HPLC法测定乌兰温都苏－10胶囊中丹酚酸B的含量

2016-01-26李洪泽王玉华韩风雨孔新颖刘福青刘内蒙古天奇中蒙制药股份有限公司内蒙古0000内蒙古医学院药学系内蒙古0000内蒙古天奇药业投资集团有限公司内蒙古0000内蒙古赤峰陆尔草中蒙药科技有限公司内蒙古0000内蒙古蒙吉药业科技有限责任公司内蒙古0000内蒙古博泰现代蒙药制剂研究开发有限公司内蒙古0000

中国民族民间医药 2015年2期

关键词：乌兰酚酸甲醇

李洪泽王玉华韩风雨孔新颖刘福青刘　霞.内蒙古天奇中蒙制药股份有限公司，内蒙古　0000; ．内蒙古医学院药学系，内蒙古　0000;.内蒙古天奇药业投资(集团)有限公司，内蒙古　0000; .内蒙古赤峰陆尔草中蒙药科技有限公司，内蒙古　0000;.内蒙古蒙吉药业科技有限责任公司，内蒙古　0000; ．内蒙古博泰现代蒙药制剂研究开发有限公司，内蒙古　0000

李洪泽1王玉华2韩风雨3孔新颖4刘福青5刘霞6
1.内蒙古天奇中蒙制药股份有限公司，内蒙古024000; 2．内蒙古医学院药学系，内蒙古024000;
3.内蒙古天奇药业投资(集团)有限公司，内蒙古024000; 4.内蒙古赤峰陆尔草中蒙药科技有限公司，内蒙古024000;
5.内蒙古蒙吉药业科技有限责任公司，内蒙古024000; 6．内蒙古博泰现代蒙药制剂研究开发有限公司，内蒙古024000

【摘要】目的:建立高效液相色谱法测定乌兰温都苏－10胶囊中丹酚酸B含量的方法.方法:采用HPLC法，色谱柱为迪马C18柱(5μm，4. 6mm×250mm).以含0. 017%甲酸溶液为流动相A，以甲醇－乙腈(30∶10)为流动相B，进行梯度洗脱，流速为1. 0ml/min，检测波长为286nm.结果:丹酚酸B在117. 02～1170. 2ng范围内呈良好的线性关系，r =1. 0000，平均回收率为101. 0%，RSD为1. 88%.结论:该测定方法操作简便、结果准确、重现性好，可用于乌兰温都苏－10胶囊的质量控制.

【关键词】乌兰温都苏－10胶囊;丹酚酸B; HPLC

乌兰温都苏－10胶囊是由十味中蒙药材组成，功效主治:调心“赫依”、血相搏、活血、安心、化脂.用于心烦、心区刺痛，心供血不足等.丹参为处方中的君药.本实验以丹酚酸B为检测指标，用HPLC法进行测定.在经实验确定了提取条件和色谱条件的前提下，进行了方法学考察.

1　仪器与试剂

1. 1仪器日本－2000高效液相色谱仪，检测器: DAD检测器，工作站: EZChrom Elite for Hitachi Version.

1. 2试剂与试药乌兰温都苏－10胶囊(批号: 20100804，内蒙古天奇中蒙制药股份有限公司);丹酚酸B对照品(批号: 111562－200807，中国药品生物制品检定所);甲醇、乙腈为色谱纯;水为超纯水;其它试剂均为分析纯.

2　方法与结果

2. 1色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以含0. 017%甲酸溶液为流动相A，以甲醇－乙腈(30∶10)为流动相B，按下表中规定进行梯度洗脱;流速: 1ml/min;检测波长: 286nm;柱温: 30℃.理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于4000.

时间(min)　　流动相A　　流动相B 0～23　60　40 23～28　0　100 28～45　0　100 45～47　60　40 47～60　60　40

2. 2溶液的制备

2. 2. 1对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品适量，置棕色量瓶中，加75%甲醇制成每1ml含丹酚酸B 60μg的溶液，即得.

2. 2. 2供试品溶液的制备取本品内容物，混匀，取约0. 25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加75%甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率220w，频率40KHz)30min，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得.

