四种常用渔药对雅罗鱼杂交幼鱼的急性毒性

张立民，苏宝锋，常玉梅，孙博，闫浩，梁利群

（中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，黑龙江 哈尔滨 150070）

四种常用渔药对雅罗鱼杂交幼鱼的急性毒性

张立民，苏宝锋，常玉梅，孙博，闫浩，梁利群

（中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，黑龙江 哈尔滨 150070）

在水温25℃下，采用常温静水生物测试法研究硫酸铜及硫酸亚铁合剂、敌百虫、复合季铵碘和阿维菌素对平均体质量（1.47±0.2）g的雅罗鱼杂交（瓦氏雅罗鱼Leuciscus waleckii Dybowski×高体雅罗鱼Leuciscus idus）幼鱼的急性毒性。结果表明：敌百虫、硫酸铜及亚铁合剂、阿维菌素和复合季胺碘的24h、48h和96h半致死浓度（LC50）分别为1.3863mg·L-1、0.8194mg·L-1和0.3564mg·L-1；38.7298mg·L-1、26.509mg·L-1和26.509mg· L-1；3.30mg·L-1、2.40mg·L-1和2.30mg·L-1；16.10mg·L-1、16.10mg·L-1和16.10mg·L-1；安全浓度分别为0.0859mg· L-1、3.7257mg·L-1、0.4mg·L-1和4.80mg·L-1。这4种药物对雅罗鱼幼鱼的毒性由强至弱依次为：敌百虫＞阿维菌素＞硫酸铜及硫酸亚铁合剂＞复合季铵碘。

渔药；急性毒性；安全浓度；致死浓度；幼鱼；雅罗鱼

雅罗鱼肉质细嫩，味道鲜美，经济价值高,是北方地区的淡水名贵鱼类，为三花五罗之一，深受市场欢迎。瓦氏雅罗鱼Leuciscus waleckii Dybowski，亦称东北雅罗鱼，俗名华子鱼、滑鱼、白鱼，隶属鲤形目Cypriniformes，鲤科Cyprinidae，雅罗鱼亚科Leuciscinae的雅罗鱼属Leuciscus，主要分布于黑龙江流域各个水系,黄河下游、滦河、岱海、内蒙古达里湖等亦产此鱼。目前有关瓦氏雅罗鱼的耐盐碱特性[1]、

盐碱池塘养殖[2]、生理生化[3,4]、群体遗传[5,6]、转录组学[7-9]、氨基酸代谢组学[10]等进行了一些研究，然而关于病害防治方面的研究较少。雅罗鱼属的高体雅罗鱼Leuciscus idus（又名圆腹雅罗鱼、中白条）分布于欧洲北部和俄罗斯西伯利亚的河流中，中国仅见于新疆额尔齐斯河水系，已被列入新疆二级保护鱼类[11,12]。目前，对高体雅罗鱼的研究还只停留在种群亲缘关系[13,14]、人工繁殖和繁育[15]及生长模型[16]等方面。池塘养殖生产证实：高体雅罗鱼和瓦氏雅罗鱼正反交杂交品种（雅龙鱼）比亲本更有生长优势，深受广大养殖渔户的喜爱（待发表）。

虽然目前雅罗鱼池塘养殖的病害较少，但在苗种培育过程中常因池塘环境而发生一些病害，如细菌性烂鳃病、赤皮病，车轮虫、指环虫、锚头藻等寄生虫病等。雅罗鱼比其他鱼类如鲤和鲫等对某些药物更为敏感，且病害防治研究较少。本文通过研究水产养殖中常用的几种药物对雅罗鱼杂交幼鱼的急性毒性，旨在为雅罗鱼疾病防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

试验鱼取自中国水产科学研究院黑龙江水产研究所呼兰试验站，平均体长（4.58±0.3）cm，平均体质量（1.47±0.2）g，体质健壮、外观健康。试验前试验鱼在水族箱中暂养15d，正常投喂、换水，无死亡现象即开始试验。试验开始前停食24 h。

