MitoKATP与枳实薤白桂枝汤保护家兔心肌缺血再灌注损伤机制相关性研究※

苟玉东 徐 双 姜晓旭 孙世晓

(黑龙江中医药大学2015级硕士研究生，黑龙江 哈尔滨 150040)

实 验 研 究

MitoKATP与枳实薤白桂枝汤保护家兔心肌缺血再灌注损伤机制相关性研究※

苟玉东 徐 双1姜晓旭1孙世晓△

(黑龙江中医药大学2015级硕士研究生，黑龙江 哈尔滨 150040)

目的 目的通过实验研究观察线粒体ATP敏感性钾离子通道(MitoKATP)是否参与枳实薤白桂枝汤(ZSXBGZD)对家兔心肌缺血再灌注损伤(MIRI)保护性机制。方法 将40只大耳家兔随机分为5组，每组8只，即非缺血再灌注组(Sham组)、缺血再灌注组(MIRI组)、缺血再灌注+枳实薤白桂枝汤组(ZSXBGZD组)、缺血再灌注+枳实薤白桂枝汤+5-羟基癸酸盐组(5-HD组)、缺血再灌注+枳实薤白桂枝汤+格列本脲组(Gli组)，每组各8只。利用Langendorff体外法备MIRI模型，Sham组家兔完成全部操作，不进行停灌，持续灌流200 min；其余4组家兔离体心脏平衡灌流30 min后，进行停灌80 min；ZSXBGZD组于缺血前10 min给予含有枳实薤白桂枝汤提取液的locke液灌流10 min，然后缺血80 min，再灌注时仍给予含有枳实薤白桂枝汤提取液的locke液灌流120 min；5-HD组、Gli组过程同ZSXGZD组，在给予ZSXBGZD药物的基础上分别再加入5-HD、Gli。灌流结束后测定心肌组织乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量，分别记录停灌前10 min及再灌注后20、40、60、80、100、120 min各组家兔的冠脉流量，利用2，3，5-氯化三苯基四氮唑法(TTC法)测定心肌梗死面积。结果 MIRI组中家兔MDA、LDH、心肌梗死面积均明显高于Sham组，SOD、冠脉流量明显低于Sham组，比较差异均有统计学意义(P<0.05)；与MIRI组相比，ZSXBGZD组SOD、冠脉流量均明显增加，心肌梗死面积缩小，MDA、LDH降低，比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与MIRI组比较，5-HD组及Gli组SOD、MDA、LDH含量，冠脉流量及心肌梗死面积均无明显变化(P>0.05)，但与ZSXBGZD组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 ZSXBGZD能减轻家兔MIRI损伤，具有保护心肌作用，且此作用能被5-HD大部分抵消，能被Gli完全阻断，提示枳实薤白桂枝汤对家兔MIRI保护作用与MitoKATP显著性相关。

枳实薤白桂枝汤；KATP通道；再灌注损伤；动物实验；兔

心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI)历来是心血管疾病研究的焦点[1]。目前各种治疗手段如溶栓法、心脏介入、心脏移植等使缺血性心脏病的治疗取得了显著成效，但仍尚无有效措施根除心脏再灌注治疗过程中带来的负面影响，甚者会导致心肌组织损伤和细胞功能障碍进一步加重[2]。研究表明，枳实薤白桂枝汤(Zhishi Xiebai Guizhi Decoction，ZSXBGZD)能降低MIRI，减少心肌梗死面积，临床上治疗冠心病、心绞痛等效果显著[3-4]。同时，实验证实ATP敏感性钾离子通道(KATP)在保护心肌，抵抗MIRI过程中扮演重要角色[5]。早期，人们认为仅有一种存在于心肌细胞膜的通道，即细胞膜ATP敏感性钾离子通道(sarcKATP)，随后研究发现，在线粒体上也存在着另外一种通道，称之为线粒体ATP敏感性钾离子通道(MitoKATP)，且后者在抑制MIRI中起到比前者更为突出的作用[6]。因此，我们推测ZSXBGZD对家兔MIRI的作用机制可能与MitoKATP有很大关联。本实验通过GL-2离体心脏灌流系统，观察ZSXBGZD在家兔MIRI中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、冠脉流量及心肌梗死面积的改变，旨在探讨MitoKATP通道是否参与了家兔MIRI保护机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 清洁级成年大耳家兔40只，体质量约2.5 kg，雌雄不限，黑龙江中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK黑2008-004

