发展领域科技计划项目（编号：2012B032000015）

周玉玲。E-mail：zhouyuling88@163.com