T淋巴细胞Ag-NORs与脑利钠肽评估老年AECOPD患者治疗效果及意义

付　鹏　周国庆　黄志东

(广西壮族自治区南溪山医院老年内科,广西　桂林　541002)



T淋巴细胞Ag-NORs与脑利钠肽评估老年AECOPD患者治疗效果及意义

付鹏周国庆黄志东

(广西壮族自治区南溪山医院老年内科,广西桂林541002)

摘要〔〕目的探讨T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白(Ag-NORs)与N端脑利纳肽前体(NT-proBNP)对老年急性加重期慢性阻塞性肺疾病(AECOPD)患者治疗疗效的评估意义。方法选取2013年7月至2014年11月该院收治的AECOPD患者97例，根据临床疗效分为有效组(痊愈+显效，n=71)和无效组(无效，n=26)。分别于治疗前和治疗第3、治疗第7天、治疗结束时检测外周血T淋巴细胞Ag-NORs和血浆NT-proBNP水平，并采用受试者工作特征曲线下面积(AUC)比较不同指标对疗效的评估价值。结果两组患者治疗前外周血T淋巴细胞Ag-NORs水平比较无显著差异(P>0.05)，均随治疗时间呈上升趋势，且有效组较无效组患者上升较快(P<0.05)；两组患者治疗前血浆NT-proBNP水平比较无显著差异(P>0.05)，均随治疗时间呈下降趋势，且有效组较无效组患者下降较快(P<0.05)；有效组患者治疗第3天外周血T淋巴细胞Ag-NORs和血浆NT-proBNP水平变化率均明显高于无效组(P<0.05)；治疗第3天的 T淋巴细胞Ag-NORs水平变化率评估疗效的AUC为0.752(P<0.05)，当其>21.60%时，评估有效的敏感度和特异度分别为73.58%和84.72%；治疗第3天血浆NT-proBNP水平变化率评估疗效的AUC为0.684 (P<0.05)，当其>24.72%时，评估有效的敏感度和特异度分别为70.86%和79.84%。结论治疗第3天外周血T淋巴细胞Ag-NORs和血浆NT-proBNP水平变化率均可用于评估AECOPD患者治疗疗效，以治疗第3天外周血T淋巴细胞Ag-NORs评估价值更高。

关键词〔〕AECOPD；T淋巴细胞Ag-NORs；NT-proBNP

第一作者：付鹏(1967-),男，副主任医师，主要从事老年内科疾病研究。

慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病率随年龄的增长呈逐渐增高趋势〔1〕。COPD急性加重期(AECOPD)临床症状更严重，导致患者的生命质量日益恶化〔2〕。本研究旨在探讨T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白(Ag-NORs)和N端脑利纳肽前体(NT-proBNP)对老年AECOPD患者治疗效果的评估意义。

1资料与方法

1.1一般资料选取2013年7月至2014年11月我院收治的AECOPD患者97例，均存在气促、咳嗽症状加重、痰量增多、痰液黏稠、部分患者伴发热等现象，其中男62例，女35例；年龄62～85〔平均(71.54±9.69)〕岁；病程5～17年，平均(10.25±1.43)年。所有患者均符合中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组制定的《慢性阻塞性肺疾病诊治指南(2013年修订版)》标准〔3〕。排除标准：①合并急性心力衰竭、糖尿病、自身免疫系统疾病等重大慢性全身性疾病及严重肝、肾功能不全者；②伴有间质性肺病、支气管扩张、支气管哮喘等其他慢性呼吸道疾病；③合并呼吸系统以外部位感染者；④近期应用糖皮质激素、环磷酰胺等可能影响机体免疫功能的药物。经本院医学伦理委员会审批，均知情同意。