1.1.2 药物与试剂

1.1.2.1 ZSXBGZD 采用水提醇沉制备枳实薤白桂枝汤提取液。参照《金匮要略》枳实薤白桂枝汤记载，药物组成：枳实12 g，厚朴12 g，薤白9 g，桂枝6 g，瓜蒌12 g。按以上比例称取药物，分开浸泡30 min，煎煮冷却，纱布过滤提取药液，加入无水乙醇，使含醇量达到75%，封闭冷藏放置24 h；然后用纱布过滤药液，用SHZ-Ⅱ水循环真空泵抽滤药液2次，再置于恒温水浴，挥发并浓缩药液成膏剂；然后加双蒸馏水200 mL配成药液，离心机3 500 r/min离心30 min，取上清液；再次置于恒温水浴，为了实验方便，浓缩药液至含生药51 g/100 mL，然后将药液置4 ℃冰箱贮存备用[7]。

1.1.2.2 locke液 根据《药理实验方法学》[8]配制locke液。1 000 mL蒸馏水中先加入试剂氯化钠(NaCl)9.0 g、氯化钾(KCl)0.42 g、碳酸氢钠(NaHCO3)0.2 g ，最后加入葡萄糖 1.0 g、氯化钙(CaCl2)0.24 g。在此过程中，需注意一种试剂完全溶解后才可加入其他试剂。配制完全后真空抽滤2次，pH调至7.35～7.45(充以5%CO2和95%O2混合气体)。本实验使用的locke液全部为新鲜配制，每次配制2 500 mL。

1.1.2.3 其他试剂 SOD、MDA、LDH试剂盒购自南京建成生物工程研究所。5-羟基癸酸盐(5-HD)、格列本脲(Gli)为SIGMA-ALDRICH公司产，0.4%2，3，5-氯化三苯基四氮唑溶液(TTC)染色液为Beijing Solarbio Science Technology Co, Ltd.公司产，蒸馏水由本实验室自行提取，其余均为国产分析纯。

1.1.3 实验设备 BL-420F生物机能实验系统、GL-2离体心脏灌流系统，均为成都泰盟科技有限公司生产；LDZ-1.2台式离心机为北京医用离心机公司生产；PHS-3C型实验室pH计为上海今迈仪器仪表有限公司产；SHZ-Ⅱ水循环真空泵长春科贸公司生产；722型光栅分光光度计为山东高密彩虹分析仪器有限公司生产。

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组 筛选心电图正常的家兔40只，随机分为5组，即非缺血再灌注组(Sham组)、缺血再灌注组(MIRI组)、缺血再灌注+枳实薤白桂枝汤组(ZSXBGZD组)、缺血再灌注+枳实薤白桂枝汤+5-HD组(5-HD组)、缺血再灌注+枳实薤白桂枝汤+GLi组(Gli组)，每组各8只。

1.2.2 给药剂量 ZSXBGZD：经计算每剂约煎取300 mL药液，内含51 g生药，人体每次服药约100 mL，内含生药约17 g。按体质量70 kg计算，人体正常每次服药剂量约为0.24 g/kg。参照实验动物用药剂量计算方法，家兔1次给药剂量为：17×0.07/1.5=0.79 g/kg，故家兔离体心脏灌注给药剂量为0.79 g/kg。5-HD 溶液：将其溶于双蒸馏水中，配成10 mmol/L母液，4 ℃保存，实验前用locke灌流液稀释至所需浓度100 μmol/L。Gli溶液：将Gli试剂溶于二甲基亚砜(DMSO，sigma)中，配成3 mmol/L母液，4 ℃保存，实验前用locke灌流液稀释至3 μmol/L。

