血塞通软胶囊活血化瘀的药效学研究

郭沛鑫张　超陈清华刘承明陈　普*.云南中医学院，云南　昆明　650500; .昆明圣火药业集团有限公司，云南　昆明　6507

血塞通软胶囊活血化瘀的药效学研究

郭沛鑫1张超1陈清华1刘承明2陈普1*
1.云南中医学院，云南昆明650500; 2.昆明圣火药业集团有限公司，云南昆明650217

【摘要】目的:对血塞通软胶囊活血化瘀的作用进行药效学评价.方法:采用血塞通软胶囊灌胃给药7d，颈动脉采血观察血塞通软胶囊对正常大鼠血小板聚集及凝血四项指标的影响;采用冰水浴联合皮下注射盐酸肾上腺素的方法制备血瘀大鼠模型，观察血塞通软胶囊对血瘀大鼠血小板聚集及凝血四项指标的影响.结果:血塞通软胶囊(56、28mg/kg)能显著抑制正常大鼠及血瘀大鼠血小板聚集(P＜0. 05)，同时血塞通软胶囊(56mg/kg)能明显延长血瘀大鼠TT和APTT，减少FIB(P＜0. 05).但血塞通软胶囊(56、28、14mg/kg)对正常大鼠凝血四项指标均无明显的影响(P＞0. 05).结论:血塞通软胶囊具活血化瘀作用，其活血化瘀作用可能对视网膜中央静脉栓塞有治疗作用.

【关键词】血塞通软胶囊;血小板聚集;凝血四项;视网膜中央静脉栓塞

Experimental study of the Xuesaitong soft capsule on platelet aggregation and four blood coagulation parmeters in rats

GUO Pei－xin1，ZHANG Chao1，CHEN Qing－hua1，LIU Cheng－ming2，CHEN Pu1*
1. Yunnan University of Traditional Chinese Medicine，Kunming 650500，China; 2. Kunming Shenghuo Pharmaceutical Holdings Inc，Kunming 650217，China

Abstract:Objective To observe the effect of Xuesaitong soft capsule(XST)on platelet aggregation and four blood coagulation parmeters in normal and blood stasis rats，and provide the experimental basis for the treatment of central retinal vein occlusion．Methods Xuesaitong soft capsule i．g．in rats for 7days．Carotid artery blood in normal rats was used to assay platelet aggregation and four blood coagulation parmeters．The blood stasis rat model were established by epinephrine hydrochloride subcu－taneous injection and ice water immertion．Platelet aggregation and four blood coagulation parmeters in blood stasis rats were observed．Results XST(56、28mg/kg)could obviously prevent platelet aggregation in normal and blood stasis rats(P＜0. 05)．XST(56mg/kg)could significantly increase the time of TT and APTT(P＜0. 05)，and reduce the content of FIB in blood stasis rats(P＜0. 05)．But XST(56、28、14mg/kg)had no effect on four blood coagulation parmeters in normal rats(P＞0. 05)．Conclusion XST can improve the platelet aggregation and four blood coagulation parmeters in the hypercoagulable state，and indicate that XST has the treatment effect of central retinal vein occlusion．

Key words:Xuesaitong soft capsule; platelet aggregation; four blood coagulation parmeters; central retinal vein occlusion

血塞通软胶囊为临床常用活血化瘀类中成药，具有活血祛瘀、通脉活络的功效.临床用于瘀血闭脉络证的中风中经络恢复期，症见偏瘫、半身不遂、口舌歪斜、舌强言蹇或不语.或用于心血淤阻型冠心病心绞痛，证见胸闷、胸痛、心慌、舌紫暗或有瘀斑.近年来，亦有文献报道血塞通用于治疗视网膜中央静脉栓塞，取得良好治疗效果[1]，但未见足够的实验数据支持.本课题组前期研究表明，血塞通软胶囊对家兔眼球微循环障碍和血瘀大鼠血液流变学均有良好的改善作用.视网膜中央静脉栓塞本质上属于血栓性疾病，与血小板聚集、凝血功能障碍等密切相关.因此，本研究针对上述症状设计实验，对血塞通软胶囊活血化瘀的功效进行药效学研究，有利于进一步阐明血塞通软胶囊治疗视网膜中央静脉栓塞的实验基础，扩大血塞通软胶囊的适应症，以期更好的指导临床用药.

1　材料与方法

1. 1试验药物血塞通软胶囊(批号: 20100915，昆明圣火药业(集团)有限公司提供)，临用时以0. 5%的吐温溶液配制;复方血栓通胶囊(批号: 100716，广东众生药业股份有限公司生产);阿司匹林肠溶片(批号: 20100681，昆明云健制药有限公司生产).

1. 2动物健康SD大鼠，由昆明医学院实验动物中心提供，动物合格证号: SCXK(滇)2005－0008;健康昆明种小鼠，由昆明医学院实验动物中心提供，动物合格证号: SCXK(滇)2005－0008.

