胃炎饮对胃溃疡大鼠胃黏膜前列腺素E2表达的影响

2016-01-28于文涛方朝义王少贤

中国老年学杂志 2015年21期

于文涛　方朝义　李　强　王少贤

(河北中医学院，河北　石家庄　050091)

于文涛方朝义李强王少贤

(河北中医学院，河北石家庄050091)

摘要〔〕目的探讨胃炎饮对胃溃疡模型大鼠胃黏膜前列腺素E2(PGE2)表达的影响。方法采用冰醋酸腐蚀法建立实验性胃溃疡大鼠模型，以奥美拉唑为对照，观察胃炎饮对实验性胃溃疡大鼠胃黏膜溃疡面积和胃黏膜PGE2表达及含量的影响。结果与假手术组比较，模型组大鼠胃黏膜PGE2表达平均光度明显下降，平均灰度明显升高，同时PGE2含量明显下降(P<0.01)；与模型组比较，各用药组溃疡面积均明显缩小，平均光度明显升高，平均灰度明显下降，PGE2含量明显上升(P<0.05)；与奥美拉唑组比较，胃炎饮高剂量组溃疡面积明显缩小(P<0.05)，平均光度明显升高，平均灰度明显下降，PGE2含量明显上升(P<0.05)。结论胃炎饮可促进胃溃疡大鼠胃黏膜PGE2的合成和分泌，提高胃黏膜PGE2含量，增强胃黏膜防御功能，促进溃疡愈合。

关键词〔〕胃炎饮；实验性胃溃疡；前列腺素E2

第一作者：于文涛(1971-)，男，博士，副教授，硕士生导师，主要从事脑血管病及消化系统疾病证治规律研究。

胃溃疡是由于胃酸分泌过多、幽门螺杆菌感染和胃黏膜保护作用减弱等多种因素导致胃酸和胃蛋白酶消化自身的胃壁，致使黏膜组织受损的疾病。胃炎饮为全国名老中医药专家杨牧祥教授的经验方，前期研究表明，该方药治疗多种慢性胃病均取得了理想疗效〔1,2〕。本研究观察了该药对胃溃疡大鼠胃黏膜前列腺素E2(PGE2)表达的影响。

1材料与方法

1.1动物与药物选取清洁级雄性Wistar大鼠50只，体重200～220 g，由河北医科大学实验动物中心提供。动物合格证编号：1205094。胃炎饮方：由柴胡、香附、川楝子、元胡、炒白术、茯苓、炙甘草、川连、陈皮、枳壳、姜半夏、姜竹茹等药物组成，使用前水煎分别浓缩成含量为2.14 g生药/ml(高剂量组)和1.07 g生药/ml(低剂量组)的药液。奥美拉唑肠溶胶囊：由哈药集团三精制药诺捷有限责任公司生产，生产批号：1111304，批准文号：国药准字p0064032，规格：每粒20 mg。使用前用蒸馏水配制成浓度为0.368 mg/ml的药液。

1.2主要仪器RM-2125型切片机：德国LEICA公司。OLYMPUS 万能显微镜：日本OLYMPUS公司。HMIAS2000高清晰度彩色医学图文分析系统(2004.1版本)：武汉千屏影像技术有限责任公司。FJ-2021γ-放射免疫计数器：西安二六二厂。

1.3主要试剂PGE2免疫组化试剂盒：购自Beijing Boisynthesis Biotechnology Co.LTD(bs-2639R)；PGE2放免试剂盒：北京东亚免疫技术研究所提供。

1.4模型建立50只大鼠随机抽取8只作为假手术组，余42只参与正式造模。造模方法参照文献〔3〕。大鼠术前禁食24 h，10%水合氯醛按每3 ml/kg体重腹腔注射麻醉，待大鼠失去意识后，于剑突下腹中线打开腹腔，暴露出胃，在胃前壁近幽门处，用浸有100%冰醋酸、直径为5 mm的圆形滤纸接触2次(注意避开血管)，每次30 s，棉签吸干，生理盐水冲洗，逐层缝合，手术过程按无菌操作。假手术组麻醉开腹，暴露胃壁，用生理盐水代替冰醋酸浸湿滤纸接触2次，每次30 s，缝合。