试验用渔药成分及含量见表1。

试验前先将试验药物配制成母液，再按比例稀释成所需浓度，药液现配现用。母液浓度如下：硫酸铜与硫酸亚铁母液为2 000mg·L-1，复合季胺碘母液为500mg·L-1，敌百虫母液为3 000mg·L-1，阿维菌素母液为200 mg·L-1。

1.2 方法

试验水抽取自呼兰试验站地下水，曝气一周，水温25℃左右，pH（7.8±0.1），溶解氧为（8.0±0.5）mg·L-1。试验在体积为7L（29cm×8cm×20cm）的PVC水槽中进行，试验水体5L。试验前先对每种药物进行预试验，每个水槽放入10尾鱼，确定24h鱼的致死浓度下限值和96h无死亡的浓度上限值，根据预试验结果确定出各试验药物浓度区间。按等对数间距设置6个浓度组和1个空白对照组，配制试验药液，开展毒性评估试验。

采用静水试验法[17]，每个水槽随机放入10尾鱼，每个药物浓度梯度设2个试验组，一个空白对照组。水温控制在25℃左右，停食，每24h更换1/2试验液，不增氧，试验时间为96h。试验中观察、记录试验鱼的行为变化、中毒症状，记录死亡时间。用玻璃棒触碰无任何反应即为死亡。

1.3 数据统计

采用寇氏法（Karder）[18,19]计算试验鱼对各渔药的半数致死质量浓度（LC50）：

LogLC50=Xm-d（∑p-0.5）

式中：Xm为死亡组最大剂量的对数，d为相邻两组浓度对数差，p为各组的死亡率，∑p为各组死亡率的总和。

表1 四种试验渔药的成分、含量和厂家Tab.1 The content,concentration and manufacturers of the four aquaculture drugs used in the experiment

2 结果与分析

试验开始后，各种渔药的低浓度组雅罗鱼活动与对照组类似，游动正常，而高浓度组雅罗鱼在水体中上层或沿着水槽壁不停地快速游动，呼吸加快。一段时间后，低浓度组试验鱼活动情况变化不大，而高浓度组雅罗鱼活动开始减弱，游动变慢；随着时间延长，不同药物中高浓度组试验鱼开始死亡，对照组无死亡现象。

2.1 雅罗鱼在4种渔药急性毒性试验中的死亡率

四种药物对雅罗鱼幼鱼的累计死亡率如表2所示。随着试验浓度的增加以及时间的延长，4种渔药对雅罗鱼的急性毒性效应明显增强，死亡率明显上升。各种药物最低浓度组在24h、48h、96h的死亡率均为0，最高浓度组在24h死亡率为100%。

复合季胺碘组：浓度达500mg·L-1，雅罗鱼进入药液几分钟就急速游动、翻滚、上下乱窜、极度不安、鳃丝出血，而后慢慢安静下来，陆续死亡；浓度为60mg·L-1时，20min内开始死亡，1h后全部死亡；浓度为33mg·L-1时，1h后开始死亡，24h可100%死亡；浓度为18.1mg·L-1时，2.5h后开始死亡，24h内达到死亡高峰，死亡率为60%；而浓度为3.0 mg·L-1和5.5mg·L-1时，96h无死亡现象。

表2 雅罗鱼杂交幼鱼在4种渔药急性毒性试验中的死亡率Tab.2 The cumulative mortality of hybrid dace juveniles exposed to the four aquaculture drugs during the test

硫酸铜及硫酸亚铁合剂：浓度为150mg·L-1时，2.5h开始出现死亡，24h死亡率 100%;浓度为87.27mg·L-1时，6.5h开始出现死亡，24h死亡率100%；浓度为50.78mg·L-1时，6.5h开始出现死亡，24h死亡率75%，48h死亡率为100%；浓度为29.54mg·L-1时，18h后开始出现死亡，24h死亡率25%，96h死亡率60%；浓度为17.19mg·L-1时，43h开始死亡，96h死亡率为10%；浓度为10mg·L-1时，96h内无死亡现象。

