T-SPOT.TB在肺外结核诊断应用价值

任彦微，宋其生，陈宇飞

（大连市结核病医院，大连 116033）

T-SPOT.TB在肺外结核诊断应用价值

任彦微，宋其生，陈宇飞

（大连市结核病医院，大连 116033）

目的：探讨T-SPOT.TB（结核感染T细胞酶联免疫斑点试验）在肺外结核诊断应用价值。方法：收集在我院就诊肺外结核患者84例作为研究对象，同时选取非结核病患者20例作为对照，比较不同患者中T-SPOT. TB检测阳性率和ESAT-6和CFP-10的SCF数量的差异；比较T-SPOT.TB、TB-Ab和ESR检查诊断肺外结核的效能比较。结果：肺外结核T-SPOT.TB检测阳性率（85.71%）明显高于非结核疾病组（10.0%），且差异具有统计学意义。肺外结核组ESAT-6和CFP-10的SCF数量分别为39（0-180）和27（0-125）显著高于非结核疾病组的SCF数量为6（0-35）和5（0-27），且差异具有统计学意义。T-SPOT.TB诊断肺外结核的灵敏度85.71%、特异度90.0%、准确率86.54%；TB-Ab诊断肺外结核的灵敏度67.86%、特异度70.0%、准确率68.27%；ESR诊断肺外结核的灵敏度54.76%、特异度60.0%、准确率55.77%；T-SPOT.TB诊断肺外结核的诊断效能优于TB-Ab和ESR。结论：T-SPOT. TB在肺外结核中的阳性率高于非结核患者，T-SPOT.TB诊断肺外结核有较好的灵敏度和特异度。

结核感染T细胞酶联免疫斑点试验；肺外结核；诊断价值

肺外结核是指发生在肺部以外器官的结核病，多继发于肺内初次感染肺结核后经淋巴及血型途径至肺外脏器或其他部位［1］。由于肺外结核病的发病部位不同，其临床表现多不典型，且由于人类免疫缺陷病毒（HIV）感染的流行，肺外结核以及其他播散性结核病患者的发病率明显增多［2］。由于结核分枝杆菌的检出率较低，且诊断较为困难，因此肺外结合的误诊、漏诊率较高［3］。结核感染T细胞酶联免疫斑点试验（T-cell SPOT test technology，T-SPOT.TB）作为近年来兴起的细胞免疫功能检测技术，具有灵敏度高、特异性好的优点，逐渐成为结核病诊断及研究的热点［4］。为此，本研究针对（结核感染T细胞酶联免疫斑点试验）在肺外结核诊断应用价值进行探讨。现将研究结果总结报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料收集在我院就诊肺外结核患者84例作为研究对象，年龄在19～78岁；平均年龄（47.64± 15.42）岁，男性51例，女性33例；病例入选标准：（1）根据患者的临床表现，细菌学，影像学和组织病理学确诊为肺外结核；（2）所有患者均接受了T-SPOT.TB、TBAb和ESR检查，结果保存完整；（3）本研究符和医学伦理，与所有患者签订了知情同意书。病例排除标准：（1）HIV检测阳性的患者；（2）合并有肿瘤、矽肺等疾病的患者；（3）妊娠期妇女与于排除。同时选取无结核病史、临床和影像学检查无陈旧性结核疾灶的非结核病患者20例作为对照，年龄在16～73岁；平均年龄（45.85 ±12.17）岁，男性51例，女性33例；两组患者的一般资料无统计学差异（P＞0.05）。

1.2 临床资料84例肺外结核患者中结核性胸膜炎30例，结核性脑膜炎18例，结核性淋巴结炎24例，结核性腹膜炎4例，骨关节结核3例，泌尿生殖系统结核3例，肠道结核2例。20例非结核病患者中，恶性胸腔积液7例，病毒性脑炎4例，支气管扩张6例，肺部慢性炎症3例。

1.3 样本采集方法抽取实验组和对照组患者的空腹肘静脉血8ml，加入含枸橼酸钠的CPT管内置于3000r/ min的离心机中离心28min，并将单个细胞层从CPT管中转移到无菌尖底离心管中。加入10mLAIM-V的培养液进行培养后进行离心，去上清液，加入1mlAIM-V 后使细胞沉淀，取培养液10mL，置于离心机中离心7分钟，去上清。加入0.7mL AIM-V培养液重旋细胞，稀释后进行计数，并调整细胞悬液的浓度至2.5×106/ml。

