川芎水提物体外抗氧化活性的研究

张晶晶，杨占峰

（郑州工业应用技术学院 医学系，河南 郑州 451150）

川芎水提物体外抗氧化活性的研究

张晶晶，杨占峰

（郑州工业应用技术学院 医学系，河南 郑州 451150）

通过测定川芎水提物对·OH、和DPPH三种自由基的清除作用，评价其抗氧化性能。采用索氏提取器提取川芎水提物，以抗坏血酸为对照，采用分光光度法测定其清除率。川芎水提物对三种自由基有不同程度的清除能力，对三种自由基的清除效果依此为DPPH＞＞·OH。川芎水提物在体外具有较明显的抗氧化活性，在实验浓度范围内，其抗氧化效果与浓度呈显著的线性相关。

川芎；川芎水提物；抗氧化；自由基

自由基是机体内氧化反应产生的副产物，可损害机体的组织和细胞，进而引起慢性疾病及衰老效应。一般来说，机体内的抗氧化系统可维持自身的自由基平衡，可一旦受到一些不可抗的外界因素如机体病变﹑辐射等影响，就会打破这种平衡，造成机体的损伤与疾病的发生。因此清除体内自由基，改善细胞周围环境，防止内皮细胞损伤，能够有效地预防和治疗血管性疾病。合成抗氧化剂BHA﹑BHT等的不安全性，使其应用受到很大的限制，故从动植物资源中寻找高效无毒的天然抗氧化物质为食品及医药行业的研究重点[1]。

川芎为伞形科藁本属植物，川芎的干燥根茎在我国有悠久的药用历史，也是著名的川产地道药材，主要含挥发油﹑生物碱﹑酚类及有机酸﹑苯酞内酯等成分[2]，具有活血行气﹑祛风止痛等功效。目前对川芎的研究多集中在镇静、镇痛、对心血管系统的作用以及抗肿瘤、抗菌、抗放射等方面[3]，而对川芎清除自由基﹑抗氧化的研究比较少。

本文以体外抗氧化体系为模型，研究川芎水提物的抗氧化活性，与抗坏血酸对比，研究其有效成分对羟基自由基、超氧阴离子、DPPH的清除能力。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

川芎（河南龙都药业有限公司）；邻苯三酚﹑三羟甲基胺基甲烷（Tris）（上海国药集团化学试剂有限公司）；水杨酸（天津市大茂化学试剂厂）；硫酸亚铁﹑H2O2（天津市德思化学试剂有限公司）；DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）（美国Sigma公司）；抗坏血酸（天津市科密欧化学试剂开发中心）。

TU-1201紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；索氏提取器（上海比朗仪器有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 川芎有效成分的提取

精确称取5 g川芎，用研钵将川芎捣成粉末，装入滤纸筒中，量取蒸馏水150 mL，从提取筒中倒入烧瓶，安装好索氏提取装置，加热回流4 h，得提取液150 mL。再次用100 mL蒸馏水进行二次索氏提取，两次提取液合并浓缩后真空冷冻干燥得提取物1.275 8 g。

1.2.2 DPPH自由基能力清除率的测定

精确称取1,1-二苯基-2-三硝基苯肼0.007 8 g，用甲醇溶液定容至100 mL，配制成0.2 mmol·L-1DPPH溶液，取2.0 mL此溶液与2.0 mL不同浓度的川芎水提物在暗室中反应30 min，以抗坏血酸作对照组，517 nm下测其吸光度值。每个浓度重复3次，计算各组吸光度的平均值[4-5]。清除率计算公式：

清除率= 1-[(Ai- Aj)/A0]×100%

式中：A0为加入甲醇和DPPH各2.0 mL的吸光度值；Ai为加入2.0 mL DPPH和2.0 mL不同浓度川芎水提物测得的吸光度值；Aj为加入2.0 mL甲醇和2.0 mL不同浓度川芎水提物测得的吸光度值。

1.2.3 羟基自由基活性清除率的测定

依据氧化还原反应原理，混合H2O2与Fe2+产生·OH，在反应池中加入适量的水杨酸附着·OH致使生成有色物质，紫外分光光度计510 nm下有最大吸收。反应池中含1 mL的水杨酸-乙醇溶液（9 mmol·L-1），1 mL的FeSO4（9 mmol·L-1），1 mL的H2O2（8.8 mmol·L-1）和1 mL的川芎水提物（1，2，3，4，5，8，10，20，30，40 mg·mL-1），并以蒸馏水为参照。操作过程中，最后加入H2O2，温度保持37℃持续30 min，对照组选用抗坏血酸。各浓度组重复做3次，计算各组吸光度的平均值[6-7]。清除率计算公式：

式中：A0为不加入川芎水提物，加入H2O2、水杨酸、FeSO4的吸光度值；AX为加入水杨酸、FeSO4、川芎水提物、H2O2的吸光度值；AX0为不加入H2O2，加入FeSO4、水杨酸、川芎水提物的吸光度值。