2. 2. 3阴性样品溶液的制备取缺丹参的其他药材，按本品制备工艺，制备阴性样品.精密称取阴性样品适量，按“供试品溶液的制备方法”制成阴性溶液.

2. 3方法学考察

2. 3. 1专属性试验分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液照溶液各10μl，按上述色谱条件进样测定.结果供试品色谱中，在与对照品相应的保留时间处有相应的色谱峰，而阴性对照溶液中相应保留时间处没有色谱峰.方法的专属性好.色谱图见图1.

图1　专属性试验色谱图

2.3.2线性范围考察精密称取丹酚酸B对照品3.01mg(含量为97.2%)，置5ml量瓶中，加75%甲醇溶解并稀释至刻度，精密吸取1ml浓溶液到10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度.精密吸取2、5、10、15、20μl，分别注入液相色谱仪中，按“色谱条件”条件测定，记录丹酚酸B峰面积积分值(Y).以进样量(X:μg)对峰面积积分值(Y)进行回归分析.回归方程为: Y =4193.9X +5200.6，R =1.0000，丹酚酸B在117.02 ～1170.2ng范围内与峰面积积分值呈良好线性关系.

2. 3. 3精密度试验

2. 3. 3. 1对照品精密度试验丹酚酸B对照品溶液(浓度为58. 51μg/ml)，进样10μl，按“2. 1色谱条件”项下方法测定.结果见表1.

表1　对照品精密度试验结果

表1的结果表明，RSD为1. 35%，说明丹酚酸B对照品溶液精密度好.2. 3. 3. 2供试品精密度试验取本品(批号: 20100804)约0. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，超声提取30min，过滤，取续滤液2ml定容到5ml的量瓶中，以75%甲醇稀释至刻度，按以上色谱条件测定，连续进样6次，测得丹酚酸B峰面积积分值.结果见表2.

表2　供试品精密度试验结果

表2的结果表明，RSD为1. 75%，说明供试品溶液测定的精密度好.

2. 3. 4稳定性试验取本品约0. 25g，精密称定，按“2. 2. 2供试品溶液的制备”项下的方法制备溶液，分别于0、2、4、8、12、24、48h进样，记录峰面积积分值.结果见表3.

表3　稳定性试验结果

表3的结果表明，供试品溶液在48h内稳定.

2. 3. 5重复性试验取同一批次供试品粉末(批号: 20100806)6份，每份取样量约0. 25g，精密称定，按“2. 2. 2供试品溶液的制备”项下的方法制备溶液，进样10μl，按“2. 1色谱条件”条件测定，计算含量.结果见表4.

2. 3. 6加样回收试验精密称取供试品(批号: 20100806;含量为10. 57mg/g)约0. 1250g，共9份，精密称定，分成3组，每组3份.分别精密加入丹酚酸B对照品1. 069、1. 069、1. 069、1. 306、1. 306、1. 306、1. 603、1. 603、1. 544mg.按“2. 2. 2供试品溶液的制备”项下的方法制备溶液，进样10μl，按“2. 1色谱条件”条件测定，计算加样回收率.结果见表5.

表4　重复性试验结果

表4的数据表明，供试品测定的重复性好.

表5　加样回收试验结果

表5的结果显示，RSD为1. 88%，平均回收率101. 0%，表明方法的准确度好.

2. 4供试品的测定取三批上市包装条件的中试样品(批号: 20100805、20100806、20100807)，按“2. 2. 2供试品溶液的制备”项下的方法制备溶液，进样10μl，按“2. 1色谱条件”条件测定，计算含量.结果见表6

表6　三批供试品含量测定结果

以上实验结果显示，三批样品的含量没有明显差异.

2. 5含量限度制定经测定丹参药材中丹酚酸B(C36H30O16)含量为68. 8mg/g，三批供试品的均含量平均为10. 97mg/g，按丹参药材含量68. 8mg/g计算转移率为59. 63%.《中国药典》2010年版一部“丹参”[1]药材含量测定项下规定含丹酚酸B不得少于3. 0%，考虑到药材的来源、贮藏以及在生产中损耗等因素，暂定为本品每粒含丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，不得少于1. 7mg.