灵芝多糖对内江猪免疫功能的影响

2017-11-15杨沁洁李清亮

中国畜牧兽医文摘 2017年10期

关键词：灵芝特异性多糖

易霞杨沁洁李清亮

（四川省内江市农业科学院，四川内江641000）

灵芝多糖对内江猪免疫功能的影响

易霞杨沁洁李清亮

（四川省内江市农业科学院，四川内江641000）

本试验通过对内江猪接种PRRSV弱毒苗建立免疫模型，探讨了灵芝多糖对内江猪免疫功能的影响，从而寻求一种绿色的饲料添加剂，使食品更安全。本试验选择了80头生长育肥内江猪（分为2组，每组40头）为研究对象。试验按照2×2的因子设计：因子1设接种PRRSV弱毒苗和不接种两种处理；因子2为灵芝多糖添加水平，设0，50mg/kg两个水平。在试验的第1d和29d接种弱毒苗，在试验第7、14、21、28、35和42d收集2个组的血清，测定其免疫指标。接种疫苗组特异性抗体显著上升（p＜0.01）。GLP组在第7d和第14d血清特异性抗体的浓度显著升高（p＜0.01）。血清中IL-1β浓度显著降低（p＜0.05），且血清IFN-γ的浓度升高。饲粮中添加灵芝多糖能增强机体免疫力，能抑制炎症因子IL-1β来缓解免疫应激造成的生长抑制。

灵芝多糖 PRRSV 免疫应答内江猪饲料添加剂

0 引言

灵芝是一种珍贵的药食两用真菌，补中增智，益心补气等滋补功效，源自其含有多种活性物质，其中灵芝多糖是主要的研究表明灵芝之所以具有益寿延年活性成分。PRRSV是一种感染猪的病毒。现在用的PRRSV疫苗主要是弱毒活疫苗、灭活疫苗。其中弱毒活疫苗的效果较好。PRRSV弱毒苗被广泛使用，但其安全性和有效性存在不一致的结果，在某些条件下注射弱毒苗还存在毒力返强的情况，用PRRS弱毒苗注射猪还存在向非疫苗猪传播PRRSV致病性的情况。通过在日粮中添加灵芝多糖来减少接种疫苗产生的免疫应激，协同PRRS弱毒疫苗对PRRSV感染的生长育肥内江猪提供有效的保护，提高生长育肥内江黑猪的生产性能，是很值得研究的问题，并且具有广阔的前景。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验猪：60kg左右的内江猪，源自四川省内江市农科院畜牧研究所猪场；饲养方为自由饮水、自由采食，确保舍内温度适宜、清洁、空气流通，并定期对圈舍进行清洗消毒；灵芝多糖，购买于上海康舟真菌多糖有限公司；PRRSV弱毒苗：北美ATCCVR-2332PRRS株活疫苗（I ngelvac®PRRSVMLV，每头分含TCID50为104.8），猪PRRSV抗体、IL-1β、IL-10和IFN-γELISA试剂盒均为R&D公司进口分装。主要仪器设备：各种规格移液器，普通离心机等。

1.2 试验分组及处理

试验期为42d。试验按照2×2的因子设计：因子1为接种PRRSV弱毒苗和不接种两种处理；因子2为灵芝多糖添加水平，设0，50mg/kg两个水平（表示为CON和GLP）。试验共4个处理，每个处理组5个重复，每个重复4头猪，共80头猪。

表1 试验动物分组

1.3 检测指标及方法

每个组随机选取一头猪，在试验的7d、14d、21d、28d、35d、42d静脉采血5ml，收集血清，-70℃冰箱保存待测。血清中PRRSV特异性抗体分别用酶联免疫分析（ELISA）定量试剂盒（R&D公司）检测。IL-10、I F N-γ、IL-1β采用ELISA定量试剂盒检测。

1.4 统计分析

用SPSS进行数据统计，结果用平均数±标准差表示。p<0.05认为有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 灵芝多糖对接种PRRSV弱毒苗内江猪血清特异性抗体的影响

