miR-30c在减轻肝细胞肝癌的侵袭与转移中的应用探讨
2016-02-06周晓晶
孙 鹏 宋 远 周晓晶
miR-30c在减轻肝细胞肝癌的侵袭与转移中的应用探讨
孙 鹏1宋 远1周晓晶2
目的 探讨miR-30c在减轻肝细胞肝癌侵袭及转移中的应用价值。方法 对肝癌及肝癌细胞系中的miR-30c表达进行定量检测,分析对肝癌细胞侵袭的影响。结果 有脉管转移组miR-30c表达低于无脉管转移组;转染miR-30c模拟物能对snail表达进行控制。结论 miR-30c表达上调,可抑制snail表达,减轻侵袭。
肝细胞肝癌;侵袭;转移;miR-30c
肝细胞肝癌发生率约为原发性肝癌的85%~90%[1]。微小核糖核酸(miRNA)在肿瘤的发生、侵袭、转移中发挥着重要的作用,如miR-30c[2-3]。本研究分析肝细胞肝癌中miR-30c的表达水平,并探讨其在肝细胞肝癌侵袭、转移中的影响,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2014年6月~2016年6月本院收治的实施肝癌手术切除的42例肝癌及癌旁组织标本。按照是否存在脉管癌栓,将其分为有脉管转移组(n=19)与无脉管转移组(n=23)。有脉管转移组中,男15例,女4例;平均年龄(45.8±2.6)岁。无脉管转移组中,男17例,女6例;平均年龄(45.6±2.4)岁。两组一般资料对比,差异无统计学意义(P>0.05),可对比。
1.2 方法
1.2.1 仪器与试剂 购自美国的0.25%胰酶、DMEM高糖培养基、胎牛血清;购自上海吉玛公司的miR-30c模拟物、miR-30c抑制物等;购自美国Santa公司的Snail、GAPDH一抗等;购自福州迈新公司的免疫组化试剂盒等。
1.2.2 细胞培养 在含5%二氧化碳的细胞培养箱中进行培养,37℃恒温,所用培养基为DMEM高糖培养基。
1.2.3 细胞转染 取适量对数生长期的肝癌细胞系,以2×105~4×105个细胞密度种植于6孔板中,持续培养24 h。
并按照试剂盒具体转染步骤,以Lipofectamine 2000进行转染。转染后24 h,对细胞进行收集。
1.2.4 细胞侵袭实验 以8 mm为Transwells小室纤维膜孔径,将10%胎牛血清的500μl DMEM加入下室,在含5%二氧化碳的细胞培养箱中进行培养,37℃恒温,持续培养48 h。以4%多聚甲醛固定小室下表面的细胞,以0.5%结晶紫染色。在显微镜下进行观察,计算穿膜细胞数。
1.3 统计学分析
以SPSS 19.0软件进行统计学分析,计量资料均用(x-±s)表示,以t检验,以P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
miR-30c在肝癌组织、癌旁组织中的表达分别为(0.001 05± 0.000 83)%、(0.006 85±0.002 68)%,差异具有统计学意义(t=13.075,P=0.000);而snail的表达分别为(0.004 18±0.003 56)%、 (0.001 29± 0.000 71)%,差异具有统计学意义(t=5.035,P=0.000)。
有脉管转移组miR-30c表达为(0.000 70±0.000 66)%,低于无脉管转移组的(0.001 36±0.000 82)%,差异具有统计学意义(t=3.966,P=0.000);有脉管转移组snail表达为(0.005 88± 0.005 42)%,高于无脉管转移组的(0.001 70±0.001 32)%,差异具有统计学意义(t=4.739,P=0.000)。
3 讨论
miRNA为常见非编码小分子RNA,包括22个核苷酸[4]。有研究认为,miR-30c等miRNA在细胞迁移、细胞增殖、细胞凋亡等多种细胞生物学过程中发挥着重要的作用,且在肝癌等多种肿瘤组织中表达异常[5]。但临床上仍缺乏对miR-30c在肝细胞肝癌侵袭及转移中影响的研究。
影响肝癌患者治疗效果及预后的关键,是肝细胞肝癌的侵袭与转移。有研究认为,snail能通过结合E-box,对其表达进行抑制,产生上皮-间质转化,增强上皮细胞变形、迁移及运动能力,提升抗凋亡能力,在肝癌细胞侵袭、浸润中发挥重要作用[6]。此外,还有研究认为,miR-30c能有效抑制snail表达,从而减轻肝细胞肝癌的侵袭性[7]。
本研究结果显示,肝癌细胞miR-30c表达水平低于癌旁组织,且有脉管转移组miR-30c低于无脉管转移组,与文献结果相符[8]。表明在肝癌的发生与发展过程中,miR-30c发挥着重要的作用。此外,本研究结果还显示,转染miR-30c模拟物能对snail表达进行控制,从而对高侵袭力细胞系MHCC-97H的侵袭能力进行控制。由此可知,经由miR-30c表达上调,可直接对snail表达进行抑制,从而有效控制肝癌细胞的侵袭和转移。
综上所述,miR-30c表达上调可直接对snail表达进行抑制,控制肝细胞肝癌的侵袭性。
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Discussion on the Application of miR-30c in Reducing the Invasion and Metastasis of Hepatocellular Carcinoma
SUN Peng1SONG Yuan1ZHOU Xiaojing21 Department of Gastroenterology,Jilin Provincial People's Hospital,Changchun Jilin 130021,China,2 Department of Biochemistry and Molecular Biology,Changchun University of Chinese Medicine of Basic Medical College,Changchun Jilin 130021,China
Objective To explore the application value of miR-30c in reducing the invasion and metastasis of hepatocellular carcinoma. Methods To detect the expression of miR-30c in hepatocellular carcinoma and hepatocellular carcinoma cell lines,and to analyze the role of the invasion of hepatocellular carcinoma cells. Results The expression of miR-30c was significantly lower than that of no vascular metastasis group,and the Snail expression was controlled by transfection of miR-30c. Conclusion miR-30c expression up regulation,can inhibit the expression of snail,reduce the invasion.
Hepatocellular carcinoma,Attack,Transfer,miR-30c
R735.7
A
1674-9316(2016)22-0071-02
10.3969/j.issn.1674-9316.2016.22.043
1 吉林省卫生计生科研计划课题(20152084),吉林省卫生计生自筹经费课题(2015s2c06)
1吉林省人民医院消化内科,吉林 长春 130021 2 长春中医药大学基础医学院生物化学与分子生物学教研
室,吉林 长春 130021
周晓晶,E-mail:589632478@qq.com