抗雏番鸭细小病毒鸡源卵黄抗体的制备及保护效果研究

2016-02-03张元元刘倩宏苏友鹏

中国兽医杂志 2016年10期

关键词：毒苗活苗雏鸭

张元元，刘璐，刘倩宏，苏友鹏

(吉林农业科技学院动物科技学院，吉林吉林132101)

抗雏番鸭细小病毒鸡源卵黄抗体的制备及保护效果研究

张元元，刘璐，刘倩宏，苏友鹏

(吉林农业科技学院动物科技学院，吉林吉林132101)

雏番鸭细小病毒病(MDPVD)，俗称“三周病”，该病是由番鸭细小病毒引起的3周龄内的雏番鸭发病。病番鸭表现为脚软、呼吸困难及腹泻为主要症状，该病的死亡率可达40%～50%以上,给养鸭业造成巨大危害。目前控制本病的方法主要为疫苗免疫接种及一些综合防制措施，对发病动物采用番鸭超免卵黄抗体或超免血清作被动免疫，进行紧急治疗。但由于鸭源抗体成本较高、来源有限，本研究采用雏番鸭细小病毒灭活苗、弱毒苗联合免疫成年产蛋母鸡，制备鸡源MDPV卵黄抗体，并对制备的卵黄抗体进行评价，为临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物试验动物为成年来杭蛋鸡(本校鸡场)，体重为2kg/只。

1.2 主要试剂 MDPV灭活苗、弱毒苗，均购自科特威生物科技公司；弗氏完全佐剂和不完全佐剂，购自Sigma公司；辣根过氧化物酶HRP标记的羊抗鸡抗体及DAB显色试剂盒，购自上海生工生物工程技术服务有限公司；其他试剂均为国产分析纯级试剂。

1.3 动物免疫及抗体效价检测于免疫前3d收集鸡蛋作为对照。以MDPV灭活苗(1mL)混合弱毒苗(1头份/只)首免成年蛋鸡，采取胸部肌肉多点注射。一免、二免间隔1周，以后每次免疫间隔10d。二免、三免接种剂量分别为2mL(灭活苗)+10头份/只(弱毒苗)，3mL(灭活苗)+100头份/只(弱毒苗)，接种途径与首免相同。

于三免后开始用中和试验检测高免蛋中的抗体效价，待抗体水平上升到一个较高水平时，开始收集高免蛋。

1.4 卵黄抗体制备及纯化将收集的鸡蛋用水冲洗干净后，依次使用碘酒和75%酒精擦拭消毒后，超净工作台中无菌分离卵黄，与等体积灭菌磷酸盐缓冲液(PBS)捣碎匀浆后，参照胡庆松等[1]的硫酸铵盐析法纯化卵黄抗体，无菌操作。

1.5 测定卵黄抗体的中和效价和纯度采用鸡胚中和试验法测定卵黄抗体MDPV的中和效价，同时设立对照组，观察鸡胚病变及死亡情况，并用统计学方法计算卵黄抗体中和效价。卵黄抗体中残留的硫酸铵用透析法除去，卵黄抗体纯度(纯化前、后)检测采用SDS-PAGE法分析，具体操作参见文献[1]。

1.6 制备卵黄抗体微生物学及安全性检测将卵黄抗体接种于普通营养琼脂培养基，37 ℃温箱内培养48 h，观察有无细菌生长。抓取雏鸭8只，注射卵黄抗体，每只2 mL。观察雏鸭食欲、精神状态、有无腹泻等异常反应，观察至72 h后，剖检雏鸭，观察实质脏器及免疫器官有无病理变化。

1.7 卵黄抗体治疗效果观察将 20 只3周龄健康雏鸭随机分成 4 组，I组、II 组、III 组为试验组，IV 组为对照组，攻毒后隔离饲养。各组肌肉注射病毒液(临床分离，本室保存)1.0 mL，48 h 后 I、II、III 组每日分别肌肉注射卵黄抗体 0.3、0.5、1.0 mL，连续注射 3 d，观察至 14 d分析卵黄抗体不同使用剂量对患鸭的治疗效果。