1. 3试剂乌来糖(乌拉坦)(批号: T20080917，国药集团化学试剂有限公司);盐酸肾上腺素注射液(批号: 1002071，天津药业集团新郑股份有限公司);Ⅰ型胶原蛋白(Sigma公司产);肝素钠注射液(批号: 1004107，江苏万邦生化医药股份有限公司);伊文思蓝(东京化成工业株式会社);其余试剂均为分析纯.

1. 4仪器C2000－4四通道磁珠法血凝仪(北京普利生仪器有限公司); LBY－NJ4血小板聚集仪(四通道)(北京普利生仪器有限公司); L500型离心机(湖南湘仪离心机仪器有限公司).

1. 5方法

1. 5. 1血塞通软胶囊对正常大鼠血小板聚集及凝血四项指

标的影响[2－3]取健康SD大鼠70只，雌雄各半，体重180 ～220g，按体重随机分为7组，每组10只，即空白对照组、吐温溶剂组、阿司匹林组(11. 67mg/kg)、复方血栓通胶囊组(525mg/kg)、血塞通软胶囊高剂量组(56mg/kg)、中剂量组(28mg/kg)、低剂量组(14mg/kg).各组动物按上述剂量灌胃给药，空白对照组灌胃相同体积纯水，吐温溶剂组灌相同体积的吐温溶剂，每日1次，连续7d，末次给药后1h，各组动物以乌拉坦按1g/kg的剂量腹腔注射进行麻醉，固定于解剖板上，行颈总动脉插管采血.将采得血液分为二份，一份以3. 8%枸橼酸钠按9∶1(全血∶3. 8%枸橼酸钠)的比例抗凝，800r/min，离心10min，分离富血小板血浆(PRP)，余下抗凝血再以3000r/min，离心10min，分离贫血小板血浆(PPP).以I型胶原为血小板聚集诱导剂，按血小板聚集仪操作说明测定各组动物的血小板聚集率;另一份以3. 8%枸橼酸钠抗凝(全血∶3. 8%枸橼酸钠=9∶1)，充分混合，3000r/min，离心10min，分离血浆，以血凝仪测定凝血四项指标PT、TT、APTT、FIB，以此评价药物的抗凝血作用.

1. 5. 2血塞通软胶囊对血瘀大鼠血小板聚集及凝血四项指标的影响取健康SD大鼠80只，雌雄各半，体重180～220g，按体重分层随机分为8组，即空白对照组、模型对照组、吐温溶剂组、阿司匹林组(11. 67mg/kg)、复方血栓通胶囊组(525mg/kg)、血塞通软胶囊高剂量组(56mg/kg)、中剂量组(28mg/kg)、低剂量组(14mg/kg).各组动物按上述剂量灌胃给药，空白对照组、模型对照组灌胃相同体积纯水，吐温溶剂组灌相同体积0. 5%的吐温溶剂，1次/d，连续7d.除空白对照组以外的各组动物于第6天灌胃给药1h后皮下注射肾上腺素0. 8mg/kg，注射肾上腺素2h后，将动物放入冰水中浸泡5min(冰水温度控制在4℃±1℃)，2h后再次皮下注射肾上腺素0. 8mg/kg，造成血瘀证模型[4].第7天末次给药后1h，各组动物以乌拉坦按1g/kg的剂量腹腔注射进行麻醉，固定于解剖板上，行颈总动脉插管采血.同法测定血小板聚集及凝血四项指标.

1. 5. 3统计分析数据以“均数±标准差”(x±s)表示，采用SPSS13. 0统计软件进行统计分析，数据呈正态分布时进行单因素方差分析，不呈正态分布采用非参数检验.

2　结果

2. 1血塞通软胶囊对正常大鼠血小板聚集及凝血四项指标的影响实验结果表明，在对正常大鼠血小板聚集的影响实验中(表1)，与空白对照组比较，阳性药阿司匹林组和复方血栓通胶囊组能明显抑制大鼠血小板聚集(P＜0. 01)，同时，血塞通软胶囊高、中剂量组(56、28mg/kg)均对大鼠血小板聚集有显著的抑制作用(P＜0. 05)，血塞通软胶囊低剂量组(14mg/kg)虽然也有抑制血小板聚集的趋势，但与空白对照组比较，差异无统计学意义(P＞0. 05).在对正常大鼠凝血四项指标的影响实验中(表2)，与空白对照组比较，阿司匹林能明显延长大鼠的PT值(P ＜0. 01)，血塞通软胶囊高、中、低剂量组(56、28、14mg/kg)对凝血四项指标PT、TT、APTT、FIB无明显影响(P＞0. 05).吐温溶剂组对血小板聚集和凝血四项指标均无明显影响，与空白对照组比较，差异无统计学意义(P ＞0. 05).结果见表1、表2.