1.2.4 超氧阴离子（·O2－）清除率的测定

采用邻苯三酚自氧化法。取4.5 mL的Tris-HCL缓冲液（0.05 mol·L-1pH 8.2）于试管中，放入25℃水浴中保温10 min，加入不同浓度的川芎水提物1.0 mL，混匀后加入0.4 mL 6 m mol·L-1的邻苯三酚，反应4 min，加入8 mol·L-1的HCL溶液1.0 mL终止反应。以抗坏血酸作为对照组，320 nm下测其吸光度值。每个浓度重复3次，取其吸光度的平均值[8]。清除率计算公式：

式中：A0为水代替川芎水提物时测得的吸光度值；Ai为川芎水提物不同浓度下测得的吸光度值；Aj为水代替邻苯三酚时川芎水提物不同浓度下测得的吸光度值。

2 结果与讨论

2.1 川芎水提物对·OH的清除作用

图1为川芎水提物和抗坏血酸对羟基自由基的清除作用。

图1 川芎水提物对·OH的清除效果

由图1可见，随着川芎水提物浓度的增大，清除效果得到进一步的提高，在40 mg·mL-1浓度下对羟基自由基的清除率达到84.85%，在低浓度1 mg·mL-1时仍有9.25%的清除作用。与抗坏血酸相比，在浓度相同时，川芎水提物的清除率远低于抗坏血酸。

2.2 川芎水提物对·O2－的清除作用

图2为川芎水提物和抗坏血酸对超氧阴离子的清除作用。

图2 川芎水提物对·O2－的清除效果

由图2可见，在浓度为1.0 mg·mL-1时，川芎水提物对清除率只有3.56%；随着浓度的增大，其清除率逐渐增大，在20 mg·mL-1下，清除率可达到93.45%，在30 mg·mL-1下，清除率可达到99.59%。与抗坏血酸相比，川芎水提物对的清除能力低于抗坏血酸。抗坏血酸在1 mg·mL-1下时已达到99.85%。

2.3 川芎水提物对DPPH自由基的清除作用

图3为川芎水提物和抗坏血酸对DPPH自由基的清除作用。

图3 川芎水提物对DPPH的清除效果

由图3可见，随着浓度的增加川芎水提物对DPPH自由基的清除效果逐渐加强，在一定浓度范围内呈剂量—效应关系，在0.1 mg·mL-1时清除率为9.31%，在1 mg·mL-1时清除率为88.07%。比较可以发现，清除DPPH自由基所需的水提物浓度远低于清除其它两种自由基之所需。

3 结论

经索氏提取器提取得到川芎水提物，其对DPPH·﹑羟基自由基（·OH）和超氧阴离子（）3种自由基的清除能力有较大的差异，以清除能力来比较对3种自由基的清除作用DPPH·＞＞·OH，对DPPH自由基的清除效果明显优于其它两种自由基。

[1] 王倩,汪海.具有抗动脉粥样硬化作用的天然药物及其单体化合物[J].世界学技术-中药现代化,2002,4(5):52-58.

[2] 李秋怡.川芎的化学成分及药理研究进展[J].时珍国医国药, 2006,17(7):1298-1299.

[3] 李婕姝.荸荠皮多糖体外清除自由基活性的研究[J].氨基酸和生物资源,2008,30(4):7-9.

[4] Tang You-Zhi. Free radical scavenging effect of carbazole derbazole derivatives on DPPH and ABTS radicals[J]. Journal of the American oil chemists society, 2007, 84: 1095-1100.

[5] 李颖,李庆典.桑葚多糖抗氧化作用的研究[J].中国酿造, 2010,217(4):59-61.

[6] Feng Tao, Du Yu-min, Li Jin, et al. Antioxidant activity of half N-acetylated water-soluble chitosan in vitro[J]. European food research and technology, 2007, 225: 133-138.

[7] 周忠波.列盖马鞍菌粗多糖清除自由基活性研究[J].食品菌学报,2009,16(4):43-46.

[8] 周又亚.茶多酚在食品上的应用[J].广州食品工业科技, 2001,17(3):79-81.

（责任编辑、校对：琚行松）

Antioxidant Activity Study of Water Extraction of Chuanxiong Capsule in Vitro

ZHANG Jing-jing, YANG Zhan-feng
(Medical School, Zhengzhou University of Industrial Technology, Zhengzhou 451150, China)

The antioxidant activities of the water extraction of chuanxiong capsule were determined by examining the scavenging effect of the water extraction on hydroxyl(·OH), superoxide anion (), and 1, 1-Dipheny-2-picrylhydrazyl(DPPH) radicals. The water extraction of chuangxiong capsule was obtained by soxhletextractor with ascorbic acid as reference compound. Spectrophotometry was used to assess the antioxidant properties. There were different scavenging abilities in the water extraction of chuanxiong capsule on hydroxyl, superoxide anion, and DPPH radicals. The scavenging effects on the three free radicals were DPPH＞＞ ·OH. There was marked antioxidant activity in the water extraction of chuanxiong in vitro. In the experimental concentration range, the scavenging effects of the water extraction of chuanxiong showed positive correlation with the concentration of the water extraction of chuanxiong.

chuanxiongcapsule; water extract of chuanxiong; antioxidant; radical

Q5-33

A

1009-9115(2016)02-0038-03

10.3969/j.issn.1009-9115.2016.02.011

2015-12-04

张晶晶（1987-），女，河南安阳人，硕士研究生，研究方向为生物化学。