1.2.3 模型制备及方法 ①所有家兔术前禁食12 h，20%氨基甲酸乙酯(5 mL/kg)耳缘静脉麻醉，另一耳缘静脉注射肝素钠(2 mL/kg)。麻醉生效后，仰卧位固定于专用解剖台，胸部备皮，开胸，迅速取出心脏，置于4 ℃locke液中，修剪周围残余组织，暴露主动脉，将主动脉套管插入其中，并无菌细线结扎，随后将之与GL-2离体心脏灌流系统连接。以氧饱和的locke液行常规恒压恒温逆向灌流，调节基础流量为20 mL/min，locke液温度37 ℃，灌流压力约为12 kPa。继之用眼科剪在左心耳开一小口，将自制球囊经左心房插入至左心室，并接BL-420F生物机能实验系统，保持球囊内压力在0.4～1.3 kPa范围内。左心室内压力通过压力换能器输入BL-420F生物机能实验系统完成信号自动采集。关闭灌流装置主动脉套管上方的开关，造成缺血；打开开关，形成再灌注。②Sham组家兔完成全部操作，不进行停灌，持续灌流200 min；其余4组家兔离体心脏平衡灌流30 min后，进行停灌80 min，以此造成家兔心脏全心缺血。此过程中同时通过GL-2离体心脏灌流系统对浸泡于37 ℃locke液中的心脏保持恒温。

1.2.4 给药方法 Sham组：持续灌流200 min，不进行任何药物干预。MIRI组：缺血80 min，再灌注时仍以氧饱和的locke液行常规恒压恒温逆向灌流120 min。ZSXBGZD组：于缺血前10 min给予含ZSXBGZD提取液的locke液灌流10 min，然后缺血80 min，再灌注时仍给予含有ZSXBGZD提取液的locke液灌流120 min；5-HD组、Gli组：过程同ZSXGZD组，在给予ZSXBGZD的基础上分别加入浓度为100 μmol/L的5-HD及3 μmol/L的Gli溶液。

1.2.5 检测指标及方法

1.2.5.1 SOD、LDH和MDA含量测定 灌流结束后，剪下各组家兔心脏缺血心肌组织约0.2 g，于4 ℃0.9%氯化钠注射液中除去血液，滤纸吸干后，放于小离心管经液氮速冻后保存在-80 ℃冰箱中。测定前取出组织，并按照0.9%氯化钠注射液的体积质量与组织块质量9∶1比例制备组织匀浆，离心机离心取适量上清液。利用硫代巴比妥酸法(TBA法)测定MDA含量，盐酸羟胺法测定SOD活性，酶联免疫吸附法(ELISA法)测定LDH含量。

1.2.5.2 冠脉流量测定 分别记录在停灌前10 min及再灌注后20、40、60、80、100、120 min各组家兔的冠脉流量。

1.2.5.3 心肌梗死面积测定 采用TTC法：再灌注结束后立刻将各组家兔心脏在液氮中进行物理固定，10 s后取出，置于小手术台，以垂直心脏纵轴方向切片，每片厚约2 mm，经0.9%氯化钠注射液冲洗，滤纸吸干后，放于4%TTC缓冲液中，37 ℃恒温水浴孵育15 min后，再用0.9%氯化钠注射液终止反应。坏死区被染成灰白色，非坏死区被染成红色，梗死面积为坏死区域面积与缺血区域面积之比。

