乳腺癌组织中免疫共刺激分子B7-H1与受体酪氨酸激酶EphA4蛋白的表达及意义

何苗 卢红明 范桂莲 孙宇 许凯

乳腺癌组织中免疫共刺激分子B7-H1与受体酪氨酸激酶EphA4蛋白的表达及意义

何苗 卢红明 范桂莲 孙宇 许凯

目的探讨乳腺癌组织中免疫共刺激分子B7-H1与受体酪氨酸激酶EphA4蛋白的表达及意义。方法82例病理诊断为乳腺癌患者,乳腺癌TNM分期Ⅰ期23例、Ⅱ期38例、 Ⅲ期15例、Ⅳ期6例,分析B7-H1、EphA4蛋白与乳腺癌TNM分期的相关性。以同期良性乳腺病变55例患者为对照,观察B7-H1、EphA4蛋白的阳性率。结果与乳腺良性病变患者相比,乳腺癌患者B7-H1阳性率高(P＜0.05)、EphA4蛋白阳性率低(P＜0.05)。Spearman分析发现B7-H1与TNM分期呈正相关(r=0.4682,P＜0.05),EphA4蛋白与TNM分期呈负相关(r=-0.3402,P＜0.05)。结论B7-H1促进肿瘤细胞免疫逃逸、EphA4蛋白抑制癌细胞活化增殖能力降低,均参与了乳腺癌病理发展,均可作为乳腺癌诊断和治疗的潜在靶点。

乳腺癌；病理；免疫共刺激分子B7-H1；受体酪氨酸激酶EphA4蛋白；分期

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,其发病机制尚不明确。程琳等［1］研究认为免疫系统参与的癌细胞的生长和发展。目前,靶向治疗和免疫治疗成为了乳腺癌患者继手术、放疗、化疗只有的全新的治疗模式［1］。探究乳腺癌癌变组织内的免疫物质,是靶向治疗与免疫治疗发展的基石。本院对乳腺癌患者进行免疫共刺激分子B7-H1与受体酪氨酸激酶EphA4蛋白免疫组化,并与良性乳腺病变患者比较,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年2月～2016年2月收治的病理诊断为乳腺癌82例患者,年龄25～83岁,平均年龄(48.8± 12.4)岁；82例乳腺癌患者按照乳腺癌TNM分期可分为Ⅰ级23例、Ⅱ级38例、Ⅲ级15例、Ⅳ级6例。同期良性乳腺病变55例患者,年龄27～79岁,平均年龄(45.9±11.6)岁。所有病理标本均为术中所得,术前均未进行放疗、化疗及内分泌治疗等辅助治疗方法。两类患者年龄比较差异无统计学意义(P＞0.05),具有可比性。

1.2 组织芯片制作 用10%中性福尔马林固定标本≤24 h,再行乙醇脱水、二甲苯透明30 min。常规石蜡包埋。于显微镜下选择6个具有代表性的区域,均分2份分别送B7-H1免疫组化和EphA4蛋白免疫组化。用组织打孔阵列仪打孔,钻取组织柱。最后将石蜡标本放入65℃温箱15 min,待石蜡标本为半融状态下取出,常温冷却后放置于冰箱中,温度设置为4℃。

1.3 B7-H1和EphA4蛋白的免疫组化 将组织芯片切成厚度为3 μm的切片,HE染色获得无遗漏点的样本。免疫组化采用SP法,B7-H1选用NOVUS公司生产的兔抗人B7-H1单克隆抗体(1∶50配比)。EphA4蛋白选用试剂盒按说明执行SP法。

1.4 判定标准 每个组织芯片在400倍显微镜下选择代表性视野5个,每个视野含肿瘤细胞100个。按照染色程度评分：0分为基本不染色,1分为淡黄色,2分为棕黄色,3分为棕褐色。0分为阴性结果,1～3分为阳性结果。

1.5 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件进行统计分析。计量资料以(±s)表示,采用t检验；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验；相关性采用Spearman分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