1.5分组及给药在造模术后第3天，剔除死亡大鼠，将造模成功存活大鼠随机抽取32只，分为模型组、胃炎饮高剂量组、胃炎饮低剂量组、奥美拉唑组，每组8只。各药物治疗组按体重分别灌胃给药，胃炎饮高剂量组灌服浓度为2.14 g生药/ml的胃炎饮方药液10 ml/kg，胃炎饮低剂量组灌服浓度为1.07 g生药/ml胃炎饮方药液10 ml/kg，奥美拉唑组灌服浓度为0.368 mg/ml的奥美拉唑液10 ml/kg。各用药组从造模术后第3天开始治疗，假手术组、模型组灌胃等容积的生理盐水，1次/d，治疗天数为14 d。

1.6溃疡面积检测最后一次灌胃给药后禁食24 h，断头处死，无菌操作剖腹取胃，沿胃大弯剪开，冰生理盐水漂洗胃内容物，把胃黏膜展平于平板上，滤纸吸干，肉眼观察胃前壁近幽门的冰醋酸腐蚀处大体形态，用游标卡尺测量溃疡的最大长径和垂直最大宽径，计算溃疡面积(长×宽=面积)和溃疡抑制率。

1.7各组大鼠胃黏膜PGE2表达的检测采用免疫组化检测PGE2表达情况。一抗为羊抗大鼠PGE2单克隆抗体、二抗为生物素化马抗羊IgG。采用HMIAS=2000高清晰度彩色医学图文分析系统对染色阳性部位进行平均光度值和平均灰度值测定。平均光度值反映PGE2阳性表达强度，平均灰度值反映PGE2阴性表达强度。首先以高倍镜(×400)在每张片子上随机选取3个视野，系统自动计算其平均光度值和平均灰度值，每组取8个数据进入统计分析。

1.8各组大鼠胃黏膜PGE2含量检测从靠近溃疡灶或愈合处周围剪取胃组织，称重后移入玻璃匀浆管中，冰盘上匀浆，充分研碎，采用放免法检测胃黏膜PGE2含量。

1.9统计学处理采用SPSS16.0统计软件行单因素方差分析及LSD法。

2结果

2.1大体形态观察模型组大鼠胃黏膜溃疡处呈圆形或椭圆形凹陷，状若火山口，边缘整齐，溃疡底部覆盖有灰白色炎性渗出物和坏死物，溃疡周围黏膜组织皱襞变粗，部分溃疡组织与周围组织粘连。各治疗组大鼠溃疡形态与模型组相似，但面积较小，渗出物和坏死物较少。假手术组大鼠胃黏膜未见异常。

2.2各组大鼠溃疡面积及溃疡抑制率比较与模型组比较，各用药组溃疡面积均明显缩小(P<0.05)；与奥美拉唑组比较，胃炎饮高剂量组溃疡面积明显缩小(P<0.05)；与胃炎饮低剂量组比较，胃炎饮高剂量组溃疡面积明显缩小(P<0.05)；胃炎饮高剂量组溃疡抑制率高于胃炎饮低剂量组和奥美拉唑，说明高剂量胃炎饮对溃疡疗效优于低剂量和奥美拉唑。见表1。

2.3各组大鼠胃黏膜PGE2表达的比较与假手术组比较，模型组大鼠PGE2表达平均光度明显下降，平均灰度明显升高(P<0.01)；经用药治疗后，各治疗组与模型组比较，平均光度明显升高，平均灰度明显下降(P<0.01或P<0.05)；各治疗组间比较，胃炎饮高剂量组较对照组平均光度明显升高，平均灰度明显下降(P<0.05)，胃炎饮高剂量组较胃炎饮低剂量组平均光度明显升高(P<0.05)。见表2，图1。

表1　各组大鼠溃疡面积和溃疡抑制率比较±s,n=8)