阿维菌素组：雅罗鱼进入药液后，高浓度组反应剧烈，在水中狂游；2.5h后，有个别鱼开始在水槽底翻白，呼吸微弱；6h后，6mg·L-1浓度组全部死亡；24h内，3.3mg·L-1浓度组有50%死亡，48h全部死亡；1.8mg·L-1浓度组前48h无死亡，96h死亡率仅为10%；0.3～1.0mg·L-1浓度组96h内无死亡。

敌百虫组：8.0mg·L-1浓度组幼鱼入药液后1h，呼吸急促，个别鱼腹部向上，或在池中乱窜，2.5h后全部死亡；3.33mg·L-1浓度组，2.5h死亡率为30%，而17h死亡率为100%；当浓度为1.386mg·L-1时，17h开始死亡，24h内死亡率为50%，48h内死亡率为100%；浓度为0.577mg·L-1时，24h内无死亡现象，48h累积死亡率从10%达到96h的80%。中毒鱼死亡前身体侧弯。

2.2 四种渔药的半致死浓度和安全质量浓度

4种渔药对雅罗鱼幼鱼的半致死浓度和安全浓度见表3。如表3所示，除季胺碘外，其他渔药对雅罗鱼幼鱼的LC50随时间的延长而减小，表明这3种渔药的毒性随时间的延长而增加。根据安全质量浓度可知，这4种渔药对雅罗鱼杂交幼鱼的毒性由强至弱依次为：敌百虫＞阿维菌素＞硫酸铜及硫酸亚铁合剂＞复合季铵碘。

表3 4种渔药对雅罗鱼杂交幼鱼的半致死浓度和安全浓度（mg·L-1）Tab.3 LC50and safe concentrations of the four drugs in hybrid dace juveniles

3 讨论

根据化学物对鱼类毒性等级评价标准，按96h LC50将药物划分为剧毒 （＜0.1mg·L-1）、高毒（0.1～1mg·L-1）、中毒（1～10.0mg·L-1）和低毒（＞10.0mg· L-1）4个等级[21]。据此标准，敌百虫对雅罗鱼杂交幼鱼为高毒药物，阿维菌素为中毒药物，复合季胺碘和硫酸铜及硫酸亚铁合剂为低毒药物。

敌百虫为有机磷类杀虫剂，通过抑制虫体的胆碱酯酶活性，使其失去水解已酰胆碱能力而在虫体内积聚，继而导致神经肌肉传导功能异常，出现痉挛，麻癖，直至死亡。本试验中敌百虫对雅罗鱼杂交幼鱼的安全浓度为0.0859mg·L-1,低于正常使用量0.45mg·L-1；浓度为0.24mg·L-1时，96h就可死亡，而浓度为0.577mg·L-1时，前48h内基本无死亡现象，而48～96h内死亡率达70%～80%，死鱼体侧弯，说明敌百虫的后续毒性较强，在幼鱼阶段需谨慎使用，必要时应尽量避免使用。

混特杀的主要成分为阿维菌素，是一种抗生素类杀虫剂，属昆虫神经毒剂，主要干扰害虫神经生理活动，刺激释放r-氨基丁酸，作用于神经与肌肉接触点，增加氯离子的释放，抑制神经接触点的信息传递，使害虫麻癖中毒死亡。阿维菌素主要用于治疗雅罗鱼锚头蚤、车轮虫、指环虫等寄生虫病。阿维菌素对草鱼[22]、河鲈幼鱼[23]和虹鳟幼鱼[20]的安全浓度分别为0.010mg·L-1、0.114μg·L-1和0.679μg· L-1。本试验中阿维菌素的安全浓度为0.40mg·L-1,生产中的使用量为0.05mg·L-1，结合在本实验中毒性测试，当药液浓度为1.80mg·L-1，远远高于生产中常用浓度的36倍，96h仅仅出现10%的死亡率，说明雅罗鱼杂交幼鱼对阿维菌素毒性不敏感，正常使用比较安全。

