大剂量维生素D3补充对糖尿病大鼠淋巴细胞增殖活性的影响

2016-01-30窦晓娟汪求真韩孝红郭玉妹郝海波蔺瑞函马爱国

中国药理学通报 2016年4期

关键词：维生素D淋巴细胞体重

窦晓娟，汪求真，韩孝红，郭玉妹，郝海波，张　雨，蔺瑞函，马爱国

(山东省青岛大学公共卫生学院，山东青岛　266000)

大剂量维生素D3补充对糖尿病大鼠淋巴细胞增殖活性的影响

窦晓娟，汪求真，韩孝红，郭玉妹，郝海波，张雨，蔺瑞函，马爱国

(山东省青岛大学公共卫生学院，山东青岛266000)

关键词：糖尿病；维生素D；淋巴细胞；增殖活性； MTT；体重

近年来，糖尿病(diabetes mellitus,DM)患病率逐年升高，已成为全球性公共卫生问题。淋巴细胞是执行免疫功能的主要细胞成员，对维持机体内环境的稳定发挥重要作用有研究显示，2型DM患者淋巴细胞增殖活性明显低于正常对照[1]。维生素D(vitamin D， VD)是一种重要的调节钙磷平衡和脂质代谢的激素。近年来，有研究证明，VD还具调控胰岛素抵抗和免疫调节等功能，在维持机体免疫中发挥重要作用，并且可以减轻DM肾病和胰腺等的损伤。但是，关于VD补充对DM患者淋巴细胞增殖活性和脏器指数影响的研究却鲜有报道。

1材料与方法

1.1材料SPF级♂ SD大鼠(山东省鲁抗制药公司)。胆固醇，胆盐(河南平顶山公司)。STZ(美国Sigma公司)。血糖仪和试纸(日本拜耳保健有限公司)。VD3(青岛双鲸公司)。酶标仪(西安明克斯检测设备有限公司)。

1.2造模及干预大鼠适应性喂养1周后，随机分为对照组(12只)和糖尿病造模组(88只)，分别喂养基础饲料和高糖高脂饲料4周[2]，两组分别空腹腹腔注射柠檬酸钠缓冲液和链脲佐菌素(STZ)35 mg·kg-1，注射后24 和72 h测大鼠空腹血糖，两次均>11.1 mmol·L-1为造模成功[3]。将造模成功的80只大鼠随机分为5组。6组大鼠给予不同剂量的VD3连续灌胃6周，对照组N和糖尿病模型组DM组，给予生理剂量的VD3(36 IU·kg-1)，5N、25N、125N和200N组分别给予5倍、25倍、125倍和200倍生理剂量的VD3，剂量分别为180、900、4500和7200 IU·kg-1。

1.3检测指标大鼠处死后留取各脏器，计算各脏器指数(脏器重量/大鼠体重)。血清25(OH)D采用放射免疫法检测。淋巴细胞增殖活性采用MTT法检测。

*P<0.05vsN group;#P<0.05vsDM group.

2结果

2.1各组大鼠血清25(OH)D 浓度和体重25N、125N和200N组大鼠血清25(OH)D浓度明显高于N和DM组，并呈现明显剂量-效应关系。与DM组相比，125N组体重明显增长，接近正常水平。

2.2脏器指数与N组相比，DM组和各VD干预组的肝脏和肾脏指数明显升高。而125N组和DM组相比，肾脏指数明显降低。

2.3淋巴细胞增殖活性与N组比较，淋巴细胞增殖活性在DM组明显降低。与DM组相比，5N组和25N组明显升高，而125N和200N组未观察到类似结果。

3讨论

本研究证明，DM大鼠连续6周每天摄入125倍剂量的VD能够降低肾脏指数，其可能是通过抑制尿激酶型纤溶酶原激活剂受体的表达，降低足细胞活动力而起到保护肾脏的作用[4]。Cantorna等证实1,25(OH)2D3可能通过下调IL-12和上调IL-4与TGF-β来增加Th2淋巴细胞的数目。Gepner等[5]的研究证实1,25(OH)2D3能作用于Th细胞而抑制B细胞合成和分泌免疫球蛋白而增加Ts细胞的活性。这与我们的研究结果一致，因此我们推测，适量的VD3补充可通过免疫调节作用增强DM大鼠的淋巴细胞增殖活性。

*P<0.05vsN group;#P<0.05vsDM group.

在本研究中，我们应用了从生理剂量到200倍生理剂量较大范围内的不同水平VD3补充，国内外尚未见类似报道。同时，在造模时我们得到了一个较高的成模率。但是此研究是针对大鼠的，其研究结果不能直接推及到人。本研究为大剂量VD3对淋巴细胞增殖活性的影响提供了重要的科学依据，其机制有待进一步的深入研究。

参考文献

[1]陈向芳, 刘志民, 赵瑛, 等. 褪黑素对2型糖尿病患者外周血淋巴细胞增殖与凋亡反应的影响[D]. 全国首届代谢综合征的基础与临床专题学术会议,2004, 2.

[1]Chen X F, Liu Z M, Zhao Y, et al. Effect of melatonin on peripheral blood lymphocyte proliferation and apoptosis in type 2 diabetes patients[D]. The first academic meeting of metabolic syndrome and clinical project,2004, 2.

[2]刘双梅, 李桂林, 汤晓丽, 等. 甲基莲心碱对2型糖尿病模型大鼠作用的代谢组学研究[J]. 中国药理学通报,2012, 28(4):490-5.

[2]Liu S M, Li G L, Tang X L, et al. Effects of neferine on type 2 diabetic mellitus rats by metabonomics method[J].ChinPharmacolBull, 2012, 28(4) : 490-5.

[3]Ti Y, Xie G L, Wang Z H, et al. TRB3 gene silencing alleviates diabetic cardiomyopathy in a type 2 diabetic rat model[J].Diabetes,2011, 60(11):2963-74.

[4]马建超, 史伟, 章斌, 等. 1,25-二羟基维生素D_3通过抑制尿激酶型纤溶酶原激活剂受体表达降低足细胞活动力[J]. 中国新药与临床杂志,2012, 31(7):401-5.

[4]Ma J C, Shi W, Zhang B, et al. 1,25-Dihydroxy vitamin D3 reduces motility of podocytes via inhibiting urokinase-type plasminogen activator expression[J].ChinJNewDrugsClinRem, 2012,31(7):401-5.

[5]Gepner P, Amor B, Founier C. 1,25-Dihydroxyvivtamin D3 protentiates the in vitro inhibitoy effect of cyclosporin A on T cells from rheumatoid arthritis patients[J].ArthritisRheum, 1989,32(1):31-6.

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Effect of high dosage of vitamin D3 supplementation on lymphocyte proliferation activity in diabetic rats

DOU Xiao-juan, WANG Qiu-zhen, HAN Xiao-hong, GUO Yu-mei, HAO Hai-bo, ZHANG Yu, LIN Rui-han, MA Ai-guo

(CollegeofPublicHealth,QingdaoUniversity,Qingdao,Shandong266000,China)

Key words:diabetes mellitus; vitamin D; lymphocyte; proliferation activity; MTT; body weight

收稿日期：2015-12-15，修回日期：2016-02-21

基金项目：国家自然科学基金资助项目(No 81472983)

作者简介：窦晓娟(1989-)，女，硕士生，研究方向：营养流行病学，E-mail:1293606133@qq.com; 汪求真(1971-)，女，博士，硕士生导师，研究方向：营养流行病学，通讯作者，E-mail:kevin_1971@126.com

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.04.030

文献标志码：A

文章编号：1001-1978(2016)04-0589-02