雷公藤多苷灌胃对大鼠糖尿病肾病的治疗作用及机制

赵阳，刘佳琨，陈强，徐杰，王天生

(1天津市第四中心医院，天津300140；2天津市第五中心医院)



雷公藤多苷灌胃对大鼠糖尿病肾病的治疗作用及机制

赵阳1，刘佳琨1，陈强1，徐杰1，王天生2

(1天津市第四中心医院，天津300140；2天津市第五中心医院)

摘要：目的观察雷公藤多苷灌胃对大鼠糖尿病肾病的治疗作用，并探讨其作用机制。方法将45只Wistar大鼠随机分为正常组、对照组和实验组，各15只。对照组和实验组予以链脲佐菌素55 mg/kg腹腔内注射建立糖尿病肾病大鼠模型，正常组给予同等剂量的生理盐水腹腔注射。建模成功后，实验组大鼠给予雷公藤多苷1.8 g/(kg·d)灌胃，1次/d；正常组及对照组给予同等剂量的生理盐水灌胃，1次/d。三组大鼠自由饮水进食，不给予任何降糖处理。三组大鼠灌胃前(治疗前)及灌胃12周后(治疗后)分别检测其血糖、24小时尿蛋白、血清肌酐和尿素氮。同时于灌胃12周末处死大鼠，检测其肾皮质结缔组织生长因子(CTGF)。结果实验组和对照组大鼠治疗前24小时尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平高于正常组(P均<0.05)；实验组大鼠治疗后24小时尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平较治疗前降低(P均<0.05)，且低于对照组治疗后(P均<0.05)。正常组、实验组和对照组治疗后大鼠肾皮质CTGF相对表达量分别为0.18±0.03、0.52±0.07、0.69±0.08，实验组、对照组与正常组相比，实验组与对照组相比，P均<0.05。治疗后实验组大鼠24小时蛋白尿与肾组织中CTGF表达水平呈正相关(r=0.54,P<0.05)。结论 雷公藤多苷灌胃对大鼠糖尿病肾病有明显的治疗作用，可能通过下调糖尿病大鼠肾脏CTGF表达抑制蛋白尿、保护肾功能。

关键词：雷公藤多苷；糖尿病；糖尿病大鼠；结缔组织因子；肾功能；蛋白尿；动物实验

糖尿病肾病是糖尿病患者最为常见的肾脏并发症，并已成为肾功能衰竭的重要原因[1]。我国糖尿病肾病的发病率呈现明显上升趋势，目前已成为终末期肾病的第二位原因，仅次于各种肾小球肾炎。由于糖尿病肾病患者存在复杂的代谢紊乱，一旦发展到终末期肾病，往往比其他肾病的治疗更加棘手。因此，及时治疗糖尿病肾病意义重大。目前糖尿病肾病确切发病原因及机制并不十分清楚，大多数研究认为与高血糖、肾素-血管紧张素-醛固酮系统紊乱、肾脏血流动力学紊乱有关[2]。近年来的研究[3,4]显示，结缔组织生长因子(CTGF)在糖尿病肾病的发病中也发挥重要作用。2014年1月10日～ 2014年6月10日，我们观察了雷公藤多苷灌胃对大鼠糖尿病肾病的治疗作用，并对其作用机制进行了探讨。现将结果报告如下。

1材料与方法

1.1动物、药品、试剂及仪器清洁级Wistar大鼠45只，购自天津医科大学实验动物中心。雷公藤多苷，购自远大医药(中国)有限公司。羊抗鼠CTGF单隆抗体，购自美国Cell Signaling公司；羊抗鼠β-actin抗体，购自Sigma公司；链脲佐菌素，购自Sigma公司。台式微型离心机(Mierofuge18)，购自BechmanCoulter公司；涡旋振荡器(Vortex-GenieZ)，购自美国Scilnd公司；全自动生化分析仪，购自美国贝克曼库尔特公司。

1.2大鼠分组、模型制作及给药将45只清洁级Wistar大鼠随机分为正常组、对照组和实验组，各15只。对照组和实验组予以链脲佐菌素55 mg/kg腹腔内注射建立糖尿病肾病大鼠模型，正常组给予同等剂量的生理盐水腹腔注射。建模成功后实验组大鼠给予雷公藤多苷1.8 g/(kg·d)灌胃，1次/d；正常组及对照组给予同等剂量的生理盐水灌胃，1次/d。三组大鼠自由饮水进食，不给予任何降糖处理。

1.3血糖、24小时尿蛋白、血清肌酐和尿素氮、肾皮质CTGF检测三组大鼠灌胃前(治疗前)及灌胃12周时(治疗后)分别检测其血糖、24小时尿蛋白、血清肌酐和尿素氮。同时于灌胃12周末处死大鼠，采用免疫印迹法检测其肾皮质CTGF。