2 结 果

2.1 5组家兔心肌组织SOD、MDA、LDH含量比较 见表1。

表1 5组家兔心肌组织SOD、MDA、LDH含量比较

组 别nSOD(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)LDH(U/gprot)Sham组88.64±1.47166.05±16.11280.73±17.86MIRI组86.06±1.24*295.12±20.14*408.81±20.13*ZSXBGZD组88.85±1.54△175.34±15.67△303.52±13.12△5-HD组85.92±1.43#243.15±17.86#383.19±12.31#Gli组85.36±1.12#257.17±12.13#526.21±18.74#

与Sham组比较，*P<0.05；与MIRI组比较，△P<0.05；与ZXBGZD组比较，#P<0.05

由表1可见，与Sham组相比，MIRI组心肌组织SOD含量降低，MDA、LDH含量升高，比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与MIRI组相比，ZSXBGZD组SOD含量升高，MDA、LDH含量下降(P<0.05)。5-HD组、Gli组与MIRI组相比，SOD、MDA、LDH均无明显变化(P>0.05)；与ZSXBGZD组相比，SOD含量低，MDA、LDH含量高(P<0.05)。

2.2 5组家兔心肌梗死面积比较 见表2，图1。

表2 5组家兔心肌梗死面积比较 ±s

与Sham组比较，*P<0.05；与MIRI组比较，△P<0.05；与ZSXBGZD组比较，#P<0.05

由表2、图1可见，与Sham组相比，MIRI组心肌梗死面积增大(P<0.05)；与MIRI组相比，ZSXBGZD组心肌面积显著减小(P<0.05)，5-HD组、Gli组无明显变化(P>0.05)；与ZSXBGZD组相比，5-HD组、Gli组心肌梗死面积增大(P<0.05)。

Sham组

MIRI组

ZSXBGZD组

5-HD组

Gli组

2.3 5组家兔MIRI过程中冠脉流量比较 见表3。

组 别n停灌前10min再灌注20min再灌注40min再灌注60min再灌注80min再灌注100min再灌注120minSham组815.12±0.1315.25±0.2416.42±0.3515.69±0.2115.58±0.3615.74±0.6316.04±0.22MIRI组814.25±0.5811.42±0.56*10.26±0.37*9.18±0.63*8.22±0.69*8.11±0.48*7.24±0.4*ZSXBGZD组815.49±0.4414.20±0.36△15.56±0.48△16.32±0.65△16.78±0.46△16.85±0.72△16.94±0.38△5-HD组814.61±0.7813.8±0.23#12.60±0.38#12.01±0.35#11.80±0.11#10.42±0.18#9.85±0.36#Gli组811.4±0.4610.8±0.13#9.21±0.46#8.8±0.64#8.6±0.21#8.12±0.27#7.9±0.14#

与Sham组比较,*P<0.05；与MIRI组比较，△P<0.05；与ZXBGZD组比较，#P<0.05

由表3可见，与Sham组比较，MIRI组缺血再灌注后20、40、60、80、100、120 min冠脉流量均显著减少(P<0.05)。与MIRI组相比，ZSXBGZD组缺血再灌注后20、40、60、80、100、120 min冠脉流量均增加(P<0.05)，而Gli组、5-HD组无明显变化(P>0.05)。与ZSXBGZD组比较，5-HD组、Cli组缺血灌注后20、40、60、80、100、120 min冠脉流量均减少(P<0.05)。