82例乳腺癌患者组织切片结果显示,B7-H1阳性率51.22%(42/82),EphA4蛋 白 阳 性 率58.54%(48/82)。55例乳腺良性病变患者组织切片结果显示,B7-H1阳性率21.82%(12/55),EphA4蛋白阳性率89.09%(49/55)。与乳腺良性病变患者相比,乳腺癌患者B7-H1阳性率高(χ2=11.9168,P=0.0006＜0.05)、EphA4蛋 白 阳 性 率 低 (χ2=14.8666,P=0.0001＜0.05)。82例乳腺癌患者不同TNM分期B7-H1、EphA4蛋白评分见表1。Spearman分析发现B7-H1与TNM分期呈正相关(r=0.4682,P=0.0001＜0.05),EphA4蛋白与TNM分期呈负相关(r=-0.3402,P=0.0018＜0.05)。

表1 82例乳腺癌患者TNM分期的B7-H1、EphA4蛋白评分分布(n)

3 讨论

B7-H1可通过调节E-钙粘蛋白和上调转录因子Slug和Twist从而发挥抗炎作用,即在炎症反应中B7-H1发挥抑制免疫作用。T细胞受体与抗原肽的第一信号以及共刺激分子的第二信号所构成的双信号系统引发的T细胞的活化在肿瘤免疫中发挥重要作用［2］。而在肿瘤细胞表面和肿瘤微环境中B7-H1作为负性共刺激分子,可通过与T细胞表面的PD-1受体结合［3］,抑制抗原特异性T细胞活化、生长、成熟及分泌细胞因子等过程,降低T细胞介导的肿瘤细胞免疫应答作用［4］,从而使得肿瘤细胞免于免疫细胞的损害。本研究结果显示B7-H1与TNM分期呈正相关(r=0.4682,P＜0.05),结果与洪荫等［3］研究报道相似。受体酪氨酸激酶因参与神经细胞间信号传递及轴突发育而逐渐被人发现,Eph受体是近几年发现的酪氨酸蛋白激酶受体,与Ephrin配体共同组成受体酪氨酸激酶系统［5］。酪氨酸激酶受体为RET基因及Eph基因编码,参与甲状腺癌、乳腺癌和肺癌的发生、发展及局部淋巴结的转移［6］。已被证实的EphA2表达水平与乳腺癌组织学分化程度、TNM分期和淋巴结转移明显相关［7］。EphA4蛋白可促进神经损伤时轴突的修复,在肺腺癌中低水平表达,提示其可能具有抑癌作用。孙岳军等［8］研究发现EphA4蛋白丢失与乳腺癌分级、分期及Ki-67表达呈正相关,与本研究结果中EphA4蛋白表达水平与TNM分期呈负相关(r=-0.3402,P＜0.05)结果一致。

综上所述,B7-H1促进肿瘤细胞免疫逃逸、EphA4蛋白抑制癌细胞活化增殖能力降低,均参与了乳腺癌病理发展,均可作为乳腺癌诊断和治疗的潜在靶点。

［1］程琳,彭媛,王殊.乳腺癌的生物治疗进展.中华乳腺病杂志(电子版),2013,7(3):7-14.

［2］李晓凤,巴彩霞,袁海清,等.结直肠癌中B7-H1表达的意义.中国临床保健杂志,2013,16(6):647-649.

［3］洪荫,涂健,朱旬,等.免疫共刺激分子B7-H1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.临床与实验病理学杂志,2015,31(11): 1232-1235.

［4］郑云燕,陈陆俊,徐斌,等.皮肤恶性肿瘤组织中B7-H1的表达及临床意义.临床肿瘤学杂志,2014,19(3):221-225.

［5］常志泳,赵建宁,包倪荣.Eph-ephrin双向信号功能的研究进展.中国病理生理杂志,2013,29(3):560-564,570.

［6］孙冀,苗素生,裴荣.RET基因在肿瘤中的研究现状和展望.实用肿瘤学杂志,2015,29(5):467-470.

［7］白山,高雅慧,李双齐,等.Eph受体酪氨酸激酶A2和SIAH2在乳腺癌中的表达及其临床意义.中华实验外科杂志,2014,31(9):2015-2016.

［8］孙岳军,徐洁,陆敏,等.受体酪氨酸激酶EphA4蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.临床与实验病理学杂志,2015,31(11):1236-1238,1242.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.12.011

2016-04-01］

163311 黑龙江省大庆油田总医院病理科