硫酸铜及硫酸亚铁合剂属重金属盐类杀虫剂，游离的Cu2+可与蛋白质结合形成络合物，使蛋白质变性、沉淀，破坏氧化还原酶系统的活性而使寄生虫体内酶失去活性，起到杀死寄生虫的效果，尤其对原生动物，比如指环虫、纤毛虫和一些低等藻具有较强杀伤力。硫酸亚铁具有收敛作用，起辅助杀虫作用，主要用于杀灭雅罗鱼的车轮虫，斜管虫等。本试验中，雅罗鱼对硫酸铜及硫酸亚铁合剂的安全浓度为 3.7257mg·L-1,高于 正常使用 浓 度0.6～0.7mg·L-1；当使用浓度为10mg·L-1，为正常使用浓度的14.2～20.0倍，幼鱼没有出现死亡现象，因此正常使用对雅罗鱼幼鱼安全。

复合季胺碘，属消毒防腐剂，用于治疗各种水产动物的细菌、病毒、衣原体等引起的疾病，如对雅罗鱼的细菌性烂鳃、赤皮病、竖鳞病等有较好疗效。本试验中复合季胺碘的安全浓度为4.80mg·L-1,高于生产上的正常使用量0.30mg·L-1。本试验中，该药液浓度在9.90mg·L-1时，才使雅罗鱼在96h内有10%的死亡率，而在5.50mg·L-1时，高于生产中常用浓度的18.3倍时，96h无死亡现象，说明在生产正常使用时较安全。

综上所述，在雅罗鱼苗种培育阶段，不同药物对幼鱼的毒性不同；复合季胺碘，硫酸铜硫酸亚铁合剂和阿维菌素可以安全使用，敌百虫应慎用。在养殖生产中，还应考虑水温、pH、水中悬浮物和水溶氧量等因素的影响，应先进行预试验，以达到预防中毒并能够有效治疗的目的。

［1］安晓萍,孟和平,杜昭宏,等.达里湖东北雅罗鱼的生长、死亡和生活史类型的研究［J］.淡水渔业,2008,38（6）:3-7.

［2］贾丽，张凤琴，孙彩霞,等.盐碱池塘养殖达里湖瓦氏雅罗鱼试验初报［J］.华北农学报,2006,21（专辑）:76-78.

［3］张建明,张玉,刘海涛.达里诺尔湖和岗更湖瓦氏雅罗鱼同工酶的研究［J］.水生态学杂志,2010,3（6）:79-86.

［4］安晓萍,齐景伟,罗旭光,等.不同水体中瓦氏雅罗鱼的氨氮排泄率以及血液和组织中氨氮含量研究［J］.现代农业科技,2014（4）:244-245,247.

［5］池炳杰,常玉梅,闫学春,等.瓦氏雅罗鱼达里湖群体和乌苏里江群体的遗传多样性和遗传结构分析［J］.中国水产科学,2010,17（2）:228-235.

［6］Chang Y M,Tang R,Sun X W,et al.Genetic analysis of population differentiation and adaptation in Leuciscus waleckii［J］.Genetica,2013,141（10）:417-429.

［7］Xu J,Li Q,Xu L M,et al.Gene expression changes leading extremealkalinetoleranceinAmuride（Leuciscus waleckii）inhabitingsoda lake［J］.BMCGenomics,2013,14:682.

［8］Xu J,Ji P F,Wang B S,et al.Transcriptome sequencing and analysis ofwild Amuride（Leuciscus waleckii）inhabiting an extreme alkaline-saline lake reveals insights into stress adaptation［J］.PLoSONE,2013,8（4）:e59703.

［9］Chang Y M,Tang R,Dou X J,et al.Transcriptome and expression profiling analysis of Leuciscus waleckii:an exploration of the alkali-adapted mechanisms of a freshwater teleost［J］.Mol Biosyst,2014,10:491-504.

［10］常玉梅,何强,孙言春,等.碳酸盐碱度胁迫下瓦氏雅罗鱼血浆游离氨基酸水平的变化［J］.中国水产科学, 2016,23（1）:117-124.

［11］任慕莲,郭焱,张人铭,等.中国额尔齐斯河鱼类资源及渔业［M］.乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社,2002．

［12］范喜顺,全仁哲.新疆赛里木湖高体雅罗鱼生物学研究［J］.兵团教育学院学报,2008,18（4）:51-52.

