RP-HPLC法测定男宝胶囊中金丝桃苷的含量

刘文苹，张振凌，吴小菲

(1.亳州市食品药品检验所中药室，安徽 亳州　236800；

2.河南中医药大学药学院，河南 郑州　450008；

3.亳州中药科技学校药学部 安徽 亳州　236800)



RP-HPLC法测定男宝胶囊中金丝桃苷的含量

刘文苹1，张振凌2，吴小菲3

(1.亳州市食品药品检验所中药室，安徽 亳州236800；

2.河南中医药大学药学院，河南 郑州450008；

3.亳州中药科技学校药学部 安徽 亳州236800)

摘要：目的建立用高效液相色谱法测定男宝胶囊中金丝桃苷含量的方法。方法采用C18反相色谱柱，流动相为乙腈-0.085%磷酸(17∶83)，检测波长为360 nm，流速为1.0 mL·min-1，进样量为10 μL。结果金丝桃苷在2.15～21.5 mg·L-1范围内线性良好，回归方程Y=9 203X-2 501.5,r=0.999 2(n=6)。平均回收率为97.9%，RSD为1.0 %(n=7)。结论该法简捷，准确，重现性好，稳定性高，可用于男宝胶囊中测定金丝桃苷的含量测定。

关键词：男宝胶囊；菟丝子；金丝桃苷；高效液相色谱法；含量测定

中药男宝胶囊是由鹿茸、肉桂、淫羊藿、海马、枸杞子、菟丝子、牡丹皮、狗肾、驴肾、人参、当归等31味药组成的中药成方制剂，功效补肾壮阳，用于肾阳不足引起的阳痿滑泄、性欲淡漠、肾囊湿冷、腰腿酸痛、食欲不振、精神萎靡等症。治疗效果显著，且副作用小，使用方便，深得消费者的认可，需求量较大。市场有62 家医药企业生产男宝胶囊。中药男宝胶囊标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第十九册[1]中，标准中除性状及胶囊剂的常规检查外，仅有当归的薄层色谱鉴别,没有对君药及贵重药材做出定性和定量的鉴别和检查，不能较好的控制质量。 本研究参考相关文献资料考察了不同处理方法及不同流动相，建立了高效液相色谱测定金丝桃苷含量的方法[2-4]。实验结果表明本方法简便可行，重现性好，可用于男宝胶囊的质量控制。

1仪器、试剂与试药

1.1仪器美国Waters 高效液相色谱仪,Waters e2695自动进样器，Waters e2695柱温箱，Waters 2489检测器；大连依利特ODS色谱柱2.5 μm(4.6 mm×250 mm)；上海吉理超声仪器有限公司生产超声清洗器(型号：JL360DT)；沈阳龙腾电子称量责任有限公司生产万分之一分析天平(型号：ES-180J)；瑞士梅特勒-托利多生产十万分之一分析天平(AB135-S)。

1.2试剂与试药金丝桃苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111521-201004)；甲醇(国药集团化学试剂有限公司，色谱纯，批号：20130906)；乙腈(国药集团化学试剂有限公司，色谱纯，批号：20130808)；醋酸(国药集团化学试剂有限公司，分析纯、批号：T20130916)；磷酸(天津市富宇精细化工有限公司，分析纯，批号：130761)；重蒸水(哇哈哈纯净水，杭州娃哈哈集团有限公司，批号：1118BL)； 男宝胶囊:由亳州市食品药品检验所提供，吉林济邦药业有限公司生产， 批号：20130402、20130309和20140106。

2实验方法

2.1检测波长的选择精密量取对照品溶液10 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，过滤后，用紫外可见分光光度计，在200～700 nm波长范围内扫描，结果显示，金丝桃苷在360 nm波长处有最大吸收峰，故将360 nm作为测定波长[5]。

2.2色谱条件Hypersil ODS 2.5 μm(4.6 mm×250 mm)C18柱；乙腈-0.085 %磷酸(17∶83)为流动相；检测器波长为360 nm；柱温25℃；流速1.0 mL·min-1。本实验理论板数约为10 000，因为金丝桃苷与附近色谱峰分离度大于1.5，且参考药典中菟丝子的含量测定，故将理论板数定为5 000。