1.2疗效评定及研究分组由具有丰富临床经验的内科主治医生对患者病情进行全面评估，并制定适宜患者具体情况的治疗方案，治疗期间密切观察患者病情的变化并采取相应措施。根据《慢性阻塞性肺疾病诊治指南(2013年修订版)》中疗效判定标准〔3〕对治疗效果进行评价，①显效：治疗3 d后呼吸困难、喘息、咳嗽及肺部哮鸣音等主要临床症状和体征消失或明显减轻，各项肺功能指标均明显改善；②有效：治疗4～7 d后呼吸困难、喘息症状消失，肺部哮鸣音明显减少，咳嗽症状减轻，各项肺功能指标改善；③无效：治疗7 d后呼吸困难、喘息症状虽有所减轻，但肺部哮鸣音及各项肺功能指标均无改善，甚至加重。老年AECOPD治疗后有效患者(痊愈+显效)71例设为有效组，无效患者(无效)26例设为无效组。

1.3外周血T淋巴细胞Ag-NORs水平的检测分别于治疗前和治疗第3、7天、治疗结束时检测外周血T淋巴细胞Ag-NORs水平。于患者处于安静状态下，无菌采集患者空腹肘静脉血2 ml，注入到外周血淋巴细胞培养液中，静置于37℃恒温培养箱中培养72 h。将培养的细胞混悬液用吸管轻轻吹匀后，吸取0.5 ml至离心管中，1 700 r/min离心7 min后，将上清液弃去。注入0.075 mol/L氯化钾溶液5 ml，轻轻充分混匀后注入0.5 ml固定液(甲醇∶乙酸=3∶1)，轻轻充分混匀后1 700 r/min离心7 min后，将上清液弃去，再次注入固定液重复操作1次。加入0.3 ml固定液，轻轻混匀后取2～3滴至预冷玻璃片上，室温下晾干。将水浴箱升温至90℃，将玻片加载预铝板上后缓慢放入水浴箱水面，加染液5%硝酸银溶液4滴、3%甲酸和2%明胶2滴于拨片上，用吸管轻轻吹匀盖上盖玻片，静置3 min，待涂片变成深黄色时取下，将玻片冲洗至无黄色脱下，直立于室温下晾干。高倍显微镜观察染片，随机采集30个生长状况良好的的细胞，采用KL型免疫图像分析仪(北京健尔康医疗设备有限公司)检测，以外周血T淋巴细胞Ag-NORs的T细胞Ag-NORs面积/细胞核面积(IS%)作为Ag-NORs的检测指标。

1.4血浆脑利钠肽(BNP)水平的检测分别于治疗前和治疗第3、治疗第7天、治疗结束时检测血浆NT-proBNP水平，无菌采集患者清晨空腹肘静脉全血2 ml，置于乙二胺四乙酸盐(EDTA)抗凝试管中，3 000 r/min离心5 min后，抽取血浆250 μl，采用Elecsys 2010免疫夹心法检测血浆NT-proBNP水平，试剂盒购自德国罗氏诊断产品(上海)有限公司。测定范围为5～35 000 pg/ml。

1.5变化率的计算计算各时间位点的外周血T淋巴细胞Ag-NORs水平和血浆BNP水平的变化率〔(基线水平-所在时间位点水平)/基线水平×100%〕。

1.6统计学方法应用SPSS17.0软件进行t检验、χ2检验，并采用受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)进行分析。

2结果

2.1两组患者不同时间位点外周血T淋巴细胞Ag-NORs水平及变化率的比较两组患者治疗前外周血T淋巴细胞Ag-NORs水平比较无显著差异(P>0.05)，均随治疗时间呈上升趋势，且有效组较无效组上升较快(P<0.05)。两组患者在治疗第3天外周血T淋巴细胞Ag-NORs水平的变化率分别为(22.47±9.86)%和(6.30±1.42)%，组间比较差异显著(P<0.05)。见表1。

2.2两组患者不同时间位点血浆BNP水平及变化率的比较两组患者治疗前血浆NT-proBNP水平比较无显著差异(P>0.05)，均随治疗时间呈下降趋势，且有效组较无效组下降较快(P<0.05)。两组患者在治疗第3天血浆BNP水平的变化率分别为(23.07±10.16)%和(10.01±1.87)%，组间比较差异显著(P<0.05)。见表2。