3 讨 论

目前实验研究中对于MIRI模型建立常采用Langendorff体外法、冠脉左前降支结扎法、ISO诱导法及垂体后叶诱导法[9]。本实验通过对家兔离体心肌梗死面积、病理生理性指标及冠脉流量的监测来探讨ZSXBGZD对心肌的保护性作用，故采用Langendorff体外法建立家兔离体心脏缺血再灌注模型。它是一种逆向灌流装置，即在主动脉瓣关闭时，灌注液通过主动脉根部的冠状动脉开口进行动脉的循环灌注，最后从冠状静脉窦进入右心房，与生理条件下灌流方向相反[10]，其稳定性高，重复性强，操作方便。在整个实验过程中，除了对晶体灌注液制备、实验环境温度、灌流模式选择、给药途径等多方面严格要求外，还需对心脏分离和插管这一过程重点掌握、熟练操作。整个过程需控制在操作30 s以内，避免长时间操作造成心肌缺血预适应[11]，这是在实验研究开展以来笔者认为最为重要的环节。同时，对于以MIRI模型为基础的实验研究多采用左前降支结扎法为主，通过Langendorff法研究ZSXBGZD对家兔MIRI保护作用与MitoKATP通道相关性机制尚不多见。

MIRI发病机制多与再灌注导致细胞内钙离子超载、氧自由基(OFR)大量迸发、微血管损伤及炎症反应等有关[12]。其中，OFR产生与MIRI关系紧密[13]，在心肌缺血发生时，脂质过氧化反应应激性增强，机体常以白细胞呼吸爆发等方式大量产生OFR，通过攻击细胞膜中的不饱和脂肪酸，造成脂膜局部破坏，脂质流动性降低，逐步分解成一系列脂质过氧化产物，如MDA等，从而使细胞膜的功能和结构改变，再灌注损伤加重[14]。MDA作为脂质过氧化产物，能间接反应心肌损伤的程度。SOD作为一种新型酶抑制剂和机体首要清除剂，能清除OFR，阻断脂质过氧化链式反应，其活性高低直接反映机体清除OFR的能力[15]。相关文献表明，SOD、MDA作为一对氧化反应指标，存在此消彼长关系，若SOD升高，则MDA降低[16]。LDH作为心肌损伤标志酶，通过对其在再灌注过程冠脉漏出液中活性测量，能直接反映心肌组织损伤情况[17]。本实验中，MIRI组中家兔MDA、LDH、心肌梗死面积均明显高于Sham组(P<0.05)，SOD、冠脉流量明显低于Sham组(P<0.05)，表明缺血再灌注加重细胞凋亡、心肌缺血及梗死程度。与MIRI相比，ZSXBGZD组SOD、冠脉流量均明显增加(P<0.05)，心肌梗死面积减少(P<0.05)，MDA、LDH值降低(P<0.05)，验证了ZSXBGZD具有保护心肌、防止MIRI的作用。

MitoKATP开放剂和阻滞剂的出现使对MIRI的研究更加具有了指向性与科学性，为抗心肌缺血药物研究提供了新靶点[18]。实验表明，MitoKATP除了通过减少钙离子超载、降低细胞凋亡等方式抵抗MIRI外，还与减轻OFR释放导致的损伤，保护线粒体呼吸链有关[14]。MIRI发生时产生的OFR会引起瀑布式的自由基连锁反应，使膜脂质流动性降低，通透性增高，从而导致线粒体肿胀，细胞代谢障碍和损伤加重[19]。姚慧等[20]通过分离细胞或线粒体模型，说明葛根素预处理具有抗缺氧及复氧损伤作用，并且该作用能被5-HD部分阻断。自1991年在大鼠肝细胞线粒体内膜发现KATP后,便将其分为质膜KATP(sarcKATP)和线粒体KATP(mitoKATP)，选择性MitoKATP阻滞剂5-HD能抵消特异性MitoKATP开放剂的保护作用，KATP阻滞剂Gli则会抵消以钾通道为基础的作用[21]。本实验中，与MIRI组比较，5-HD组及Gli组心肌组织SOD、MDA、LDH含量，冠脉流量及心肌梗死面积均无明显变化(P>0.05)，与ZSXBGZD组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。说明ZSXBGZD对家兔MIRI作用被大部分5-HD减缩，且被Gli完全阻断，表明ZSXBGZD对家兔MIRI保护作用与MitoKATP显著相关。国内外实验已表明，二氮嗪(diazoxide)、尼可地尔等作为MitoKATP通道特异性开放剂，对心脏的保护作用是显著的，且该保护作用均能被MitoKATP选择性抑制剂削弱[20]。因此，ZSXBGZD对离体家兔MIRI的保护作用可能是模拟了其开放剂药物对心脏保护机制，可能与维持适量线粒体体积、抑制再灌注过程中线粒体钙离子超载及改变细胞活性氧(ROS)生成有关。本实验研究在论证了ZSXBGZD对家兔MIRI具有保护作用基础上，仅对该作用与MitoKATP通道是否具有联系进行了初步探讨，但具体保护机制仍需更深层次的实验研究去探索及验证。

