HPLC法同时测定蒙古山萝卜绿原酸、金丝桃苷的含量△

2016-01-27白音夫

中国民族医药杂志 2016年11期

关键词：桃苷金丝绿原

杜鹃白音夫

(1.内蒙古自治区中医医院，内蒙古呼和浩特 010020； 2.内蒙古自治区中医药研究所，内蒙古呼和浩特 010020)

HPLC法同时测定蒙古山萝卜绿原酸、金丝桃苷的含量△

杜鹃1白音夫2*

(1.内蒙古自治区中医医院，内蒙古呼和浩特 010020； 2.内蒙古自治区中医药研究所，内蒙古呼和浩特 010020)

目的：HPLC法同时测定药材中绿原酸、金丝桃苷的含量。方法：采用HPLC法测定；流动相为乙腈-水-磷酸(12：88：0.1)，流速1.0mL/min，检测波长为350nm，柱温为30℃。结果：绿原酸在1.5 ～48 μg/mL；金丝桃苷在1.8～120μg/mL范围内呈良好的线性关系，r=0.999；绿原酸、金丝桃苷平均回收率分别为102.2%、104.21%。结论：4种不同来源药材，绿原酸、金丝桃苷平均含量分别为0.375%、0.048%。该方法快捷、简便、准确可作为药材质量评价方法。

HPLC法；蒙古山萝卜；绿原酸；金丝桃苷

蒙古山罗卜Scabiosa comosa Fisch是传统蒙医药治疗肝病的药材，可清肝明目，用于肝病，与其它药材配伍可治疗多种肝病[1]。药材含黄酮类化合物，绿原酸是主要成分之一[2]。本文用HPLC法测定药材中绿原酸、金丝桃苷含量，以期为药材质量评价提供简便快速。

1 仪器与试剂

1.1 仪器：1100型高效液相色谱仪 (美国安捷伦公司)，TJ-912型色谱分析平台(太极计算机公司)，IN-180型柱温箱(上海英泰科技研究所)，色谱柱(0203030兰州化物所)，电子天平(梅特勒)。

1.2 试药：绿原酸、金丝桃苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯化水；药材采自内蒙古大青山圣水梁、灰腾梁、南天门林场与市售。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件：ODS-C18柱(150mm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-水-磷酸(12：88：0.1)；流速：1mL·min-1；温度：30℃；检测波长：350nm；进样量10μL。在此条件下待测组分可达到基线分离。样品中绿原酸、金丝桃苷与其它组分有较好的分离，见图1。

2.2 对照品溶液的制备：精密称取绿原酸、金丝桃苷对照品适量，加甲醇分别制成0.12 mg/mL、0.15mg/mL的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备：取本品粉碎过100目筛，精密称定200mg，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称重，超声处理50min，放冷，称重，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液备用，即得。

2.4 线性关系考察：精密分别量取绿原酸、金丝桃苷对照品溶液0.125，0.25，0.5，1，2，4mL和0.125，0.25，0.5，1，2， 4，8mL，加到10mL量瓶内，甲醇稀释至刻度，摇匀，按色谱条件测定峰面积；以峰面积为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)做线性回归, 回归方程分别为Y=3574745-285223X，r=0.999 ；Y= 23257367X -484647,r=0.999。结果表明，绿原酸、金丝桃苷分别在1.5 ～48 μg/mL、1.8～120μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验：吸取同一批供试品溶液，在上述色谱条件下重复进样6次，测得绿原酸、金丝桃苷峰面积RSD分别为0.84%、0.96%。

2.6 稳定性实验：取同一份供试品溶液，分别在0，2，4，8，12h进样测定峰面积，计算绿原酸金、丝桃苷平均质量分数，其RSD分别为0.93%、1.21%。结果表明，供试品在12h内稳定。

2.7 重复性实验：取同批药材(圣水梁)按2.3项下平行制备6份样品溶液，并按2.1项下测定，绿原酸平均含量为0.41%，RSD=1.13%；金丝桃苷平均含量为0.07%，RSD=1.24%；

2.8 加样回收率实验：取同批药材(圣水梁)已知含量的样品6份，每份取约100mg，精密称定，分别精密加入绿原酸对照品溶液2mL (0.22 mg/mL)，金丝桃苷对照品溶液1 mL(0.075 mg/mL)，按2.3项下制备样品溶液，同法操作，测定含量，计算回收率。绿原酸平均回收率102.2%，RSD=1.04%；金丝桃苷平均回收率为104.21%，RSD=1.26%

2.9 药材测定：取不同采集点药材制备供试品溶液，同时取对照品溶液随行对照，按拟定的色谱条件测定绿原酸、金丝桃苷含量。结果，大青山圣水梁0.41%、0.07%，灰腾梁0.32%、0.03%，南天门林场0.47%、0.08%，市售0.30%、0.01%；平均含量0.375%、0.048%。