混合抗球蛋白反应试验与宫腔内人工授精妊娠率关系的研究

史鸿志，李丽玮，殷秀荣，董丽霞，李伟伟，刘佳佳，宋琪

(秦皇岛市妇幼保健院生殖医学科，秦皇岛　066000)



混合抗球蛋白反应试验与宫腔内人工授精妊娠率关系的研究

史鸿志*，李丽玮，殷秀荣，董丽霞，李伟伟，刘佳佳，宋琪

(秦皇岛市妇幼保健院生殖医学科，秦皇岛066000)

【摘要】目的探讨精子混合抗球蛋白反应(MAR)检测在宫腔内人工授精(IUI)治疗中的意义。方法在进行IUI治疗之前常规进行MAR检测，根据MAR检测结果分为两组，<10%组和10%～50%组。比较两组间的精子浓度、前向运动精子数、精子正常形态率、临床妊娠率等方面有无显著性差异。结果两组间精子浓度、前向运动精子数、精子正常形态率、临床妊娠率等比较均无显著性差异(P>0.05)。结论当精子MAR检测结果<50%时，患者采用IUI治疗是有效的，MAR检测结果并不影响IUI治疗的有效性。

【关键词】混合抗球蛋白反应试验；抗精子抗体；人工授精

目前，精子膜表面抗体对辅助生殖技术的影响还存在争议，本文以宫腔内人工授精(IUI)技术为切入点，分析在进行IUI治疗中混合抗球蛋白反应(MAR)检测结果与周期妊娠率的关系，探讨MAR检测在IUI治疗中的预测价值。

一、资料与方法

1. 研究对象及分组：选择2013年3月至2014年12月期间在我院生殖医学科接受IUI治疗的不孕症患者195例，IUI适应症严格遵守辅助生殖技术规范的要求，在治疗前常规进行MAR检测，根据MAR的检测结果进行分组。本研究经医院伦理委员会审查批准，所有患者均知情同意。

2. 研究方法：(1)IUI前的准备：阴道超声检查卵泡直径达到18～20 mm，或监测到尿LH值>45 U/L时，肌肉注射绒毛膜促性腺激素(HCG，珠海丽珠)5 000～10 000 U。男方禁欲2～7 d，手淫法采集精液至无菌取精杯中，置于热板上待其液化。精液处理采用密度梯度离心法，具体方法为在15 ml锥形离心管的底部加入1 ml 80%浓度梯度液(Quinn’s，美国)，上层缓缓加入1 ml 40%浓度梯度液，再将液化的精液缓缓加在最上层，以100 r/min离心20 min；弃上层液体，将沉淀物吸入含3 ml精子冲洗培养基(Quinn’s，美国)的离心管中混匀，再次以400 r/min离心5 min；弃上清液，加入新鲜培养液至0.5 ml，将沉淀混匀制成精子悬液，将此混悬液用于人工授精。(2)妊娠诊断：术后2周查血β-HCG水平，4周后经阴道B超检查显示宫内孕囊者，确定为临床妊娠。(3)MAR检测及分组：按照MAR试剂盒(深圳华康)的检测步骤进行，并按照世界卫生组织(WHO)男科实验室手册(第5版)标准进行质量控制，以确保检验结果的准确性及可重复性。先用微量移液器加5 μl致敏微球于载玻片上，然后加5 μl液化后的精液标本，用吸头充分混匀，再加入5 μl抗体，用吸头充分混匀，盖上盖玻片，3 min后观察。当精液中无抗精子抗体存在时，精子可自由游动，而致敏微球凝聚成团，说明试剂本身是可靠的；当精液中存在抗精子抗体时，致敏微球会成团附着在精子表面，计数200条以上活动精子，记录附着致敏微球的活动精子百分率，尾尖结合的不记录。

根据MAR检测结果将IUI周期分成2个组：<10%组和10%～50%组。分别比较两组间男方精子浓度、活力、形态，以及周期妊娠率的差异。由于MAR>50%的患者较少，而且MAR>50%的患者都经过了临床治疗，故没有直接进入周期，所以暂时缺少这方面的数据。

3. 统计学分析：采用SPSS 13.0统计学软件对资料进行分析，计量资料组间比较采用t检验，率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

二、结果

1. 两组患者一般情况比较：本研究中，MAR<10%组女方平均年龄(29.5±3.5)岁，不育年限(3.9±2.7)年；MAR 10%～50%组女方平均年龄(30.3±3.2)岁，不育年限(4.1±2.8)年，组间比较无显著性差异(P>0.05)。

2. 两组男性精液参数比较：MAR<10%和10%～50%两组男方的精子浓度、前向运动精子率、正常形态百分率比较，无显著性差异(P>0.05)(表1)。

表1　两组间男方精液参数的比较 (x-±s)

3. 两组患者周期妊娠率的比较：共317个周期，获得妊娠45个周期，周期妊娠率14.2%。MAR<10%组266个周期，妊娠38个周期，周期妊娠率14.3%；MAR 10%～50%组51个周期，妊娠7个周期，周期妊娠率13.7%，组间妊娠率比较无显著性差异(P>0.05)(表2)。