[1] Marchant DJ，Boyd JH，Lin DC，et al.Inflammation in Myocardial Diseases，Circ Res，2012，110(1)：126-144.

[2] 高翔，高全，李涛，等.葛根素预处理保护心肌缺血再灌注损伤的机制[J].贵阳医学院学报，2007，32(1)：37-41.

[3] 曹风华.枳实薤白桂枝汤预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用[D].长春：长春中医药大学，2014.

[4] 赵伟丽.枳实薤白桂枝汤提取液对家兔离体灌流心脏缺血再灌注影响的实验研究[D].哈尔滨：黑龙江中医药大学，2015.

[5] Oldenbrurg O，Cohen MV，Yellon DM，et al.Mitochondrial KATP channelsrole in cardioprotection[J].Cardiovasc Res，2002，55(3)：429-437.

[6] Garlid KD，Paucek P，Yarov-Yarovoy V，et al.Cardioprotective effect of diazoxide and its interaction with mitochondrial ATP-sensitive K+channels. Possible mechanism of cardioprotection[J].Circ Res，1997，81(6)：1072-1082.

[7] 赵楠.枳实薤白桂枝汤提取液对家兔离体灌流心脏缺氧影响的实验研究[D].哈尔滨：黑龙江中医药大学，2015.

[8] 徐淑云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2006：1834-1836.

[9] 吴广均，张云.Langendorff法、冠脉结扎法及ISO诱导心肌缺血模型的比较[J].现代中西结合杂志，2011，20(22)：2849-2851.

[10] Langendorff O.Untersuchungen am uberlebenden Sau-gethierherzen[J].Pflugers Arch，1895，61(3)：291-332.

[11] Neely JR，Liebermeister H，Battersby EJ，et al.Effect of pressure development on oxygen consumption by isolated rat heart[J]. Am J Physiol，1967，212(4)：804-814.

[12] Turer AT，Hill JA.Pathogenesis of myocardial ischemia-reperfusion injury and rationale for therapy[J].Am J Cardiol，2010，106(3)：360-368.

[13] 郭建，刘义，李延平，等.氧自由基与心肌缺血再灌注损伤[J].中国心血管杂志，2008，13(5)：384-387.

[14] 吴立玲.心血管病理生理学[M].北京：北京医科大学出版社，2000：13-42.

[15] 李明明，黄芳，韩林涛，等.瓜蒌薤白白酒汤对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国实验方剂学杂志，2013，19(16)：191-192.

[16] 周波，仲维娜，陈飞，等.瓜蒌薤白白酒汤对心肌缺血再灌注损伤SOD、MDA变化的新探讨[J].中医药学报，2009，37(6)：48-50.

[17] 姜翠翠,夏满莉,王敏，等.右美托咪定预处理减轻离体大鼠心脏缺血/再灌注损伤的线粒体相关机制[J].浙江大学学报，2013,42(3):326-330.

[18] Sato T,Sasaki N,Seharaseyon J，et al.Selective pharmacological agents implicate mitochondrial but not sarcolemmal K(ATP) channels in ischemic cardioprotection[J].Circulation,2000，101(20)：2418-2423.

[19] 张蓓,张红.线粒体ATP敏感性钾通道在心肌缺血保护中的作用[J].湖州师范学院学报，2007，29(2)：119-122.

