HPLC法测定注射用阿扎胞苷的含量

通讯作用：冯中，男，工程师，研究方向：新药开发和研究，Tel:0539-5030526,E-mail:fengzhong22@163.com

HPLC法测定注射用阿扎胞苷的含量

聂德平，郑玉丽，冯中

(鲁南制药集团股份有限公司，山东 临沂 276000)

摘要：目的建立测定阿扎胞苷含量的高效液相色谱方法。方法采用Welch Ultimate XB-C18(4.6 mm×250 mm，3 μm)色谱柱，以0.02 mol·L-1磷酸氢二钾溶液(以磷酸溶液调pH至6.5)-甲醇(90∶10)为流动相，检测波长为243 nm，柱温为(15±2)℃。结果阿扎胞苷浓度在8.16～30.6 μg·mL-1浓度范围内线性良好(r=0.999 9)，平均回收率为98.97%，RSD为0.73%。结论本方法专属性强、准确度高，可用于阿扎胞苷的质量控制。

关键词：高效液相色谱法；注射用阿扎胞苷；含量

作者简介：聂德平，男，研究方向：新药开发和研究，E-mail:niedeping@163.com

中图分类号：R927.2文献标识码：A

Determination of Azacitidine for Injection by HPLC

NIEDe-ping,ZHENGYu-li,FENGZhong

(LunanPharmaceuticalCo.,Ltd.,Linyi276000,China)

Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of Azacitidine.MethodsWelch Ultimate XB-C18 column (4.6 mm×250 mm,3 μm)was used.The mobile phase consisted of 0.02 mol·L-1 dipotassium hydrogen phosphate solution(adjust pH to 6.5 by phosphoric acid)-methanol (90∶10).The detection wavelength was 243 nm and the column temperature was(15±2)℃.ResultsThe calibration curve was linear in the range of 8.16～30.6 μg·mL-1(r=0.999 9).The average recoveries was 98.97% with corresponding RSD of 0.73%.ConclusionThe method had strong specialization and high accuracy,and can be used for the quality control of azacitidine.

Key words:HPLC;Azacitidine for Injection;Determination

骨髓增生异常综合征(MDS)是一组以造血干细胞克隆性异常为特征的疾病，会导致造血功能衰竭，并有进展为急性髓细胞样白血病(AML)的高危险性。阿扎胞苷是美国食品药品监督管理局(FDA)批准的第一个DNA脱甲基化的嘧啶类抗代谢药物，也是治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的第一个有效药物，它通过恢复骨髓细胞的正常生长和分化而发挥作用[1～6]。

目前尚无文献报道阿扎胞苷含量测定的方法，按照《中国药典》2010年版[7]要求，首次建立了测定注射用阿扎胞苷含量的高效液相色谱(HPLC)法，结果表明，该方法准确可靠，灵敏度高，可用于测定注射用阿扎胞苷的含量。

1仪器与试药

高效液相色谱仪(Agilent 1200)；十万分之一电子天平(Mettler Toledo XS205);阿扎胞苷对照品(标定纯度98.8%，批号:130501)和注射用阿扎胞苷(批号:130901、130902、130903)均由山东新时代药业有限公司提供；磷酸氢二钾为分析纯，甲醇为色谱纯，水为超纯水。

2方法与结果

2.1色谱条件用Welch Ultimate XB-C18(4.6 mm×250 mm，3 μm)为填充剂，以0.02 mol·L-1的磷酸氢二钾溶液(用磷酸调pH值至6.5)-甲醇(90∶10)为流动相，柱温为(15±2)℃。检测波长为243 nm。理论塔板数按阿扎胞苷峰计算应不低于3 500，阿扎胞苷与相邻杂质峰的分离度应不小于2.0。

2.2溶液制备取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释成每1 mL中含阿扎胞苷0.02 mg的溶液，作为供试品溶液；取阿扎胞苷对照品适量，精密称定，同法制备作为对照品溶液；另取注射用阿扎胞苷空白辅料适量，同法配制作为阴性空白溶液。

2.3阴性试验按照上述色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性空白溶液各20 μL注入高效液相色谱仪，并记录色谱图，HPLC图谱见图1。实验结果表明：按阿扎胞苷峰计算理论板数为5 210；空白辅料和其他杂质对本品的含量测定未见干扰，说明本法专属性较好。

图1　供试品溶液HPLC色谱图

2.4线性与范围试验精密称取阿扎胞苷对照品100.2 mg，置于50 mL的容量瓶中，加流动相使溶解并定容至刻度，摇匀后作为对照品母液；精密量取上述储备液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5 mL，分别置于100 mL的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度C(μg·mL-1)对主峰峰面积A进行线性回归，得线性方程为：A=8.231C+0.214 2(r=0.999 9)。结果表明阿扎胞苷含量在8.16～30.6 μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.5精密度试验分别精密量取线性与范围试验项下的对照品储备液0.8、1.0和1.2 mL，各置于100 mL容量瓶中，用流动相稀释制成浓度分别为16.32(80%)、20.40(100%)和24.48 μg·mL-1(120%)的溶液，各3份，以峰面积计算精密度RSD分别为0.56%、0.49%、0.51%。

2.6回收率试验精密称取阿扎胞苷对照品8.14、10.02、12.28 mg和空白辅料各3份，分别置于500 mL容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀后作为供试品溶液。精密称取阿扎胞苷对照品适量，加流动相制成每1 mL中约含阿扎胞苷0.02 mg的溶液，作为对照品溶液；取上述两种溶液，依法测定，按外标法以峰面积计算回收率，平均回收率为98.97%，RSD为0.73%(n=9)。

2.7样品测定取注射用阿扎胞苷3批样品(批号:130901、130902、130903)，依法测定，含量分别为99.63%、99.48%和99.91%。

3讨论

大量的研究已经证明去甲基化药物的应用在恶性肿瘤治疗方面具有良好的应用前景,对于老年人和无法耐受常规化疗或失去移植时机的MDS/AML患者，阿扎胞苷可作为一种低毒而有效的治疗选择[5,6]。

阿扎胞苷中含有酰胺键[8]，在水中快速降解，故本品含量测定用样品应临用新配。在工业化生产过程中，应缩短生产时间，并控制生产环境在较低的温度，延缓水解的产生。本文建立了检测注射用阿扎胞苷含量的方法，该方法专属性强，精密度良好，准确度高，可用于工业化生产中注射用阿扎胞苷含量测定的过程控制。

参考文献：

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