乳腺癌患者荷瘤状态T淋巴细胞亚群检测及其临床意义

王文慧　李海滨　李景生　宋玉国

(北华大学附属医院乳腺外科，吉林　吉林　132011)



·肿瘤·

乳腺癌患者荷瘤状态T淋巴细胞亚群检测及其临床意义

王文慧李海滨李景生1宋玉国2，3

(北华大学附属医院乳腺外科，吉林吉林132011)

〔摘要〕目的检测乳腺癌患者外周血T淋巴细胞总数及T淋巴细胞亚群中的CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD45RA+T细胞、CD45RO+T细胞的百分率以评价患者的免疫状态。方法试验组选择女性原发性乳腺肿瘤患者40例，其中Ⅰ期乳腺癌23例，Ⅱ+Ⅲ期乳腺癌17例；以女性健康体检者30例为对照组。应用流式细胞仪，采用三色荧光免疫标记技术分别检测各组外周血T淋巴细胞亚群的数量，统计分析各组检测结果的差异性。结果试验组CD3+T细胞、CD4+T细胞百分率明显低于对照组(P<0.05)，Ⅱ+Ⅲ期患者明显低于Ⅰ期患者(P<0.05)。与对照组比较，试验组CD45RA+T细胞明显减少，而CD45RO+T细胞明显增多(P<0.05)；与Ⅰ期乳腺癌患者比较，Ⅱ+Ⅲ期乳腺癌患者CD45RA+T细胞明显减少，而CD45RO+T细胞明显增多，差异有统计学意义(P<0.05)。结论T细胞亚群检测是评价肿瘤患者细胞免疫功能的重要指标，具有重要的临床应用价值。乳腺癌患者免疫功能与肿瘤恶变的发生、发展及临床分期有一定相关性，随着病情的进展，机体免疫功能呈现下降趋势。

〔关键词〕乳腺癌；T淋巴细胞亚群；初始T细胞；记忆T细胞

乳腺癌患者多数存在细胞免疫功能紊乱〔1〕，肿瘤负荷越大，免疫功能的下降也越明显〔2〕。T淋巴细胞是抗肿瘤的重要免疫细胞，T淋巴细胞亚群的数量和比例与肿瘤的发展、浸润和转移存在密切关系，可影响某些肿瘤的化疗效果〔3〕。T淋巴细胞是一个复杂的细胞群体，根据其功能可分为辅助性T细胞和细胞毒性T细胞两个主要细胞亚群；根据是否已接受抗原刺激，又分为初始T细胞(CD45RA+T细胞)和记忆T细胞(CD45RO+T细胞)两个细胞亚群，本研究应用流式细胞术检测乳腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群和CD45RA+T细胞、CD45RO+T细胞的数量和比例，用以评价乳腺癌患者的细胞免疫功能状态。

1资料与方法

1.1临床资料选择2013年6月至2015年6月我院乳腺外科收治的乳腺癌患者40例作为试验组，年龄32～65岁，平均(42.8±11.2)岁,全部为女性。病理学诊断确切，有明确的TNM分期，其中Ⅰ期23例，Ⅱ+Ⅲ期17例。另选同期我院健康体检中心健康体检者30例作为对照组，女性，年龄30～60岁，平均(41.8±10.5)岁。

1.2仪器及试剂仪器：美国Beckman 公司EPICS XL型流式细胞仪。试剂：美国Beckman 公司荧光标记单克隆抗体，包括：CD3-PC5、CD4-FITC、CD8-PE、CD45RA-FITC、CD45RO-PE，IgG-FITC/IgG-PE/IgG-PC5。

1.3外周血T淋巴细胞亚群及CD45RA+、CD45RO+T细胞的检测试验组在患者知情同意的情况下于手术前1～3 d采血，对照组为体检当日采血。用EDTA-K2真空采血管，空腹静脉采血2 ml，混匀备检。取3只流式细胞仪专用试管，分别加入荧光标记单克隆抗体10 μl：①IgG-FITC/IgG-PE/IgG-PC5，10 μl；②CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE，各10 μl；③CD45RA-FITC和CD45RO-PE，各10 μl。在上述试管中分别加入抗凝静脉血50 μl，混合均匀，室温避光标记20 min。标记后将试管放于振荡器上，边震荡边加入溶血剂A 600 μl，震荡8 s，立即加溶血剂B 260 μl混匀。溶血后加入磷酸盐缓冲液(PBS)4 ml，1 000 r/min离心5 min，小心弃去上清，向沉淀中加入PBS 0.5 ml，混匀。以SS为横坐标、FS为纵坐标建立坐标图，选择淋巴细胞群，用同型对照IgG-FITC/IgG-PE/IgG-PC5调节电压，分别将各检测管放到流式细胞仪上进行检测。

1.5统计学方法采用SPSS10.0软件进行t检验。

2结果

2.1T淋巴细胞亚群及CD45RA+、CD45RO+T细胞检测结果CD3+T细胞的百分率为58.8%；CD4+T为26.3%；CD8+T为28.3%；CD45RO+T为42.5%；CD45RA+T为40.8%。

2.2两组T细胞亚群检测结果比较试验组CD3+T细胞、CD4+T细胞百分率〔(62.48±7.24)%，(29.67±6.07)%〕明显低于对照组〔(66.67±6.29)%，(35.18±5.31)%〕(P<0.05)，而CD8+T细胞百分率〔试验组(28.45±5.22)%、对照组(27.98±6.11)%〕无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较〔(62.05±7.99)%〕，试验组CD45RA+T细胞〔(41.67±9.4%)〕明显减少，而CD45RO+T细胞明显增多〔(37.21±6.14)% vs (44.10±9.50)%〕(P<0.05)。