[20] 姚慧,高琴,夏强，等.线粒体钾通道参与葛根素抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用[J].中国应用生理学杂志，2010,26(4):459-462.

[21] 王先宝,马春茂.三磷酸腺苷敏感的钾通道与心肌保护[J].国外医学：心血管疾病分册，2005,32(2):71-73.

(本文编辑：曹志娟)

The correlation study between Mito-KATPTO and Zhishi-xiebai-guizhi decoction in protecting rabbits with MIRI,

XUYudong*,XUShuang,JiangXiaoxu,etal.

*2015-GradeMasterofHeilongjiangUniversityofTraditionalChineseMedicine,Heilongjiang,Harbin150040

Objective To investigate the correlation between MitoKATP and the mechanism of Zhishi-xiebai-guizhi decoction (ZSXBGZD) in protection of myocardial ischemia reperfusion injury (MIRI) rabbits. Methods 40 rabbits were randomly divided into 5 groups, including the non-ischemic reperfusion group (Sham group), ischemia-reperfusion group (MIRI group), ischemia and reperfusion with ZSXBGZD group (MIRI+ZSXBGZD group), ischemia and reperfusion with ZSXBGZD +5-HD group (5-HD group), ischemia and reperfusion ZSXBGZD+Gli group (Gli group), 8 rabbits in each group. MIRI model was established by Langendorff isolated heart perfusion system. Rabbits in Sham group received overall operation, continuous perfusion 200 min without ischemia. Rabbits other four groups, after 30 min stabilization the injury was induced by 80 min ischemia. ZSXBGZD group received 10 min perfusion of locke's liquid with ZSXBGZD extracting solution 10 min before ischemia, ischemia for 80 min and 120 min reperfusion of locke's liquid with ZSXBGZD extracting solution. The 5-HD and Gli was added in 5-HD and Gli group on the basis of ZSXGAD group operation. After perfusion, the lactic dehydrogenase (LDH), malonaldehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) in cardiac muscle tissue were measure. The coronary flow rate was recorded at 10 min before ischemia, and 20 min, 40 min, 60 min, 80 min, 100 min, 120 min after reperfusion. The myocardial infarction area was measured by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride(TTC) method. Results The MDA, LDH and myocardial infarction area in MIRI group were obvious higher than Sham group, the SOD and coronary flow rate were obvious lower, with statistical differences (P<0.05). As compared with MIRI, the SOD and coronary flow rate in ZSXBGZD group were markedly increased, and the myocardial infarction area was decreased, the MAD and LDH were decreased, with statistical differences (P<0.05). As compared with MIRI group, there were no statistical differences on the SOD, MDA, LDH, coronary flow rate and myocardial infarction area in 5-HD and Gli group (P>0.05), but there were statistical differences with ZSXBGZD group (P<0.05). Conclusion ZSXBGZD can reduce injury of MIRI in rabbits, has protect effect of myocardium, which can be largely offset by 5-HD and can be completely blocked by Gli, showed that the protective effects of Zhishi-xiebai-guizhi decoction on MIRI rabbits were significantly associated with MitoKATP.

Zhishi-xiebai-guizhi decoction; KATP channels; Reperfusion injury; Animal experiment; Rabbits

10.3969/j.issn.1002-2619.2016.12.020

※ 项目来源：2015年黑龙江中医药大学研究生创新科研项目(编号：2015-017)

苟玉东(1991—)，男,硕士研究生在读。研究方向：针灸与脏腑关系的生理学研究；针药防治心脑血管疾病的实验研究。

R542.2;R285.5

A

1002-2619(2016)12-1836-06

2016-08-03)

△ 通讯作者：黑龙江中医药大学基础医学院生理学教研室，黑龙江 哈尔滨 150040

1 黑龙江中医药大学2014级硕士研究生，黑龙江 哈尔滨 150040