核心抗原酶联免疫检测在丙型肝炎病毒感染诊断中的价值

陈伟岳　俞勇　杜蓬

315000 宁波市中心血站(陈伟岳)；315000 宁波市第二医院输血科(俞勇); 310053 杭州，浙江医学高等专科学校(杜蓬)



核心抗原酶联免疫检测在丙型肝炎病毒感染诊断中的价值

陈伟岳俞勇杜蓬

315000 宁波市中心血站(陈伟岳)；315000 宁波市第二医院输血科(俞勇); 310053 杭州，浙江医学高等专科学校(杜蓬)

【摘要】目的 探讨丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)酶联免疫检测(ELISA)在丙型肝炎早期诊断中的应用价值。方法 83例抗-HCV阳性、500例ALT异常但抗-HCV阴性血清同时进行HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR。结果83例抗-HCV阳性血清中HCV-cAg和HCV RNA阳性分别为33例和36例，其中32例共阳性；500例ALT异常但抗-HCV阴性的血清中有3例HCV-cAg和HCV RNA同为阳性。抗-HCV阳性和阴性血清HCV-cAg和HCV RNA检测结果符合率分别为94.0%和100%。结论HCV-cAg ELISA敏感性与HCV RT-PCR类似，能够有效缩短窗口期，操作简便，费用低廉，在丙型肝炎早期诊断中具有很好的前景。

【主题词】丙型肝炎病毒；核心抗原；酶联免疫吸附测定

Fund program: Grants from the Second batch of Medicine Key Project of Zhejiang Province

丙型肝炎(简称丙肝)是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)引起的传染病，全球的HCV感染率约为3%[1]，虽然我国人群中HCV感染率相对较低，但鉴于我国人口基数大，人群中HCV感染人数接近2980万[2]。丙型肝炎在早期临床表现上与乙型肝炎相比，症状较轻，但是其较乙型肝炎易早期出现肝硬化，导致肝癌，病死率较高[3]。由于丙肝预后不良且目前没有特效的治疗药物，丙肝传播已经成为公共卫生问题，早期诊断是防止HCV传播的有效手段[3]。由于丙肝主要通过血液传播[2]，因此建立HCV感染的早期诊断方法对无偿献血者、手术前或输血前患者进行HCV感染筛查以便阻断血液传播显得尤为重要。文献报道，HCV感染约2周血清即可检测到HCV RNA，而HCV核心抗原(HCV-cAg)仅比HCV RNA晚1～2 d，鉴于HCV RNA检测受实验室硬件和人员配备等限制，HCV-cAg检测有理由成为HCV感染早期检测的侯选指标[4-7]。本研究收集了83例抗-HCV阳性、500例ALT异常但抗-HCV阴性的血清标本，同时用酶联免疫法(ELISA)检测HCV-cAg和RT-PCR检测HCV RNA，用于评价HCV-cAg ELISA在丙肝早期诊断中的价值。

1资料与方法

1.1样本来源83份抗-HCV阳性血清来自宁波市中心血站无偿献血者，年龄18～55周岁，平均年龄29.11±10.37岁。500例ALT异常但抗-HCV阴性的血清来自宁波市第二医院输血科，年龄18～85周岁，平均年龄32.33±15.43岁。

1.2检测试剂HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR试剂盒分别购自山东莱博公司和中山大学中山医学院达安基因诊断中心。

1.2检测方法速率法检测ALT，酶联免疫法(ELISA)检测抗-HCV和HCV-cAg，RT-PCR检测HCV RNA，使用仪器为美国ABI公司的7500型荧光定量PCR仪，严格按试剂盒说明书进行操作，病毒载量<103拷贝/ml判定HCV RNA定量结果为阴性，103～105拷贝/ml为少量病毒复制，106～107拷贝/ml为中量病毒复制，>1.0×108拷贝/ml判定为大量病毒复制。所有试剂均在有效期内使用。HCV RNA检测阳性判定为HCV确证阳性。

1.4统计学方法应用统计软件spss13.0对相关数据进行统计学分析处理，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR结果83例抗-HCV阳性血清标本中，分别有33和36例HCV-cAg和HCV RNA阳性，阳性率分别为39.8%和43.4%。500例ALT异常但抗-HCV阴性的血清有3例HCV-cAg和HCV RNA均阳性。

2.2HCV-cAg和HCV RNA检测结果的符合率抗-HCV阳性血标本中HCV-cAg和HCV RNA均为阳性的32例，同为阴性的46例，抗-HCV阳性血标本中HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR符合率为94.0%；另有1例HCV-cAg阳性而HCV RNA阴性，4例HCV RNA阳性而HCV-cAg阴性。500例ALT异常但抗-HCV阴性的血清HCV-cAg和HCV RNA检测结果完全一致，HCV-cAg和HCV RNA 符合率为100%。HCV RNA检测阳性判定为HCV确证阳性，HCV-cAg ELISA方法的灵敏度为89.7%(35/39)，特异性为99.8%(543/544)。