2结果

2.1治疗前后三组大鼠血糖、24小时尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平比较治疗前实验组和对照组大鼠24小时尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平高于正常组(P均<0.05)；治疗后实验组大鼠24小时尿蛋白、血清肌酐和尿素氮较治疗前明显降低(P均<0.05)，且低于对照组治疗后(P均<0.05)。详见表1。

表1　 三组大鼠治疗前后血糖、24小时尿蛋白、

注：与同组治疗前相比，*P<0.05；与正常组和对照组治疗后相比，#P<0.05。

2.2治疗后三组大鼠肾皮质CTGF表达比较治疗后正常组、实验组和对照组大鼠肾皮质CTGF相对表达量分别为0.18±0.03、0.52±0.07、0.69±0.08；实验组和对照组大鼠肾皮质CTGF与正常组相比，P均<0.05；实验组CTGF与对照组相比，P<0.05。

2.3治疗后实验组大鼠24小时蛋白尿与肾皮质CTGF表达水平的相关性实验组大鼠24小时蛋白尿与肾组织中CTGF表达水平呈正相关(r=0.54,P<0.05)。

3讨论

糖尿病肾病的病因和发病机制不清，目前认为是多因素参与，在一定的遗传背景以及部分危险因素的共同作用下致病[5]。糖尿病肾病早期可观察到肾脏血流动力学异常，表现为肾小球高灌注和高滤过,肾血流量和肾小球滤过率升高，且增加蛋白摄入后升高的程度更显著。血糖过高主要通过肾脏血流动力学改变以及代谢异常导致肾脏损害，其中代谢异常导致肾脏损害的机制主要有以下几方面：肾组织局部糖代谢紊乱，可通过非酶糖基化形成糖基化终末代谢产物；多元醇通路的激活；二酰基甘油-蛋白激酶c途径的激活；已糖胺通路代谢异常。上述代谢异常除参与早期肾小球高滤过，更为重要的是促进肾小球基底膜增厚和细胞外基质蓄积，促进肾间质纤维化和肾小球硬化。近年来的研究[4]发现，糖尿病肾病的发病机制除与上述因素有关外，同时可能与肾皮质中CTGF过度表达有关。CTGF是1991年Frazier等[6]首先在人脐静脉内皮细胞的条件培养基中发现的，它是一种由349个氨基酸组成、分子量为34～38 kD的富含半胱氨酸的分泌肽。最初研究[7]发现，CTGF对成纤维细胞具有趋化及促有丝分裂作用，随后发现CTGF还具有促细胞增殖、迁移及分化等作用。体内研究[8]发现，在早期糖尿病肾病阶段，CTGF可介导系膜基质的聚集和肾小球纤维化；在晚期糖尿病肾病中，CTGF可介导肾间质纤维化。肾小球纤维化是糖尿病肾病的重要病理学特征。因此认为CTGF在糖尿病肾病发病机制中发挥重要作用。

雷公藤多苷是由中药卫矛科雷公藤属植物提取精制而成，是目前临床上应用较多的非甾体类免疫抑制剂，已广泛用于治疗多种原发性和继发性肾小球疾病，对慢性肾小球肾炎、肾病综合征、过敏性紫癜性肾炎、糖尿病肾病和狼疮性肾炎等具有较好疗效，可显著减少尿蛋白排出。文献[9]报道，雷公藤多苷对细胞免疫和体液免疫均有抑制作用。但关于雷公藤多苷可减少肾脏病患者蛋白尿的分子机制并不十分清楚。在本研究中，实验组雷公藤多苷灌胃12周后，其24小时尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平明显降低，且低于对照组治疗后，说明雷公藤多苷可降低糖尿病大鼠蛋白尿，对大鼠肾功能有一定的保护作用。同时本研究还发现，实验组大鼠24小时蛋白尿与肾皮质CTGF表达水平存在明显的相关性，说明雷公藤多苷可能通过抑制肾脏中CTGF的表达来改善糖尿病大鼠肾功能。

参考文献：

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[7] Zhu B, Ma AQ, Yang L, et al. Atorvastatin attenuates bleomycin-induced pulmonary fibrosis via suppressing iNOS expression and the CTGF (CCN2)/ERK signaling pathway[J]. Int J Mol Sci, 2013,14(12):24476-24491.

[8] Kobayashi T, Okada H, Inoue T, et al. Tubular expression of connective tissue growth factor correlates with interstitial fibrosis in type 2 diabetic nephropathy[J]. Nephrol Dial Transplant, 2006,21(2):548-549.

[9] 李平,皇甫春荣,汤春辉.雷公藤多苷治疗小儿紫癜性肾炎疗效及对患儿免疫功能的影响[J].中国临床药理学杂志,2014,30(10):895-898.

收稿日期：(2015-07-24)

通信作者：王天生

基金项目：天津市卫生局科技 资助项目(2014247)。

中图分类号：R589.1

文献标志码：A

文章编号：1002-266X(2015)47-0031-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.47.011