2.3TNMⅠ期与Ⅱ+Ⅲ期乳腺癌患者T细胞亚群检测结果比较Ⅱ+Ⅲ期患者CD3+T细胞〔(60.89±8.48)%〕、CD4+T细胞百分率〔(28.21±6.25)%〕明显低于Ⅰ期患者〔(64.82±5.15)%、(31.74±4.76)%〕(P<0.05),但CD8+T细胞百分率〔(28.97±4.51)% vs (27.57±5.52)%〕差异无统计学意义(P>0.05)。与Ⅰ期乳腺癌患者〔(45.42±10.03)%〕比较，Ⅱ+Ⅲ期乳腺癌患者CD45RA+T细胞明显减少〔(37.46±7.82)%，P<0.05〕，而CD45RO+T细胞明显增多〔Ⅰ期(40.45±8.79)%,Ⅲ+Ⅳ期：(47.82±9.23)%〕(P<0.05)。

3讨论

机体的免疫系统对肿瘤细胞具有重要的免疫监视作用，能够及时清除新近产生的肿瘤细胞。对于肿瘤患者，如果免疫监视功能降低，肿瘤细胞就会不断生长，同时随着肿瘤的不断生长，机体的免疫状态会进行性下降。肿瘤的发生、发展与机体的免疫功能密切相关，其中以T淋巴细胞为主的抗肿瘤免疫是近年来的研究热点。T细胞是一个复杂的细胞群体，其中CD3+T细胞代表T淋巴细胞总数，CD4+T细胞代表辅助性T细胞数量，CD8+T细胞代表细胞毒性T细胞数量。只有T细胞各亚群的百分率及CD4/CD8比值在一定的范围内，才能保证机体的细胞免疫功能处于正常状态〔4〕。T细胞由骨髓产生，在胸腺内驯化成熟，成熟的T细胞在没有受到抗原刺激时称为初始T细胞(CD45RA+T细胞)；接受抗原刺激后一部分发育为杀伤性T细胞而发挥免疫杀伤作用，一部分发育为记忆T细胞(CD45RO+T细胞)。只有CD45RA+T细胞和CD45RO+T细胞两者的数量和比例保持在一定范围内，机体的细胞免疫功能才能处于平衡状态〔5〕。

本研究结果与Tredan等〔6〕报道的结果基本一致。说明机体在荷瘤状态下，肿瘤细胞会产生一些抑制免疫功能的因子，它们会使CD4+细胞数量下降，而CD8+T细胞的数量及活性可能会轻度升高。结果证实，机体在荷瘤状态下，CD45RA+T会相对减少，而CD45RO+T细胞会相对增多，荷瘤状态越严重这种现象越明显。王巍等〔7〕的研究结果也证实，结直肠癌患者在荷瘤状态时CD45RO+T细胞含量高于对照组。T细胞接受抗原刺激后前者可以向后者转化，两者的数量和比例保持在一定范围内，机体的细胞免疫功能才能处于平衡状态。若CD45RA+T细胞减少到一定数量且短期内得不到补充，说明机体免疫细胞储备更新能力不足。CD45RA+T细胞减少而CD45RO+T细胞增多则说明由于肿瘤细胞的存在，CD45RA+T细胞接受肿瘤抗原刺激后向CD45RO+T细胞发生了转化。

综上，T淋巴细胞亚群检测能直接反映肿瘤患者机体的免疫功能状态，也可间接反映肿瘤的发生、发展情况。临床上联合检测上述指标，可动态监测淋巴细胞亚群数量，对于及时掌握肿瘤患者的免疫状态和判断预后具有重要意义。

4参考文献

1Coleman MP,Forman D,Bryant H,etal.Cancer survival in Australia,Canada,007(the International Cancer Benchmarking Partnership):an analysis of population-based cancer registry data〔J〕.Lancet,2011;377(9760):127-38.

2Beyer M,Schultze JL.Regulatory T cells in cancer〔J〕.Blood，2006;108(3):804-11.

3顾佳颖，胡春梅，石光,等.CD4+、CD8+细胞水平变化与恶性肿瘤疗效的关系〔J〕.中国老年学杂志，2015;35(22)：6454-5.

4任长岭，毕铁强，曹明智.乳腺癌前哨淋巴结 CD4，CD8 免疫功能的探讨〔J〕.肿瘤基础与临床，2009;10(22)：381-2.

5Donovan JA,Koretzk Y.CD45 and the immune response〔J〕.J Am Soc Nephrol,1993;4:976-85.

6Tredan O,Manuel M,Clapisson G,etal.Patients with metastatic breast cancer leading to CD4(+)T cell lymphopaenia have poor outcome〔J〕.Eur J Cancer,2013;49(7):1673-82.

7王巍，宋玉国，张付喜.胃癌及结直肠癌患者外周血CD45RA+和CD45RO+T细胞变化特征〔J〕.中国老年学杂志，2015;35(13)：3625-6.

〔2015-09-17修回〕

(编辑滕欣航)

〔中图分类号〕R73.3

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)08-1873-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.08.040

通讯作者：宋玉国(1962-)，男，教授，硕士，主要从事临床免疫学研究。

基金项目：吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目(No.2013179)

1吉林省中医药科学院2北华大学附属医院临床免疫研究室

3北华大学生命科学研究中心

第一作者：王文慧(1970-)，男，副主任医师，硕士，主要从事乳腺外科临床研究。