表1　血塞通软胶囊对正常大鼠血小板聚集的影响(x±s，n =10)

表2　血塞通软胶囊对正常大鼠凝血四项指标的影响(x±s，n =10)

2. 2血塞通软胶囊对血瘀大鼠血小板聚集及凝血四项指标的影响实验结果表明，与空白对照组比较，模型对照组大鼠血小板聚集率明显升高(P＜0. 05)，TT、APTT明显缩短(P＜0. 05)，FIB明显增加(P＜0. 05)，提示采用冰水浴联合皮下注射盐酸肾上腺素的方法制备血瘀大鼠模型成功.在对血瘀证大鼠血小板聚集的影响实验中(表3)，与模型对照组比较，复方血栓通胶囊组对血瘀大鼠血小板聚集具有明显抑制作用(P＜0. 05)，同时，血塞通软胶囊高、中剂量组(56、28mg/kg)均能显著抑制血瘀证大鼠血小板聚集(P＜0. 05)，血塞通软胶囊低剂量组(14mg/kg)对血小板聚集无明显影响(P＞0. 05);在对血瘀证大鼠凝血四项指标的影响实验中(表4)，与模型对照组比较，阿司匹林能明显延长APTT(P＜0. 05)，减少FIB(P＜0. 05)，复方血栓通胶囊能明显延长TT(P＜0. 05)，减少FIB(P＜0. 05)，同时，血塞通软胶囊高剂量(56mg/kg)能明显延长TT和APTT，减少FIB(P＜0. 05)，血塞通软胶囊中、低剂量组(28、14mg/kg)对凝血四项指标无明显影响(P＞0. 05).吐温溶剂组对血瘀证大鼠血小板聚集和

凝血四项指标均无明显影响，与模型对照组比较，差异无统计学意义(P＞0. 05).结果见表3、表4.

表3　血塞通软胶囊对血瘀证大鼠血小板聚集的影响(x±s，n =10)

注:与模型对照组比较，*P＜0. 05.

3　讨论

视网膜中央静脉栓塞是临床上常见的视网膜血管疾病，患病人群约为0. 7%～1. 6%[5].栓塞多发生在筛板或紧邻其后的视网膜中央静脉内，大多为血栓形成[6].而血小板的活化、聚集在血栓形成和发展过程过起着重要作用，在临床上，许多血栓性疾病如心脑血管疾病等的血小板聚集率增高早已被人们所认识，因此，进行血小板功能的测定是相当必要的，其血小板聚集功能亢进提示其可能与血栓性疾病有关.同时，血液高凝状态、凝血、止血，是临床最常遇到的情况.血栓前状态和血栓疾病的检查都离不开对凝血状态的了解.

表4　血塞通软胶囊对血瘀证大鼠凝血四项指标的影响(x±s，n =10)

研究结果表明，血塞通软胶囊高剂量组和中剂量组(56、28mg/kg)能显著抑制正常大鼠和血瘀证大鼠的血小板聚集(P＜0. 05)，其高剂量组(56mg/kg)能明显延长血瘀证大鼠凝血四项中的TT和APTT，减少FIB(P＜0. 05)，但血塞通软胶囊(56、28、14mg/kg)对正常大鼠凝血四项指标无明显改变(P＞0. 05).结果提示血塞通软胶囊抗血小板聚集和改善凝血四项指标的作用可能是其治疗视网膜中央静脉栓塞的机制之一.其改善凝血四项指标仅在血液高凝状态下起作用，对正常血液状态却无影响，这在临床治疗上有一定意义.

参考文献

[1]黄海虹．血塞通治疗视网膜中央静脉栓塞[J]．中西医结合眼科杂志，1998，16(3): 174．

[2]岳媛，窦丽丽，畅瑞苗，等．益心脑滴丸对血小板聚集、血栓形成及凝血作用的影响[J]．中国实验方剂学杂志，2013，19(7): 241－244．

[3]李志强，姜广坤，李凤金，等．参七益心胶囊对急性心肌缺血大鼠血液流变学和凝血四项及SOD、MDA的影响[J]．中医药学报，2011，39(6): 40－42．

[4]何少玲，张荣，赵威，等．陈皮、姜提取物对血瘀证大鼠血液流变学和血小板聚集率的影响[J]．中药药理与临床，2012，28(1): 11－13．

[5]Mitchell P，Smith W，Chang A．Prevalence and associations of retinal vein occlusion in Australia．The Blue Mountains Eye Study[J]．Arch Ophthalmol，1996，114(10): 1243－1247．

[6]赵堪兴．眼科学[M]．7版．北京:人民卫生出版社，2010: 202－203．

收稿日期:( 2014. 11. 25)

通信作者:陈普(1978－)，男，汉族，云南宣威人，高级实验师.主要从事民族医药研究及实验教学工作.E－mail: chenynkm@126. com

基金项目:云南省重点学科“民族医学”学科资助(100513).

【文章编号】1007－8517(2015)02－0017－03

【文献标志码】A

【中图分类号】R285. 5