1.4 T-SPOT.TB、TB-Ab和ESR检测方法将肝素钠抗凝血进行密度梯度离心，并将外周血单个核细胞（PBMCs）进行洗涤。将洗涤的PBMCs与结核特异性抗原一同加入至预包被抗r-干扰素抗体培养孔中，并于37℃的二氧化碳中孵育16～20小时。洗涤后加入标记二抗后孵育1小时，洗涤后加入显色液，加入蒸馏水终止反应。显色后1个斑点相当于1个效应T细胞。抗原A或抗原B检测孔的斑点数-阴性孔斑点数≥6为阴性。TB-Ab的检测胶体金法，其操作严格按照TBAb试剂盒（江苏晶美生物科技有限公司生产）。ESR的检测采用魏氏法，并使用血沉仪进行检测。

1.5 统计学方法分析数据用SPSS16.0软件进行，检测阳性率、诊断效能指标用百分率（%）表示，组间比较用卡方检验；ESAT-6和CFP-10的SCF数量用中位数和四分位间距表示，组间比较用秩和检验；P＜0.05表示具有统计学差异。

2 结果

2.1 肺外结核病与非结核病T-SPOT.TB检测结果比较 肺外结核T-SPOT.TB检测总的阳性率为85.71%，其中结核性胸膜炎90.0%，结核性脑膜炎77.78%，结核性淋巴结炎87.50%，其它肺外结核83.33%；非结核疾病组T-SPOT.TB检测阳性率为10.0%；肺外结核T-SPOT.TB检测阳性率明显高于非结核疾病组，且差异具有统计学意义（P＜0.001）。见表1。

表1 肺外结核病与非结核病T-SPOT.TB检测结果比较

2.2 肺外结核病与非结核病ESAT-6和CFP-10的SCF数量比较肺外结核组ESAT-6和CFP-10的SCF数量分别为39（0-180）和27（0-125）显著高于非结核疾病组的SCF数量为6（0-35）和5（0-27），且差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 肺外结核病与非结核病ESAT-6和CFP-10的SCF数量比较

2.3 T-SPOT.TB、TB-Ab和ESR三种检测方法的诊断效能比较T-SPOT.TB诊断肺外结核的灵敏度85.71%、特异度90.0%、阳性预测值97.30%，阴性预测值60.0%，准确率86.54%；TB-Ab诊断肺外结核的灵敏度67.86%、特异度70.0%、阳性预测值90.48%，阴性预测值34.15%，准确率68.27%；ESR诊断肺外结核的灵敏度54.76%、特异度60.0%、阳性预测值85.19%，阴性预测值24.0%，准确率55.77%；三种检测方法的灵敏度、阳性预测值、阴性预测值、准确率的差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 T-SPOT.TB、TB-Ab和ESR三种检测方法的诊断效能比较（%）

3 讨论

肺外结核是一种多系统、多种类、多部位的结核性，本研究收治的84例肺外结核病例主要存在于结核性胸膜炎，结核性脑膜炎，结核性淋巴结炎，结核性腹膜炎，骨关节结核，泌尿生殖系统结核及肠道结核为主。由于人类免疫缺陷病毒（HIV）感染的流行，肺外结核以及其他播散性结核病患者的发病率明显增多。由于肺外结核所在的位置不同，其临床表现存在差异及复杂性，其诊断需要根据医者的临床经验、辅助检查以及治疗效果进行综合分析，因此肺外结合的诊断具有一定困难［5］。目前应用于肺外结核的诊断主要依赖于病理组织学及影像学等手段，螺旋CT及磁共振技术虽然在骨关节及中枢神经系统等肺外结核的诊断中应用较为广泛，但费用较高，增加了患者的经济负担［6-7］。病理活检以及外科手段是确诊结核的重要方式，但创伤较大，因此在适应症及操作技术上有较高的要求［8］。