在接种疫苗后第7d和第14d，日粮和免疫对血清PRRSV特异性抗体浓度的影响显著（p<0.05）（表2）。

表2 灵芝多糖对内江猪血清特异性抗体的影响

2.2 灵芝多糖对接种PRRSV弱毒苗内江猪血清细胞因子的影响

在第1次接种疫苗之后，接种疫苗组猪血清中IL-1β浓度的最大值出现在接种疫苗的第7d，同时，第2次接种PRRSV弱毒苗后的第7d，猪血清中IL-1β浓度上升的幅度比第1次小。接种疫苗组在第7d、第14d和第35d，接种疫苗组血清比PBS对照组的IL-l β浓度显著提高。就日粮组而言，内江猪饲喂G L P日粮之后，接种疫苗组内江猪血清中IL-1β的浓度下降，在接种疫苗后第7d、第14d差异显著（p<0.05）。结果显示，在接种疫苗后第7d和第14d，日粮和免疫对血清IL-1β浓度的影响显著（p<0.05）。

接种疫苗组猪血清中INF-γ的浓度变化幅度较小，且在接种疫苗后前14d高于PBS对照组。在接种疫苗后的第7d、第14d和第35d，与PBS对照组相比，接种疫苗组猪血清中的INF-γ浓度明显上升（p<0.05）。就日粮而言，在接种后G L P日粮能够使猪血清中的INF-γ浓度升高，但差异不显著。结果显示，日粮和免疫对猪血清INF-γ浓度的影响不显著（p>0.05）。

接种疫苗组猪血清中IL-10浓度在第7d和第14d极显著高于PBS对照组（p<0.05），之后渐降低。在第2次接种疫苗后的7d，与对照组相比，接种疫苗组内江猪血清中的IL-I0浓度显著增高（p<0.05）。就PBS日粮组而言，G L P日粮降低了接种疫苗组血清中IL-10浓度，但血清IL-10相差不大（p>0.05）。结果显示，日粮和免疫对血清IL-10浓度的影响不显著（p>0.05）。

3 讨论

3.1 灵芝多糖日粮对接种猪蓝耳病弱毒苗内江猪特异性抗体的影响

在本研究中，接种疫苗组在接种疫苗后其血清PRRSV特异性抗体浓度比PBS对照组的PRRSV特异性抗体浓度提高显著。同时，猪血清中PRRSV特异性抗体最大值出现在接种疫苗之后的第21d，并且内江猪血清中PRRSV特性抗体的浓度在达到最大值之后呈下降的趋势。但在第2次接种疫苗之后，猪血清中PRRSV特异性抗体浓度无上升的趋势，且其保持着同一个浓度。就日粮对照组而言，饲粮中添加灵芝多糖能够提高接种疫苗组内江猪血清中特异性抗体浓度，抗体浓度在接种疫苗后第7d和第14d差异显著（p<0.05）。日粮和免疫血清PRRSV特异性抗体浓度在接种疫苗后第7d和第14d差异显著（p<0.05）。

3.2 灵芝多糖日粮对接种猪蓝耳病弱毒苗内江猪细胞因子的影响

3.2.1 灵芝多糖日粮对接种猪蓝耳病弱毒苗内江猪细胞因子IFN-γ的影响

本研究中，在内江猪的感染期其血清中IFN-γ水平显著提高，但与IL-10、IL-1β相比其提高的程度较小。血清中IFN-γ的提高，说明表明机体的免疫和抗病毒能力上升。然而，接种疫苗之后的第21d和第28d，与PBS对照组相比，血清中IFN-γ水平差异不显著。

3.2.2 灵芝多糖日粮对接种猪蓝耳病弱毒苗内江猪IL-10的影响

PRRSV感染猪成熟树突状细胞，降低组织性相容复合体II，上调IL-I0，促使PRRSV在感染早期抑制T细胞的增殖，使机体细胞的免疫力下降[4]。此外，提高PRRSV疫苗细胞介导免疫能够通过把机体中的IL-10降低来实现。

在本研究中，接种疫苗组在接种疫苗之后的第7d和第14d，其血清中IL-10明显上升，血清中IL-β水平降低，导致机体在感染初期的免疫力降低，接种疫苗后21d渐渐趋于正常水平。

3.2.3 灵芝多糖日粮对接种猪蓝耳病弱毒苗内江猪IL-β的影响

实验结果表明，在接种疫苗之后的前14d，猪血清中IL-l β、IL-10、I F N-γ的浓度升高，其中IL-10的升高会导致IFN-γ和IL-1β的浓度下降，从而会抑制机体免疫。因此关键的问题在于解决-在免疫应激期，不但要使得机体的免疫功能提高，还能让机体的免疫应激在最小的程度，以便能够使得使免疫应激快速正常。