与模型组比较：1)P<0.05，2)P<0.01；与奥美拉唑组比较：3)P<0.05；与胃炎饮高剂量组比较：4)P<0.05，下表同

表2　各组大鼠胃黏膜PGE2表达的比较

假手术组

模型组

胃炎饮高剂量组

胃炎饮低剂量组

奥美拉唑组

2.4各组大鼠胃黏膜PGE2含量的比较与假手术组比较，模型组大鼠胃黏膜PGE2含量明显下降〔(108.12±26.52) vs (211.25±24.28)pg/mg,P<0.01〕；与模型组比较，各治疗组均可明显升高PGE2含量(P<0.01)；各治疗组间比较，胃炎饮高剂量组PGE2含量〔(190.37±24.34)pg/mg〕明显高于奥美拉唑组〔(156.50±23.42)pg/mg〕和胃炎饮低剂量组〔(164.25±17.71)pg/mg,P<0.05〕。

3讨论

胃溃疡的病位在胃，与肝脾等脏腑功能失调密切相关，主要病机为肝郁脾虚，胃失和降，故以疏肝健脾，和胃降逆为主要治法。“胃炎饮”由柴胡、香附、川楝子、元胡、炒白术、茯苓、炙甘草、川连、陈皮、枳壳、姜半夏、姜竹茹等药物组成。方中柴胡为君药，疏肝解郁，理气止痛；香附、川楝子、元胡为臣药，重在理气止痛，并加强柴胡疏肝解郁作用；炒白术、茯苓、炙甘草健脾益气，扶土抑木，川连清利湿热，以防肝郁化火，并佐制香附辛燥太过，四药共为佐药；枳壳、陈皮理气和中，姜竹茹、姜半夏和胃降逆，四药共为使药。上药合用，共达疏肝健脾，和胃降逆的作用。PGE2是公认的胃黏膜修复和保护因子，具有防止各种有害物质对消化道上皮细胞损伤作用。PGE2可通过促进胃黏膜黏液分泌、增加黏膜血流量、刺激胃上皮细胞再生和黏膜基底细胞向表面移行以及抑制胃酸分泌、清除氧自由基、刺激及稳定溶酶体膜等多种机制来保护胃黏膜〔4，5〕。研究表明，通过提高胃溃疡小鼠模型胃黏膜PGE2含量，可降低溃疡指数，促进溃疡愈合〔6〕。本研究结果显示，溃疡形成过程中，胃黏膜合成分泌PGE2功能受损，胃炎饮可促进胃溃疡大鼠胃黏膜PGE2的合成和分泌，提高胃黏膜PGE2含量，增强胃黏膜防御功能，促进溃疡愈合。

参考文献4

1杨牧祥，于文涛，王秉岳，等.胃炎饮治疗胆汁反流性胃炎116例临床疗效观察〔J〕.中国现代药物应用，2009；3(15)：73-4.

2田元祥.杨牧祥教授对胃脘痛的认识及诊治经验〔J〕.河北中医，2007；29(4)：293-6.

3鄢顺琴.胃痛灵保护胃黏膜作用及对胃溃疡愈合质量的影响〔J〕.中国中西医结合杂志，1998；15(10)：612-4.

4苏克雷，王晓娜，朱方石.胃萎Ⅰ号颗粒对急性胃黏膜损伤模型大鼠胃黏膜的保护作用研究〔J〕.辽宁中医杂志，2013；40(2)：334-6.

5李红艳，王道坤，段永强，等.景芪愈溃胶囊对大鼠胃溃疡愈合质量及PGE2、EGF的影响〔J〕.中医临床研究，2013；5(5)：4-7.

6徐德军，王丹，兰艳.中药复方对无水乙醇型胃溃疡小鼠血清一氧化氮和胃黏膜组织前列腺素E2表达的影响〔J〕.中国老年学杂志，2012；32(7)：1433-4.

〔2014-06-09修回〕

(编辑安冉冉/曹梦园)

通讯作者：方朝义(1965-)，男，博士，教授，主要从事呼吸系统及消化系统疾病研究。

基金项目：河北省中医药管理局科研计划资助项目(No.2011008)

中图分类号〔〕R573.1〔