结核感染T细胞酶联免疫斑点试验（T-cell SPOT test technology，T-SPOT.TB）作为近年来兴起的细胞免疫功能检测技术，根据感染结核分枝杆菌的机体内存在结核特异性极易T淋巴细胞，当再次遇到结核特异性抗原刺激时，可转化为效应T细胞，进而释放干扰素-γ，ESAT-6以及CEP-10［9-10］。ESAT-6及CEP-10是结核分枝杆菌复合群基因RD1区域编码的结核特异性蛋白抗原，可使MTB感染的T细胞诱导出较强的干扰素-γ［11］。T-SPOT.TB即是根据上述原理设计出的具有灵敏度高、特异性好的检测结核抗原特异性T淋巴细胞技术，是目前TIGRA诊断结核感染的主要方式［12］。Vanessa［13］等研究显示，T-SPOT.TB在免疫力低下患者中具有较高的诊断效能，且在肺外结核的诊断中具有较高的敏感性。本研究结果显示，肺外结核T-SPOT.TB检测阳性率明显高于非结核疾病组，且差异具有统计学意义。上述研究结果显示，感染结核患者体内的结核感染效应T细胞明显高于非结核感染患者，因此，T-SPOT.TB在诊断是否有结核分枝杆菌的诊断中具有较强的特异性［14］。另外，肺外结核组ESAT-6和CFP-10的SCF数量显著高于非结核疾病组的SCF数量，且差异具有统计学意义。分析其原因，与ESAT-6及CEP-10作为结核特异性蛋白抗原，可使MTB感染的T细胞诱导出较强的干扰素-γ有关。本研究结果显示，T-SPOT.TB诊断肺外结核的灵敏度85.71%、特异度90.0%、准确率86.54%；与国内文献报道基本一致［15］。另外，T-SPOT.TB的检查结果与患者是否排菌、排菌量的多少以及排菌的类型无关，因此减少了结核的漏诊率，因此可作为结核病早期诊断的有效辅助方法。TB-Ab诊断肺外结核的灵敏度67.86%、特异度70.0%、准确率68.27%；ESR诊断肺外结核的灵敏度54.76%、特异度60.0%、准确率55.77%；T-SPOT.TB诊断肺外结核的诊断效能优于TB-Ab和ESR。上述研究结果显示，TB-Ab以及ESR的检测的检测对于结核并的诊断敏感性及特异性虽然较低，但在今后的临床工作中可将三者结合，进而为结核病的诊断提供重要的支持。

综上所述，T-SPOT.TB在肺外结核中的阳性率高于非结核患者，T-SPOT.TB诊断肺外结核有较好的灵敏度和特异度，在肺外结核的诊断及鉴别诊断中具有重要的临床应用价值，可为临床医生节省诊断时间及一些不必要的检查项目，进而更加合理的运用医疗资源，减少患者的负担，以更好的防治结核病。

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Application value of T-SPOT. TB in extrapulmonary tuberculosis diagnosis

Ren Yan-wei, Song Qi-sheng, Chen Yu-fei

(Dalian Tuberculosis Hospital, Dalian 116000, China)

ObjectiveTo evaluate the application value of T-SPOT. TB in extrapulmonary tuberculosis diagnosis.Methods84 cases of extrapulmonary tuberculosis patients was collected in our hospital as the research object, 20 cases of the nontuberculosis patients was selected as control at the same time, To compare the differences among patients with the positive detection rate of T-SPOT. TB and the number of ESAT-6 and CFP-10；ResultsExtrapulmonary tuberculosis of T-SPOT. TB positive detection rate (85.71%) was significantly higher than that in the non-tuberculosis disease group (10.0%), and the difference is statistically significant. The number of SCF in ESAT-6 and CFP-10 of extrapulmonary tuberculosis group [39 (0-180) and 27(0-125)] was significantly higher than the non-tuberculous disease group [6(0-35) and 5 (0-27)], and the difference is statistically significant. The sensitivity of T-SPOT. TB diagnostic extrapulmonary tuberculosis was 85.71%, the specificity was 90%, the accuracy was 86.54%； The sensitivity of TB-Ab diagnostic extrapulmonary tuberculosis was 67.86%, the specificity was 70%, the accuracy was 68.27%； The sensitivity of ESR diagnostic extrapulmonary tuberculosis was 54.76%, the specificity was 60%, the accuracy was 55.77%； The diagnostic efficacy of T-SPOT. TB for extrapulmonary tuberculosis was better than that of TB-Ab and ESR.ConclusionThe positive rate of T-SPOT. TB in extrapulmonary tuberculosis is higher than that of non-tuberculosis patients, T-SPOT. TB diagnosis of pulmonary tuberculosis has good sensitivity and specificity.

T-SPOT. TB； Extrapulmonary tuberculosis； Diagnosis value

R52

A

1673-016X（2016）06-0114-04

2016-07-05

任彦微，E-mail：1139771895@qq.com