表2　两组间周期妊娠率的比较 (n，%)

三、讨论

抗精子抗体(AsAb)是免疫性不育的重要病因之一，其可存在于人类血液及生殖系统中，通常是由于各种机制导致血-睾屏障破坏，使得精子免疫性抗原暴露于免疫系统中，最终诱发免疫反应而产生[1]。AsAb可能通过直接阻碍精子运动和精-卵结合，甚至可能干扰胚胎着床过程，最终对生育造成不良影响[2]。WHO人类精液检查与处理实验室手册(第5版)推荐了两种检测精子包被抗体的方法，分别为混合抗球蛋白反应(MAR)试验和直接免疫珠(IB)试验，其中IB法采用洗涤过的精子进行试验，需要耗费更多的时间，而MAR试验则采用新鲜精液标本，是一项廉价、快速且敏感的筛查试验[3]，因此被广泛开展。

目前，关于精子膜表面抗体对辅助生殖技术影响的研究较少，并且结论也并不一致，如van Weert等[4]研究表明，精液AsAb阳性(临界值20%)对体外受精受精率及妊娠情况均产生负面影响。而Vujisic等[5]的研究显示精子膜表面抗体凝集>20%和<20%的分组比较，受精率分别为73.2% vs. 71.5%，妊娠率为28.9% vs. 28.57%，组间比较无显著性差异，提示膜表面抗体可能并不影响精卵的结合。Zini等[6]也报道，精液AsAb阳性组(MAR>50%)与阴性组间的IVF受精率、临床妊娠率比较均无显著性差异。

本研究结果显示虽然MAR检测结果不同，但两组间的精子浓度、前向运动精子百分率、精子正常形态率、临床妊娠率等比较均无显著性差异，与孙源等[7]的研究结果相似。虽然有学者发现随着MAR检测结果的升高，精子的活动率、前向运动和精子正常形态率都会随之下降[8]，但本研究发现两组间精子参数比较没有显著性差异，这可能是由于行IUI治疗的男性群体多为轻、中度少和(或)弱精子症患者，与普通人群的分布不同所致。精子经过优选处理后[9-10]，精子参数之间的差异可能被进一步缩小；此外，梯度离心的过程中去除了大部分粘着精子头部的抗体复合物[11]，可能都是两组间妊娠率没有显著性差异的主要原因。

综上所述，本研究表明，MAR<10%和10%～50%两组行IUI治疗时周期妊娠率比较没有显著性差异，提示当MAR<50%时，患者采用IUI治疗是有效的，但是，由于缺乏MAR>50%的数据资料，MAR>50%对周期妊娠率是否存在影响还不好做出判断。

【参考文献】

[1]曾晓聆，王兴娟.抗精子免疫性不孕的研究进展 [J].生殖与避孕，2010，30：571-575.

[2]欧建平，庄广伦.抗精子抗体对辅助生育的影响 [J].中华男科学杂志，2003，9：214-217.

[3]谷翊群，陈振文，卢文红，等(译).世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册[M].第5版.北京：人民卫生出版社，2011：91-94.

[4]van Weert JM，Repping S，van der Steeg JW，et al. A prediction model for ongoing pregnancy after in vitro fertilization in couples with male subfertility [J]. Reprod Med，2008，53：250-256.

[5]Vujisic S，LepejSZ，JerkovicL，et al. Anti-sperm antibodies in semen，sera and follicular fluids of infertile patients：relation to reproductive outcome after in vitro fertilition [J]. Am J Reprod immunol，2005，54：13-20.

[6]Zini A，Lefebvre J，Kornitzer G，et al. Anti-sperm antibody levels are not related to feitilization or pregnancy rates after IVF or IVF/ICSI [J]. Am J Reprod Immunol，2011，88：80-84.

[7]孙源，刘见桥，杜红姿，等.混合抗球蛋白反应试验与体外受精-胚胎移植治疗关系的研究 [J].生殖与避孕，2012，32：171-174.

[8]黄婷婷，周志健，王维，等.精子抗体对精液参数的影响 [J].现代医院，2010，2：37-38.

[9]曾勇，宋成，张微.人类精液收集与处理技术改进 [J].生殖医学杂志，2011，20：104-107.

[10]李志凌，谢文燕.辅助生殖技术中的精液优选处理 [J].生殖医学杂志，2007，16：209-212.

[11]胡京美，颜军昊，李媛，等.混匀上游法人工授精治疗抗精子抗体阳性不孕症患者的效果 [J].重庆医学，2005，34：1523-1524.

[编辑：侯丽]

·临床实践·

【作者简介】史鸿志，男，河北秦皇岛人，硕士，主管检验师，主要从事辅助生殖实验室技术.(*通讯作者)

【收稿日期】2015-07-20；【修回日期】2015-09-24

DOI：10.3969/j.issn.1004-3845.2016.2.013