［13］胡文革,段子渊,王金富,等.新疆3种雅罗鱼线粒体DNA控制区序列的差异和系统进化关系［J］.遗传学报,2004（9）:970-975.

［14］窦新杰,常玉梅,唐然,等.几种雅罗鱼亚科鱼类基于mtDNA序列的亲缘关系［J］.江苏农业学报,2014（4）: 826-832.

［15］高攀,韩小丽,胡建勇,等.高体雅罗鱼大规格鱼种培育试验［J］.黑龙江水产,2015（4）:37-38．

［16］霍堂斌,马波,唐富江,等.新疆3种雅罗鱼生长模型的比较研究［J］.水产学杂志,2008（2）:8-14.

［17］陈万光,刘飞,凡秀丽,等.4种渔药对高体鳑鮍幼鱼的急性毒性［J］.江苏农业科学,2012,40（1）:203-205.

［18］GB15193.3-2003急性毒性试验国家标准［S］.中华人民共和国农业部,2003.

［19］SC/T1087.1-2006鱼药毒性试验方法第1部分外用鱼药急性毒性试验［S］.中华人民共和国农业部,2006.

［20］汤施展,陈中祥,白淑艳,等.5种水产药物对虹鳟幼鱼的急性毒性［J］.水产学杂志,2015,28（6）:33-37.

［21］孟紫强.生态毒理学原理与方法［M］.北京:科学出版社,2006:149-155．

［22］李常健,骆鹰,杨锦兀,等.阿维菌素毒死蜱对草鱼的毒性效应研究［J］.安徽农业科学,2011（6）:3365-3367.

［23］宋洋,秦莉,张斐，等.三种常用渔药对河鲈幼鱼急性毒性试验［J］.新疆农业科学,2014（11）:2127-2131.

Acute Toxicity of Four Aquaculture Drugs on Hybrid Dace（Leuciscus waleckii Dybowski× Leuciscus idus）Juveniles

ZHANG Li-min,SU Bao-feng,CHANG Yu-mei,SUN Bo,YAN Hao,LIANG Li-qun
（Heilongjiang River Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Harbin 150070,China）

The acute toxicity of four aquaculture drugs,including cupric sulfate and ferrous sulfate powder，purified trichlorphon powder,ammonium iodine，and avermectin to hybrid dace（Leuciscus waleckii Dybowski×Leuciscus idus）juveniles were studied under water temperature of 25℃,pH of 7.8,and dissolved oxygen level（DO）of 8.0 mg·L-1by a hydrostatic test method.The median-lethal concentration（LC50）values at 24 h,48 h,and 96 h were found to be 1.3863 mg·L-1,0.8194 mg·L-1and 0.3564 mg·L-1in purified trichlorphon powder；38.7298 mg·L-1,26.509 mg·L-1and 26.509 mg·L-1in cupric sulfate and ferrous sulfate powder;3.30 mg·L-1,2.40 mg·L-1and 2.30 mg·L-1in avermectin；and 16.10 mg·L-1,16.10 mg·L-1and 16.10 mg·L-1in ammonium iodine,with safe concentrations of 0.0859 mg·L-1,3.7257 mg·L-1,0.4 mg·L-1and 4.80 mg·L-1,respectively.The order of toxicity of the four aquaculture drugs to the dace hybrid juveniles was expressed as follows：purified trichlorphon powder＞avermectin＞cupric sulfate and ferrous sulfate powder＞ammonium iodine．

aquaculture drug；acute toxicity；safe concentration；lethal concentration;juvenile；Leuciscus sp.

S948

A

1005-3832（2016）06-0047-05

2016-08-08

国家自然科学基金项目（31461163004）；黑龙江省攻关项目（GC12B307）.

张立民（1965-），男，助理研究员，从事水产养殖与育种研究.E-mail:zhanglimin@hrri.ac.cn

梁利群（1963-），女，研究员，从事水产动物基因工程育种研究.E-mail:liangliqun@hrfri.ac.cn