2.3对照品溶液的制备精密称取金丝桃苷对照品10.75 mg,置250 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.4供试品溶液的制备取本品10粒，除去囊壳，研细，取约1 g,精密称定，分别置具塞锥形瓶和圆底烧瓶中，分别精密加入甲醇溶液50 mL，称定质量，密塞，超声处理提取和水浴回流提取各1 h[6-7],放冷，再称定质量，补重，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。比较峰面积积分值，确定超声处理1 h的提取方法。

2.5阴性对照溶液的制备制成缺菟丝子的阴性对照样品，按照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。

按上述色谱条件测定，精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，分别进入高效液相色谱仪中。供试品色谱中，在与对照品主峰相应的保留时间范围内，有一相同的色谱峰，定为金丝桃苷峰，且与其他组分峰可达到基线分离，分离度大于1.5，而在此保留时间阴性对照溶液无干扰。见图1。

A对照品溶液B供试品溶液C阴性对照溶液

图1金丝桃苷HPLC色谱谱

2.6线性关系考察依次精密量取对照品溶液0.5、1、2、3、4、5 mL,分别置于10 mL量瓶中，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件，分别精密吸取10 μL进样，以对照品进样量为X(mg·L-1)，峰面积为Y，做线性回归。得线性回归方程为：Y=19 203X-2 501.5,r=0.999 2(n=6)。结果表明，金丝桃苷对照品进样量在2.15～21.5 mg·L-1范围内与峰面积积分值线性关系良好。

2.7精密度实验精密吸取“2.3”项下的对照品溶液，按以上色谱条件，重复进样5次，测定峰面积，结果RSD=0.6 %(n=5)。

2.8重现性实验称取同一批号(批号：20130402)样品6份，按“2.4”项下的方法制备，测定峰面积并计算金丝桃苷，结果金丝桃苷的平均含量为263.2 μg·g-1，RSD=1.2 %(n=6)。

2.9稳定性实验取同一样品溶液，按以上色谱条件，在0、2、4、6、8、10 、12 h分别进样，测定峰面积，共测7次，结果峰面积RSD值为0.5%，显示供试品溶液至少在12 h内稳定。

2.10回收率实验精密称取已知含量的样品7份，每份0.5 g，分别精密加入适量对照品,同“2.4”项下的制备方法制备，按照上述色谱条件进行测定，测得峰面积并计算含量，结果显示平均回收率为97.9%，RSD=1.0%(n=7)。见表1。

表1　回收率试验结果

2.11样品测定按正文方法测定3批样品，按2.4项下的方法制备，测定峰面积并计算含量，结果稳定。见表2。

表2　样品含量测定结果(μg/粒)

3讨论

金丝桃苷可溶于乙醇、丙酮、甲醇等溶剂，丙酮毒性较强暂且舍去，采用甲醇与乙醇超声1 h进行比较，结果表明甲醇超声提取效果较好；再考察回流提取与超声提取的效果，结果表明，样品用甲醇超声提取1 h效果较好，金丝桃苷比较能提取完全，且方法简便，以乙腈-0.1 %磷酸(17∶83)、乙腈-0.085 %磷酸(17∶83)、乙腈-0.2 %冰醋酸(15∶85)、乙腈-1 %冰醋酸(14∶86)进行流动相色谱考察；其中以乙腈-0.2 %冰醋酸(15∶85)、乙腈-1 %冰醋酸(14∶86)为流动相检测出的色谱峰分离度较差；以乙腈-0.1 %磷酸(17∶83)为流动相检测出色谱峰峰面积较低，不利于计算；乙腈-0.085 %磷酸(17∶83)为流动相，配合25℃柱温，金丝桃苷色谱峰与其他组分达到了较好的基线分离，故选定乙腈-0.085 %磷酸(17∶83)为最佳的流动相。

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.01.016

通信作者：张振凌，女，教授，硕士生导师，研究方向：中药饮片及新药研究，E-mail:627428305@qq.com