2.3HCV RNA拷贝数与HCV-cAg阳性检出率的相关性39例HCV RNA阳性血液中有35例HCV-cAg阳性，HCV-cAg ELISA阳性检出率为89.7%。观察不同HCV RNA拷贝数血清样本HCV-cAg ELISA阳性检出率，发现35例HCV-cAg和HCV RNA均阳性样本，HCV RNA拷贝数较高≥1.0×105拷贝/ml，而4例HCV RNA阳性但HCV-cAg阴性样本HCV RNA拷贝数较低，其中3例为103数量级。

3讨论

ELISA检测抗-HCV仍是我国目前判断HCV感染的常规筛选方法，广泛用于无偿献血者、医院受血者HCV感染筛查及HCV感染实验室诊断，然而HCV感染到血清抗-HCV阳性要经历一个约40～70天的“窗口期”，这一时期ELISA抗-HCV试剂无法检出HCV感染[4-6]。由于“窗口期”存在而导致输血性HCV感染的纠纷国内外都有报道[8, 9]。为减少“窗口期”存在导致的HCV感染发生，欧美国家纷纷推出灵敏度更高的HCV RT-PCR和HCV-cAg ELISA检测HCV感染[4-6, 8-10]。HCV RNA是病毒复制的直接标志，HCV感染后HCV RNA阳性比抗-HCV阳性出现早50d左右，因此RT-PCR检测HCV RNA可作为HCV感染的确认方法，但该方法需要特殊仪器、且人员配备的要求高还受很多因素影响[5, 6]。血清HCV-cAg阳转仅比HCV RNA迟1～2 d，用ELISA检测在仪器、人员配制要求比HCV RT-PCR易于满足，有文献报道HCV-cAg ELISA用于血清抗-HCV阳转前的早期HCV感染的诊断以及HCV感染者治疗前后病毒血症情况的分析[4-7]。我们用HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR检测500例ALT异常但抗-HCV阴性的血清，结果3例HCV RNA阳性，后期跟踪发现这3例患者3周后血清抗-HCV均阳性，提示HCV RT-PCR能先于血清抗-HCV检测到HCV感染，这3例样本HCV-cAg ELISA同样呈现阳性，提示与文献报道[4-6]类似HCV-cAg阳性时间与HCV RNA接近，HCV-cAg ELISA能有效缩短“窗口期”可替代HCV RT-PCR用于HCV感染的早期诊断。另外，我们用HCV-cAg ELISA和HCVRT-PCR同时检测83例抗-HCV阳性血清，结果HCV-cAg ELISA和HCVRT-PCR检测结果符合率为94%，提示HCV-cAg ELISA具有很好的灵敏度，可能替代HCV RT-PCR用于HCV感染的早期诊断，且该方法无需特殊仪器、操作简单，利于基层单位推广。我们在用HCV-cAg ELISA检测抗-HCV 阳性血清时发现，有46例占56.1%患者HCV-cAg和HCV RNA同为阴性，抗-HCV为非保护性抗体，抗-HCV阳性说明患者曾经感染HCV，因此，如果用抗-HCV阳性来筛查无偿献血者血液存在假阳性而造成血源浪费的可能。对46例检抗-HCV 阳性但HCV-cAg和HCV RNA均为阴性患者进行跟踪检测，这些患者3周后血清抗-HCV有1例阳性，其余仍为阴性，提示HCV-cAg ELISA不仅适合HCV感染早期诊断，如果联合抗-HCV检测无偿献血者血液可降低假阳性率并避免血源的不必要浪费。

4参考文献

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通信作者：杜蓬，Email：pdu1145@163.com

DOI：10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2016.01.017

基金项目：浙江省医学重点学科建设计划项目

(收稿日期：2015-09-25)

Value of diagnosis on hepatitis C by ELISA-HCV core antigen detection

ChenWeiyue,YuYong,DuPeng

NingboBloodCenterofZhejiangProvince,Ningbo315000,China(ChenWY);DepartmentofBloodTransfusion,NingboNo.2Hospital,Ningbo315000,China(YuY);ZhejiangMedicalCollege,Hangzhou310053,China(DuP)Correspondingauthor:DuPeng,Email:pdu1145@163.com

【Abstract】ObjectiveTo evaluate the clinically applied valve of HCV core antigen enzyme-linked immunosorbent assay (HCV-cAg ELISA) for early diagnosis of hepatitis C. MethodsBoth HCV RNA and HCV-cAg ELISA were used to detect 83 cases of anti-HCV positive serum samples and 500 cases of anti-HCV negative but ALT abnormal serum samples. ResultsIn the 83 cases of anti-HCV positive serum samples, 33 cases were detectable for HCV-cAg while 36 cases were detectable for HCV RNA, in which 32 cases were double positive for both HCV-cAg and HCV-RNA. In the 500 cases of anti-HCV negative but ALT abnormal serum sample, only 3 cases were detectable for both HCV-cAg and HCV RNA. The coincidence rates of the two methods for detecting the anti-HCV positive serum samples and anti-HCV negative but ALT abnormal serum samples were 94.0% and 100%, respectively. ConclusionThe sensitivity and specificity of HCV-cAg ELISA is similar to that of HCV RT-PCR. The HCV-cAg ELISA has many advantages such as window-phase,decurtation, convenience and lower cost, which enable the assay a good clinically applied prospects for early diagnosis of hepatitis B.

【Key words】Hepatitis C virus; Core antigen; Enzyme-linked immunosorbent assay