表1　两组患者不同时间位点外周血T淋巴细胞

表2　两组不同时间位点血浆NT-proBNP

2.3不同指标评估老年AECOPD患者治疗疗效的ROC治疗第3天T淋巴细胞Ag-NORs水平变化率评估疗效的AUC为0.752(P<0.05)，最佳临界值为21.60%，评估有效的敏感度、特异度和约登指数分别为73.58%、84.72%和0.583；治疗第3天 血浆NT-proBNP水平变化率评估疗效的AUC为0.684 (P<0.05)，最佳临界值为24.72%，评估有效的敏感度、特异度和约登指数分别为70.86%、79.84%和0.507。治疗第3天T淋巴细胞Ag-NORs水平变化率对疗效评估价值优于治疗第3天血浆NT-proBNP水平变化率(P<0.05)。

3讨论

反复呼吸道感染、全身炎性反应等导致COPD患者免疫力显著下降，急性加重期下降更为明显〔4〕， 且由于老年患者本身免疫力低下，故大多老年AECOPD患者均陷入免疫功能低下状态〔5〕。研究〔6〕报道，老年患者免疫功能缺陷主要表现为细胞免疫功能降低，以T淋巴细胞的变化为主。细胞核中的Ag-NORs含量是反映细胞核中rDNA转录活性的一项指标，且基因转录处于整个细胞生命活动周期的较早期，因此T淋巴细胞Ag-NORs可早期反映T淋巴细胞的增殖活性，进而评估患者的免疫功能状态〔7〕。

BNP是一种多肽类神经激素，属于利钠肽家族，主要在心室合成由心肌细胞分泌，具有排钠利尿、舒张血管等作用〔8〕。已有多项研究〔9〕证实，血浆BNP水平与AECOPD的发生和疾病进展密切相关，对COPD患者的预后具有独立的提示作用。AECOPD患者经治疗后，机体慢性缺氧状态得以有效改善，血氧饱和度明显升高，心肌耗氧量降低，患者心肺负担有效降低，最终使 BNP分泌减少〔10〕。本研究提示治疗第3天后外周血T淋巴细胞Ag-NORs水平和血浆NT-proBNP水平的变化率可早期评估老年AECOPD患者疗效。

参考文献4

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3中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组.慢性阻塞性肺疾病诊治指南(2013年修订版)〔J〕.中华结核和呼吸杂志,2013；36(4):255-64.

4李广荣，高念明.气统受限性肺疾病的免疫学机制研究进展〔J〕.基础医学与临床，2014；34(9)：1268-71.

5张莹,慕广建,施伟.老年心力衰竭合并慢性阻塞性肺病急性加重患者营养状态与免疫功能相关性分析〔J〕.中华老年心脑血管病杂志,2013；15(7):704-6.

6吴凯,叶军,卢慧宇,等.老年慢性阻塞性肺病患者细胞免疫功能的变化及意义〔J〕.重庆医科大学学报,2013；38(8):943-5.

7ElGendy AM,Abbas-Helmy WH,Ezzat Y,etal.Flow cytometric immunophenotyping of peripheral-blood leukocytes in relation to immunopathology and cellular proliferation of pleural mesothelioma〔J〕.Egypt J Immunol,2006；13(1):87-98.

8冯世兵，王宇.脑钠肽和C反应蛋白水平对急性呼吸困难患者的快速诊断意义〔J〕.中国老年学杂志,2013；33(17):4323-4.

9张立涛,赵鹤龄.脑利钠肽在呼吸系统疾病中临床应用的研究进展〔J〕.中国急救医学,2014；34(6):555-60.

10Zhang J,Zhao G,Yu X,etal.Intravenous diuretic and vasodilator therapy reduce plasma brain natriuretic peptide levels in acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease〔J〕.Respirology,2012；17(4):715-20.

〔2015-03-21修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

基金项目:广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题(Z2013299)

中图分类号〔〕R563〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2015)21-6161-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.21.076